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图1表示含有目的基因D的DNA片段,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:

(1)用限制酶SmaⅠ完全切割图1的DNA片段,产物中至少有_______种不同DNA片段。

(2)为了提高实验成功率,需要通过PCR技术扩增目的基因,以获得大量的目的基因,在此过程中,要有一段_________________,以便根据这一序列合成引物。

(3)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是_______。在导入重组质粒后,为了筛选出含质粒的大肠杆菌,一般先用添加抗生素B的培养基进行培养,然后将生长的菌接种到只含______的培养基中培养,可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。

(4)假设用BamHⅠ切割DNA获取目的基因,用MboⅠ切割质粒,然后形成重组质粒,若要将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来,___________(是/否/不一定)能用BamHⅠ,为什么?__________。

高二生物综合题困难题

少年,再来一题如何?
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