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从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌体和溶血性均较强的多肽P1。目前在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，首先要做的是
| A．合成编码目的肽的DNA片段 |
| B．构建含目的肽DNA片段的表达载体 |
| C．依据P1氨基酸序列设计多条模拟肽 |
| D．筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽 |
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下图将某细菌基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的过程。 请据图回答：
（1）获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在逆转录酶的催化下，合成___________，然后在DNA聚合酶作用下合成___________，获得所需基因；二是根据目标蛋白质氨基酸序列，推测出___________，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的脱氧核苷酸序列，再通过化学方法合成所需基因。
（2）利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的物质有4种脱氧核苷三磷酸、模板、__________和_________，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。
（3）由A和载体B拼接形成C的过程称为_____________。
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根据基因工程的有关知识，回答下列问题。
（1）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是____________。
（2）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即_________和__________。
（3）若要在体外获得大量反转录产物，常采用____________技术。
（4）基因工程中除质粒外，____________和____________也可作为运载体。
（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是____________。
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某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）。有人将此质粒载体用BamH I酶切后，与用BamH I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：
（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有______________（答出两点即可）。
而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是______________；并且______________和______________的细胞也是不能区分的，其原因是_____________。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有_____________的固体培养基。
（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于_____________
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胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一。 图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B分别表示β-半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白)。请回答下列问题:
(1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是 _________ 。
(2)图1中启动子是 _________ 酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是 __________________ 。
(3)β-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达,可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于 __________________ 。
(4)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且β-半乳糖苷酶被切成多个肽段，这是因为 __________________ 。
(5)根据图2中胰岛素的结构,请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量。你的推测结果是 _________ ，理由是 __________________ 。
