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多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟
中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程的方法减少
PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入到
番茄细胞中，得到转基因番茄。请据图回答：
（1） 提取目的基因：①若已获取PG的mRNA，
可通过获取PG基因。
②在该基因上游加结构A可确保基因的反向
转录，结构A上应具有的结合
位点。得到的目的基因两侧需人工合成
BamHI黏性末端。
已知BamHI的识别序列如图甲所示，请在图乙相应位置上，画出目的基因两侧的黏性末端。
③重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是。
（2）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有________的培养基进行筛选，与此同时，为能更好地达到培养目的，除营养物质外还需在培养基中加入。培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞是否发生现象，鉴别细胞壁是否再生。
（3）由于导入的目的基因能转录反义RNA，且能与________互补结合，抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄，则可确定转基因番茄成功。
（4）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用________技术，使子代保持转基因的优良性状。
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多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如下图。据图回答下列问题：
(1)若已获取PG的mRNA，可通过_____方法获取PG基因。PCR技术扩增目的基因的前提是_____，以便根据这一序列合成引物。
(2)该质粒含14000碱基对（14kb），若同时使用两种限制酶切割，产生的片段有5kb、7．5kb、1．5kb,则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是_____和_____。
(3)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有_____的培养基进行筛选。如果想通过实验鉴别细胞壁是否再生，可将其置于质量分数为30%的蔗糖溶液中，观察细胞_____现象进行判断。
(4)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与_____互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达，使番茄果实的保质期延长。
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普通番茄细胞中有多聚半乳糖醛酸酶基因（PG基因），可产生多聚半乳糖醛酸酶（PG），该酶能破坏细胞壁．番茄果实细胞中，PG合成显著增加，使番茄软化，不耐贮藏．科学家们利用基因工程技术在普通番茄中转入PG基因的反义基因抑制PG基因的表达，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种，过程如图
（1）过程①表示转录过程，发生在番茄细胞的 ______ （场所）中，过程②所需要的原料是 ______ 。
（2）过程③形成重组质粒需要的工具酶有 ______ ，Ti质粒上必须含有 ______ ，以便检测农杆菌细胞中是否导入了 含反义基因的重组质粒 。
（3）过程⑥中运用的技术手段是 ______ 技术．其中，愈伤组织要经过 ______ 过程最终形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加 ______ 。
（4）由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与 含反义基因的重组质粒 互补结合，直接阻碍了PG合成时的翻译过程，抑制PG基因的正常表达．最终使番茄番茄获得抗软化的性状．若 ____________（性状） ，则可确定转基因番茄培育成功。
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普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。目的基因和质粒（含卡那霉素抗性基因KmR）上有 Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、Hind Ⅲ、Alu Ⅰ 四种限制酶切割位点，操作流程如下图所示。请分析回答下列问题：
（1）本实验的目的基因指的是______， 在构建重组质粒时，为了确保目的基因和质粒定向连接，应该选用的限制酶是______。若用 Pst Ⅰ和Alu Ⅰ切割重组质粒，则完全酶切后将会出现______个序列不同的DNA片段。
（2）要利用培养基筛选已导入目的基因的番茄细胞，培养基中应加入______。图中步骤①→②所示技术的生物学原理是______。
（3）据图中转基因番茄细胞中的信息传递过程可知，由于______而直接阻碍了多聚半乳糖醛酸酶基因表达时的______过程，最终使番茄获得抗软化的性状。
（4）如果利用上述方法培育出的番茄不具抗软化性状，经分子杂交技术检测，发现细胞内有目的基因存在，但检测不到mRNA1分子，可能原因是目的基因上游缺少______。
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普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。目的基因和质粒（含卡那霉素抗性基因KmR）上有 Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、Hind Ⅲ、Alu Ⅰ 四种限制酶切割位点，操作流程如下图所示。请分析回答下列问题：
（1）本实验的目的基因指的是______， 在构建重组质粒时，为了确保目的基因和质粒定向连接，应该选用的限制酶是______。若用 Pst Ⅰ和Alu Ⅰ切割重组质粒，则完全酶切后将会出现______个序列不同的DNA片段。
（2）要利用培养基筛选已导入目的基因的番茄细胞，培养基中应加入______。图中步骤①→②所示技术的生物学原理是______。
（3）据图中转基因番茄细胞中的信息传递过程可知，由于______而直接阻碍了多聚半乳糖醛酸酶基因表达时的______过程，最终使番茄获得抗软化的性状。
（4）如果利用上述方法培育出的番茄不具抗软化性状，经分子杂交技术检测，发现细胞内有目的基因存在，但检测不到mRNA1分子，可能原因是目的基因上游缺少______。
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（10分）根据材料回答问题：
普通番茄中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制多聚半乳糖醛酸酶的合成，该酶能够破坏细胞壁，使番茄软化而不易储藏，科学家通过基因工程的方法，将一种抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，获得了抗软化番茄，保鲜时间长，口味也更好。主要机理是采用了相应的技术，使相关基因保持沉默。如上图所示：
（1）基因工程实施的第一步是获得目的基因，在本例中的目的基因是_______________。
第二步，____________________，需要用到的工具酶是_______________，在这一步工作中，通常用_______________作为基因的载体。第三步是_______________。
（2）图中①过程的进行要以_______________为原料。图中②过程的进行要以____________为原料，进行的场所是_______________。
（3）抗多聚半乳糖醛酸酶基因能抗番茄软化的机理是：抗多聚半乳糖醛酸酶基因转录产生的mRNA与多聚半乳糖醛酸酶基因转录产生的mRNA互补配对形成双链RNA，使后者不能在核糖体上完成_____________过程，阻止了_______________的合成。
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[生物--选修3：现代生物科技专题]
普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶（简称PG）基因，控制细胞产生PG，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗PG基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。请运用所学知识回答下列问题：
（1）该实验中的目的基因是_____________。若实验操作中所用的目的基因既含有内含子也含有启动子，则该基因取自_____________文库。基因工程操作的核心步骤是____________________。
（2）将含有目的基因的番茄细胞培养为番茄植株需借助___________技术，由细胞产生愈伤组织的过程称为_________________。
（3）抗PG基因是PG基因的反义基因，推测转基因番茄抗软化、保鲜时间长的原因为：抗PG基因产生的mRNA与PG基因产生的__________互补，形成了_________________，阻断了基因表达的__________过程，因此番茄细胞就不能产生__________________。
（4）运载体Ti质粒中含有____________序列，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上，若将得到的二倍体转基因番茄植株自交，F1中抗软化与不抗软化的植株数量比为3:1，则可推测目的基因整合到了__________________________________．
A．一对同源染色体的一条上
B．一对同源染色体的两条上
C．两条非同源染色体上
D．线粒体中的DNA上
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普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶（简称PG）基因，控制细胞产生PG，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗PG基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。请运用所学知识回答下列问题：
（1）该实验中的目的基因是__________。若实验操作中所用的目的基因既含有内含子也含有启动子，则该基因取自__________文库。基因工程操作的核心步骤是____________。
（2）将含有目的基因的番茄细胞培养为番茄植株需借助__________技术，由细胞产生愈伤组织的过程称为_______________。
（3）抗PG基因是PG基因的反义基因，推测转基因番茄抗软化、保鲜时间长的原因为：抗PG基因产生的mRNA与PG基因产生的____________互补，形成了____________，阻断了基因表达的__________过程，因此番茄细胞就不能产生_______________。
（4）运载体Ti质粒中含有__________序列，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上。若将得到的二倍体转基因番茄植株自交，F1中抗软化与不抗软化的植株数量比为3:1，则可推测目的基因整合到了_______________。
A．一对同源染色体的一条上 B．一对同源染色体的两条上
C．两条非同源染色体上 D．线粒体中的DNA上
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普通番茄细胞中含多聚半乳糖醛酸酶基因（用 A 表示），控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄易软化，不耐储藏。抗多聚半乳糖醛酸酶基因可以使番茄不再产生多聚半乳糖醛酸酶，从而使番茄长时间抗软化，容易储存和运输。下图是通过基因工程培育抗软化耐储藏番茄的过程及原理。请分析回答下列问题：
（1）普通番茄（AA）也可以通过________________ 育种的方法，最终获得基因型为aa 不能合成多聚半乳糖醛酸酶）的抗软化、耐储存的番茄。
（2）利用基因工程将目的基因导入植物细胞，目前采用最多的方法是________________，该方法中用到的目的基因载体是________________，目的基因需插入到该基因载体的________________ 上。
（3）将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞所需要的工具酶有________________。
（4）图 1 中获得导入抗多聚半乳糖醛酸酶基因的番茄细胞，需要经过________________ 技术获得转基因番茄，这个过程需要在________________ 条件下进行，细胞先经脱分化形成________________，再形成丛芽和根。
（5）根据图 2 分析抗多聚半乳糖醛酸酶基因能使番茄抗软化的原理是两个基因分别转录出的 mRNA ________________，从而阻断了________________ 过程。
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普通番茄细胞中含多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄易软化，不耐储藏。抗多聚半乳糖醛酸酶基因可以使番茄不再产生多聚半乳糖醛酸酶，从而使番茄长时间抗软化，容易储存和运输。下图是通过基因工程培育抗软化耐储藏番茄的过程及原理。请分析回答下列问题：
（1）基因工程的核心是构建 ，其组成包括启动子、终止子、目的基因和 等。
（2）将目的基因导入植物细胞最常用的方法是 。
（3）图1中获得导入抗多聚半乳糖醛酸酶基因的番茄细胞，需要经过 技术获得转基因番茄，为防止杂菌污染，这个过程需要在 条件下进行，细胞先经 形成愈伤组织，后经再分化形成丛芽和根。
（4）根据图2分析抗多聚半乳糖醛酸酶基因能使番茄抗软化的原理是两个基因分别转录出的mRNA结合形成 ，从而阻断了多聚半乳糖醛酸酶基因的表达过程。
