下图是转基因绿色荧光鼠的培育过程，据图回答相关问题：
（1）现有GFP基因转录得到的mRNA，获取GFP基因通常采用 法。
（2）过程①是转基因技术的核心步骤，为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达，需要构建重组表达载体，重组表达载体包括复制原点、 等。
（3）③过程在使用合成培养基进行培养时，除了水、无机盐、氨基酸，葡萄糖、还要加入 等天然成分。
（4）②过程的受体细胞为 ，在转录水平上检测GFP基因是否表达的方法是 。
（5）④过程通过胚胎移植技术实现。移植前需要对代孕母鼠进行 处理，科学家欲获得多个相同性状的绿色荧光小鼠，则应该选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚，将其移人盛有操作液的培养皿中，然后用 技术处理。
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下图是转基因绿色荧光鼠的培育过程，据图回答相关问题：
（1）若需在短时间内获得较多的GFP基因，通常采用_________技术。
（2）过程①是转基因技术的核心步骤，为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达，需要把GFP基因片段正确插入表达载体的_________和___________之间。
（3）③过程在使用合成培养基进行培养时，通常需要加入 等天然成分。
（4）②过程通常采用的技术是____________________；在个体水平上检测GFP基因是否表达的方法是 。
（5）④过程通过 技术实现。科学家欲获得多个相同性状的绿色荧光小鼠，则应该选择发育良好、形态正常的桑椹胚或 ，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分割针进行分割。
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（8分）【生物—现代生物科技专题 】
下图是转基因绿色荧光鼠的培育过程，据图回答相关问题：
（1）若需在短时间内获得较多的GFP基因，通常采用_________技术。
（2）过程①是转基因技术的核心步骤，为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达，需要把GFP基因片段正确插入表达载体的_________和___________之间。
（3）③过程在使用合成培养基进行培养时，通常需要加入________等天然成分。
（4）②过程通常采用的技术是____________________；在个体水平上检测GFP基因是否表达的方法是________。
（5）④过程通过________技术实现。科学家欲获得多个相同性状的绿色荧光小鼠，则应该选择发育良好、形态正常的桑椹胚或 ________，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分割针进行分割。
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下图是转基因绿色荧光鼠的培育过程，据图回答相关问题：
（1）现有GFP基因转录得到的mRNA，获取GFP基因通常采用 法。
（2）过程①是转基因技术的核心步骤，为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达，需要构建重组表达载体，重组表达载体包括复制原点、 等。
（3）③过程在使用合成培养基进行培养时，除了水、无机盐、氨基酸，葡萄糖、还要加入 等天然成分。
（4）②过程的受体细胞为 ，在转录水平上检测GFP基因是否表达的方法是 。
（5）④过程通过胚胎移植技术实现。移植前需要对代孕母鼠进行 处理，科学家欲获得多个相同性状的绿色荧光小鼠，则应该选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚，将其移人盛有操作液的培养皿中，然后用 技术处理。
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[生物—选修3：现代生物科技专题]
绿色荧光蛋白（GFP）能在绿光的激发下发出荧光，用GFP基因作为目的基因可培育绿色荧光小鼠。请回答问题：
（1）在构建GFP基因表达载体的过程中需要用到______________酶。将基因表达载体导入小鼠受精卵中常用的方法是___________________，然后将导入成功的受精卵在体外培养成早期胚胎。
（2）早期胚胎通过_______________技术移入受体的子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用_________方法保存。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是____________________。
（3）由于荧光蛋白在自然界中不存在，所以科学家通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，该工程最终是通过设计________________________序列来完成的。
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研究发现，人体内的N基因是正常基因，无N基因的人会患严重肾病而早年夭折，科学家为治愈此病进行了相关探索。下图是对标记基因（绿色荧光蛋白基因，用GFP表示） 和N基因的酶切过程。请据图分析回答下列问题：
（1）切割基因时选用不同限制酶的目的是_______。切割完成后，需用DNA连接酶将两基因连接成GFP—N融合基因（以下称融合基因），该融合基因的上游基因为______________。
（2）若用质粒做运载体，需用图中的______酶切割质粒。在构建的融合基因表达载体中，调控融合基因转录的结构为________。
（3）将融合基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成的脂质体内并转染ES细胞，融合基因表达载体进入ES细胞的方式为_______________。用激光激发ES细胞并用荧光显微镜观察，可确定细胞内有________现象的ES细胞转染了融合基因。
（4）ES细胞在功能上具有___________，当培养在________上时，细胞只分裂不分化。将整合了融合基因的ES细胞，在培养液中培养并加入相应的分化诱导因子后，ES细胞进行____________，最终形成正常的肾小球足突细胞，可用于该肾病的治疗。
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分析回答有关生物工程中的问题：（8分）
日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图．据图回答：
（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是做为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶I的识别序列和切点是—G’GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的过程：________________________
_________。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_______________ ___。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_______________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（用数字表示）：_______ ___ 。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。
(5)在培养重组细胞时，培养液中通常含有_____________、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________等（至少答出三项）。
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1962年，日本科学家下村修从一种水母身上分离出绿色荧光蛋白（GFP）。1992年后，马丁、沙尔菲等人成功实现GFP基因在高等动植物细胞中的高效表达。下图是转基因绿色荧光鼠的培育过程：
（1）将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是（ ）
A．追踪目的基因在细胞内的复制过程
B．追踪目的基因插入到染色体上的位置
C．追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布
D．追踪目的基因编码的蛋白质的空间结构
（2）转基因绿色荧光鼠的培育过程中，首先需要通过PCR技术获得目的基因的大量拷贝。PER反应体系中，起模板作用的是＿＿＿＿＿＿，模板首端或末端和引物的结合是遵循＿＿＿＿＿＿＿＿＿原则，然后在耐热DNA聚合酶作用下进行复制。耐热DNA聚合酶能经受95℃高温，与高等动物细胞内DNA复制过程相比：PCR反应体系不需要＿＿＿＿＿＿酶的参与。
（3）图④过程称作＿＿＿＿＿＿。
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（8分）下图为培育转基因小鼠的部分过程示意图。请回答下列问题：
（1）若需在短时间内获得较多的外源基因，通常采用▲ 技术。
（2）图中的A细胞通常为▲ 细胞，将外源基因导入该细胞常用的方法是▲ 。
（3）仔鼠出生后可用其尾巴进行DNA检测，通过▲ 方法，检测出携带外源基因的小鼠。至于外源基因是否合成相应的蛋白质，可从转基因小鼠中提取蛋白质，并用相应的抗体进行▲ 杂交，若有杂交带出现，则表明小鼠体内的外源基因▲ 。
（4）在外源基因导入小鼠的A细胞时，外源基因可能随机地插入到该细胞的DNA中。这些细胞有的能发育成转基因小鼠，有的却死亡。请分析外源基因插入后导致有些A细胞死亡的最可能原因▲ 。
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（8分）请回答与转基因小鼠的培育过程相关的问题。
（1）获取外源基因常用的工具酶是________，若需在短时间内获得大量的某种外源基因，通常采用________技术。
（2）在供体雌鼠发情周期的某一阶段，用一激素处理促使卵巢里大量卵泡成熟并排出，称为超数排卵。在让供体母鼠与健康公鼠交配的同时，让代孕母鼠与结扎公鼠进行交配，使代孕母鼠与供体母鼠的生理条件达到同步或者一致，称为________处理。
（3）将基因表达载体导入受精卵常用的方法是________。
（4）将注射有外源DNA的受精卵移人发育培养液中继续培养至桑椹胚或________，再进行胚胎移植。进行早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种无机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素和________。
（5）待代孕母鼠产出幼仔后，取幼鼠尾巴细胞提取基因组DNA，可用________法等分析以确定是否为转基因鼠。
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绿色荧光蛋白（GFP）能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
（1）图中通过①、②过程形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是一G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是一↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的1个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
①请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端_________________________________。
②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端可以连接起来的原因是_________。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是____________________。
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_____________________。获得的转基因猪，可以解决的医学难题是________。
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是______________________（用序号表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）
④表达出蓝色荧光蛋白
（5）若科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白与原来的蛋白相比，第222位氨基酸发生了替换，则蓝色荧光蛋白基因与原来的蛋白基因相比，至少有___________个碱基对发生变化。
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