荧光蛋白（GFP）在紫外光下会发出绿色荧光，某科研团队将GFP基因插入质粒P中构建了重组质粒载体P0，用于基因工程中基因表达载体（P1）的筛选和鉴定。部分过程如下图所示，下表为部分限制酶的识别序列及切割位点。请分析回答问题：
（1）过程①中，用EcoRV酶切割目的基因获得_________末端。
（2）过程②是利用_________技术，多次循环扩增DNA片段，经酶切产生带黏性末端的目的基因。该过程设计的引物5＇端序列必须是_________，以获得相应的黏性末端，便于P1的构建和筛选。
（3）过程③中，质粒P0需用限制酶_________切割，才能与目的基因在_________酶的作用下形成P1。
（4）为了筛选出含有质粒P1的菌落，需采用添加__________的培养基进行培养，在紫外光激发下_________（选填“发出”或“不发出”）绿色荧光的菌落，即为含有P1的菌落。
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荧光蛋白（GFP）在紫外光下会发出绿色荧光，某科研团队将GFP基因插入质粒P中构建了重组质粒载体P0，用于基因工程中基因表达载体（P1）的筛选和鉴定。部分过程如下图所示，下表为部分限制酶的识别序列及切割位点。请分析回答问题：
（1）过程①中，用EcoRV酶切割目的基因获得_________末端。
（2）过程②是利用_________技术，多次循环扩增DNA片段，经酶切产生带黏性末端的目的基因。该过程设计的引物5＇端序列必须是_________，以获得相应的黏性末端，便于P1的构建和筛选。
（3）过程③中，质粒P0需用限制酶_________切割，才能与目的基因在_________酶的作用下形成P1。
（4）为了筛选出含有质粒P1的菌落，需采用添加__________的培养基进行培养，在紫外光激发下_________（选填“发出”或“不发出”）绿色荧光的菌落，即为含有P1的菌落。
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从蓝光到紫外线都能使绿色荧光蛋白（GFP）激发，发出绿色萤光。研究人员将某病毒的外壳蛋白（L1）基因与GFP基因连接，获得了L1-GFP融合基因，并将其插入质粒PO，构建了重组质粒P1，。下图为P1部分结构和限制酶酶切位点的示意图，相关叙述正确的是（ ）
A.将L1-GFP融合基因插入质粒PO时，使用了E1、E2和E4三种限制性核酸内切酶
B.可借助基因工程、核移植技术、早期胚胎培养及胚胎移植技术获得转基因的克隆牛
C.可采用抗原-抗体杂交技术检测该融合基因是否存在于转基因牛的不同组织细胞中
D.若在某转基因牛皮肤细胞中观察到绿色荧光，则说明L1基因在该细胞中完成表达
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某种荧光蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L1）基因连接在GFP基因的5′末端，获得了L1-GFP融合基因（简称为甲）作目的基因，并将其插入质粒P0，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。回答下列问题：
（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒P0时，使用了两种限制酶，这两种酶是_________。使用这两种酶进行酶切是为了保证_______________的完整性，启动子能与_______特异性结合驱动转录开始。
（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了________和_________过程。
（3）为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的_____________移入牛的____________中、体外培养、胚胎移植等。
（4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的_________（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。
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某种荧光蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L1）基因连接在GFP基因的5′末端，获得了L1-GFP融合基因（简称为甲），并将其插入质粒P0，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。
回答下列问题：
（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒P0时，使用了两种限制酶，这两种酶是_________。使用这两种酶进行酶切是为了保证_______________，也是为了保证__________________。
（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了________和_________过程。
（3）为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的_____________移入牛的____________中、体外培养、胚胎移植等。
（4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的____________（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。
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某种荧光蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L1）基因连接在GFP基因的5′末端，获得了L1-GFP融合基因（简称为甲），并将其插入质粒P0，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中E1~E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。
回答下列问题：
（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒P0时，使用了两种限制酶，这两种酶是_________。使用这两种酶进行酶切是为了保证_______________，也是为了保证__________________。
（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了________和_________过程。
（3）为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的_____________移入牛的____________中、体外培养、胚胎移植等。
（4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的____________（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。
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将水母绿色荧光蛋白（GFP）基因的片段与目的基因拼接起来组成一个融合基因，再将该融合基因构建重组质粒后转入真核生物细胞，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。下列相关叙述正确的是（ ）
A.所有生物共用一套密码子是GFP基因与目的基因能够成功拼接的原因
B.融合基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能复制
C.利用该技术可以用于追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布
D.只要改变绿色荧光蛋白基因的1个核苷酸对，就不能检测到绿色荧光
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将某病毒的外壳蛋白（L1）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因连接，构建L-GFP融合基因，再将融合基因与质粒连接构建下图所示表达载体。图中限制酶E1~E4处理产生的黏性末端均不相同。下列叙述不正确的是（ ）
A.构建L1-GFP融合基因需要用到E1、E2、E4三种酶
B.E1、E4双酶切确保L1-GFP融合基因与载体的正确连接
C.GFP可用于检测受体细胞中目的基因是否表达
D.将表达载体转入乳腺细胞培育乳汁中含L1蛋白的转基因羊
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将某病毒的外壳蛋白（L1）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因连接，构建L-GFP融合基因，再将融合基因与质粒连接构建下图所示表达载体。图中限制酶E1~E4处理产生的黏性末端均不相同。下列叙述不正确的是（ ）
A.构建L1-GFP融合基因需要用到E1、E2、E4三种酶
B.E1、E4双酶切确保L1-GFP融合基因与载体的正确连接
C.GFP可用于检测受体细胞中目的基因是否表达
D.将表达载体转入乳腺细胞培育乳汁中含L1蛋白的转基因羊
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将某病毒的外壳蛋白（L1）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因连接，构建L-GFP融合基因，再将融合基因与质粒连接构建下图所示表达载体。图中限制酶E1~E4处理产生的黏性末端均不相同。下列叙述不正确的是（ ）
A.构建L1-GFP融合基因需要用到E1、E2、E4三种酶
B.E1、E4双酶切确保L1-GFP融合基因与载体的正确连接
C.GFP可用于检测受体细胞中目的基因是否表达
D.将表达载体转入乳腺细胞培育乳汁中含L1蛋白的转基因羊
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将某病毒的外壳蛋白（L1）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因连接，构建L-GFP融合基因，再将融合基因与质粒连接构建下图所示表达载体。图中限制酶E1~E4处理产生的黏性末端均不相同。下列叙述不正确的是（ ）
A.构建L1-GFP融合基因需要用到E1、E2、E4三种酶
B.E1、E4双酶切确保L1-GFP融合基因与载体的正确连接
C.GFP可用于检测受体细胞中目的基因是否表达
D.将表达载体转入乳腺细胞培育乳汁中含L1蛋白的转基因羊
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