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（7分）天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用。研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转人酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精。请回答下列问题：
（1）将淀粉酶基因切割下来所用的工具是________，用________将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子，下一步将该DNA分子________，以完成工程菌的构建。
（2）若要鉴定淀粉酶基因是否插人酿酒酵母菌，可采用的检测方法是________；若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用________检测。
（3）用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb 即1000个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。
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（14分）回答有关生物工程的问题：
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生__末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_（相同不同）粘性末端的限制酶。
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是提供________特异性识别结合位点，驱动基因转录。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用___处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与__________杂交，该杂交技术称为_________。
（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的______中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将_____插入植物细胞的染色体___上。
(4)家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_________和___________之间。
(5)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。改PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和_________________。
(6)利用生物反应器培养家蚕细胞时，细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_________________增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。
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（12分）回答下列有关动物细胞培养的问题：
这种现象称为细胞的________。此时，瓶壁上形成的细胞层数是________，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是________。
⑵随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现衰老和死亡的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成________细胞，该种细胞的黏着性________，细胞膜表面糖蛋白的量________ 。
⑶检查某种毒物是否改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到________期的细胞用显微镜进行观察。
⑷在细胞培养过程中，通常在________条件下保存细胞，因为在这种条件下，细胞中________的活性降低，细胞的新陈代谢速率降低。
⑸给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作________进行攻击。
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（7分）下图可表示细胞融合技术的一些过程，请据图回答：
（1）若A、B细胞为动物细胞，从A、B细胞到C细胞的过程中，常用灭活的病毒作为诱导剂来诱导细胞融合。A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有________特性。
（2）若A、B细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶解法脱掉了________。这种酶可能是酶，由此生成的A和B细胞称为 ________。
（3）若A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为效应B淋巴细胞，那么D细胞称为________细胞。这种细胞既能________，又能产生________。
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