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金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：
（1）从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过___________获得___________用于PCR扩增。
（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的___________位点。设计引物时需要避免引物之间形成___________，而造成引物自连。
（3）图中步骤1代表高温变性，可以使双链___________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。
（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏___________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但___________的引物需要设定更高的退火温度。
（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________（填序号：①升高退火温度②降低退火温度③重新设计引物）。
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金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：
（1）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的______________位点。设计引物时需要避免引物之间形成______________，而造成引物自连。
（2）图中步骤1代表______________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。
（3）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏引物与模板之间的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但____________的引物需要设定更高的退火温度。
（4）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_____(填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物)。
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金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计 划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净 化处理。PCR 扩增过程示意图如图，请回答下列问题：
（1）从高表达 MT 蛋白的生物组织中提取 mRNA，通过_____获得_____用于 PCR 扩增。
（2）设计一对与 MT 基因两端序列互补配对的引物（引物 1 和引物 2），为方便构建重组质粒， 在引物中需要增加适当的 _____ 位点。设计引物时需要避免引物之间_____，而造成引物自连。
（3）PCR 扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏_____的碱基配对。退 火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但_____的引物需要设定更高的退火温度。
（4）如果 PCR 反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_____（填序号：①升高退 火温度②降低退火温度③重新设计引物）。
（5）图中步骤 1 代表_____，步骤 2 代表退火，步骤 3 代表延伸。
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金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计 划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净 化处理。PCR 扩增过程示意图如图，请回答下列问题：
（1）从高表达 MT 蛋白的生物组织中提取 mRNA，通过_____获得_____用于 PCR 扩增。
（2）设计一对与 MT 基因两端序列互补配对的引物（引物 1 和引物 2），为方便构建重组质粒， 在引物中需要增加适当的 _____ 位点。设计引物时需要避免引物之间_____，而造成引物自连。
（3）PCR 扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏_____的碱基配对。退 火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但_____的引物需要设定更高的退火温度。
（4）如果 PCR 反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_____（填序号：①升高退 火温度②降低退火温度③重新设计引物）。
（5）图中步骤 1 代表_____，步骤 2 代表退火，步骤 3 代表延伸。
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金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过PCR技术扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，引物1和引物2分别与MT基因两端的序列互补。下列表述正确的是（ ）
A.引物1和引物2的序列相同，且序列已知
B.步骤1需要解旋酶，步骤2需要耐高温的DNA聚合酶，步骤3需要DNA连接酶
C.第三轮循环后，可扩增出2个所需要的目的基因分子
D.为方便构建重组质粒，可在引物中设计适当的限制性核酸内切酶位点
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研究人员将鱼的抗冻基因导入番茄体内，获得抗冻能力明显提高的番茄新品种。下列操作合理的是
A. 设计相应DNA单链片段作为引物，利用PCR技术扩增目的基因
B. 利用限制性核酸内切酶和DNA聚合酶构建基因表达载体
C. 将基因表达载体导入番茄体细胞之前需用Ca2+处理细胞
D. 运用DNA分子杂交技术检测抗冻基因是否在番茄细胞中表达
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研究人员将鱼的抗冻基因导入番茄体内，获得抗冻能力明显提高的番茄新品种。下列操作合理的是
A.设计相应DNA单链片段作为引物，利用PCR技术扩增目的基因
B.利用限制性核酸内切酶和DNA聚合酶构建基因表达载体
C.将基因表达载体导入番茄体细胞之前需用Ca2+处理细胞
D.运用DNA分子杂交技术检测抗冻基因是否在番茄细胞中表达
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【生物——现代生物科技专题】
下面是利用奶山羊乳腺生物反应器制备药用白蛋白的流程图，请回答下列问题：
（1）若要大量获得目的基因，可使用 扩增白蛋白基因，通过③构建的重组表达载体包括目的基因、启动子、终止子和 、复制原点等部分。该重组表达载体导入的受精卵性染色体组成应为 。
（2）如果需要通过①采集到更多的卵子，常用的激素是 ；通过②采集的精子需 后才能进行受精作用。
⑶在体外培养受精卵时，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供 （气体）以维持 。
（4）为使⑤能成功进行，需要对奶山羊C进行 处理，使之与供体的生理状况保持相同。
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图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。请回答下列问题：
（1）用Taq DNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为________的脱氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在________酶作用下，形成重组质粒P3。
（2）为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表(“＋”代表生长，“－”代表不生长)。根据表中结果判断，应选择的菌落是________(填表中字母)类，另外两类菌落质粒导入情况分别是______________________、________________________。
| 平板类型 菌落类型 | A | B | C |
| 无抗生素 | ＋ | ＋ | ＋ |
| 氨苄青霉素 | ＋ | － | ＋ |
| 四环素 | ＋ | － | － |
| 氨苄青霉素＋四环素 | ＋ | － | － |
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下列有关基因工程中载体的说法错误的是（ ）
A.PCR技术扩增目的基因需要用解旋酶解旋
B.基因表达载体的构建是基因工程的核心
C.图中启动子位于基因的首端，是核糖体识别和结合的部位
D.抗生素抗性基因的作用是作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了目的基因
