基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：
（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。
（2）已知DNA复制子链的延伸方向是5′→3′，图3中的A、B、C、D在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。
（3）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用____________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过______________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经____________处理过的_____________态的大肠杆菌中。
高二生物综合题中等难度题
基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：
（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。
（2）已知DNA复制子链的延伸方向是5′→3′，图3中的A、B、C、D在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生目的基因片段__________个。
（3）图4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对此质粒进行三种方法切割。第一种方法用其中一种酶、第二种方法用其中两种酶、第三种方法用其中三种酶分别切割，依次产生_______、_______、_____三种片段。
（4）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用____________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过______________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经____________处理过的_____________态的大肠杆菌中。
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下图中显示含目的基因的DNA片段、限制性核酸内切酶MunⅠ和EcoRⅠ的识别序列（其中箭头所指部位为限制性核酸内切酶的切割位点）、四种质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体的质粒是
A．①④ B．②③ C．① D．③
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒。回答下列问题：
（1）用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是_________之间相连的化学键，该化学键为_________。
（2）采用PCR扩增目的基因的原理是_________。图2中A、B、C、D4种单链DNA片段中，有_________两种引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。
（3）在构建目的基因表达载体时，用PstⅠ、EcoRⅠ两种酶同时切割目的基因和质粒，是为了防止一种酶切割时造成_________。不选用限制酶PstⅠ和HindⅢ同时对质粒和目的基因进行切割的原因是_________。
（4）目的基因进入受体细胞并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为_________；要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，经常采用的检测方法是_________技术。
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。请回答下列问题：
(1)若用图1所示的限制酶EcoR Ⅰ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是_____之间相连的化学键,该化学键为________。
(2)图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是________(多选)。
A．若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子
B．DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用于①处
C．若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种
D．就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基
(3)若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D 4种单链DNA片段中应选取________作为引物(DNA复制子链的延伸方向是5′→3′)。至少需要经过____次扩增才能得到等长的目的基因。
(4)为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是________。
(5)如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是__________。
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下图甲表示限制酶EcoR I的识别序列和切割位点，图乙表示DNA片段，图丙表示质粒及限制酶的切割位点。下列分析正确的是（ ）
A.目的基因被EcoR I切割后将产生序列为—TTAA的平末端
B.限制酶作用于图乙中的①，DNA连接酶作用于②和③
C.用HindⅢ和Pst I两种限制酶切割质粒，不会影响含目的基因的受体细胞的筛选
D.用PstI和EcoR I两种限制酶切割质粒，有利于目的基因与质粒正确连接
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如图是含某目的基因的DNA片段，据图回答下列问题：
（1）若用EcoRⅠ限制酶获取其中的目的基因，其识别核苷酸序列及切割位点是___________。该DNA片段经切割后共形成_______个_____________（填“平”或“黏性”）末端。
（2）若图示DNA片段中EcoRⅠ限制酶识别序列的一个碱基突然改变，则可能发生的情况是_______________________________________。
（3）使用________________连接目的基因和载体，连接的是图中________(填字母)部位的___________________（化学键）。
（4）为了避免目的基因和质粒在酶切后产生的末端发生任意连接，需用两种限制酶XbaI和SacI(两种酶切出的粘性末端不同)同时切割含目的基因的DNA片段和质粒。若用Ti质粒作为目的基因的载体，应选用下图中何种Ti质粒？ _______________
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图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________，不能表达的原因是____________。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和
___________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。
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图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________，不能表达的原因是____________。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和___________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。
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图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________，不能表达的原因是____________。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和___________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。
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图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________，不能表达的原因是____________。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和___________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。
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