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栾树适合生长于石灰石风化产生的钙基土壤中，抗恶劣环境的能力强，因此常用于矿区废弃地恢复过程中的种植。为了增加栾树的耐旱性，某科研所将耐旱基因导入栾树中，流程图如图所示，回答下列问题：

限制酶

BamHI

HindⅢ

EcoRI

识别序列及切割位点

G↓GATCC

CCTAG↑G

A↓AGCTT

TTCGA↑A

G↓AATTC

CTTAA↑G

（1）构建重组质粒的过程中，为了避免目的基因和载体切割后产生的末端发生任意链接，应选择限制酶_______________分别切割载体和含目的基因的DNA片段，完全酶切后产生的DNA片段分别为_____________，经DNA连接酶连接后，可以得到___________种重组质粒。

（2）如果将耐旱基因直接导入栾树细胞，一般情况下，栾树不会具有耐旱特性，原因是耐旱基因在栾树细胞中不能___________，也不能___________。

（3）耐盐基因应插入到农杆菌________________上，通过转化作用进入栾树细胞并整合到________，这是__________________________________的关键。

（4）要获得大量该耐盐基因，可利用PCR技术进行扩增，图2为引物对与模板结合示意图，扩增的第5次，需要_________个引物。表1为根据模板设计的两对引物序列，请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？________。

引物对 A

P AACTGAAATGTAGCTATC

P TTAAGTCCATTACTCTAG

引物对 B

S GTCCGACTAGTGGCTGTG

S AGCTGGCGTTTAGCCTCG

高二生物综合题中等难度题

少年，再来一题如何？
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