多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如下图。据图回答下列问题：
(1)若已获取PG的mRNA，可通过_____方法获取PG基因。PCR技术扩增目的基因的前提是_____，以便根据这一序列合成引物。
(2)该质粒含14000碱基对（14kb），若同时使用两种限制酶切割，产生的片段有5kb、7．5kb、1．5kb,则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是_____和_____。
(3)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有_____的培养基进行筛选。如果想通过实验鉴别细胞壁是否再生，可将其置于质量分数为30%的蔗糖溶液中，观察细胞_____现象进行判断。
(4)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与_____互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达，使番茄果实的保质期延长。
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多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟
中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程的方法减少
PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入到
番茄细胞中，得到转基因番茄。请据图回答：
（1） 提取目的基因：①若已获取PG的mRNA，
可通过获取PG基因。
②在该基因上游加结构A可确保基因的反向
转录，结构A上应具有的结合
位点。得到的目的基因两侧需人工合成
BamHI黏性末端。
已知BamHI的识别序列如图甲所示，请在图乙相应位置上，画出目的基因两侧的黏性末端。
③重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是。
（2）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有________的培养基进行筛选，与此同时，为能更好地达到培养目的，除营养物质外还需在培养基中加入。培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞是否发生现象，鉴别细胞壁是否再生。
（3）由于导入的目的基因能转录反义RNA，且能与________互补结合，抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄，则可确定转基因番茄成功。
（4）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用________技术，使子代保持转基因的优良性状。
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多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如下图。据图回答下列问题：
(1)若已获取PG的mRNA，可通过_____方法获取PG基因。PCR技术扩增目的基因的前提是_____，以便根据这一序列合成引物。
(2)该质粒含14000碱基对（14kb），若同时使用两种限制酶切割，产生的片段有5kb、7．5kb、1．5kb,则只用限制酶BamHⅠ切割时产生的片段长度分别是_____和_____。
(3)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有_____的培养基进行筛选。如果想通过实验鉴别细胞壁是否再生，可将其置于质量分数为30%的蔗糖溶液中，观察细胞_____现象进行判断。
(4)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与_____互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达，使番茄果实的保质期延长。
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普通番茄细胞中有多聚半乳糖醛酸酶基因（PG基因），可产生多聚半乳糖醛酸酶（PG），该酶能破坏细胞壁．番茄果实细胞中，PG合成显著增加，使番茄软化，不耐贮藏．科学家们利用基因工程技术在普通番茄中转入PG基因的反义基因抑制PG基因的表达，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种，过程如图
（1）过程①表示转录过程，发生在番茄细胞的 ______ （场所）中，过程②所需要的原料是 ______ 。
（2）过程③形成重组质粒需要的工具酶有 ______ ，Ti质粒上必须含有 ______ ，以便检测农杆菌细胞中是否导入了 含反义基因的重组质粒 。
（3）过程⑥中运用的技术手段是 ______ 技术．其中，愈伤组织要经过 ______ 过程最终形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加 ______ 。
（4）由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与 含反义基因的重组质粒 互补结合，直接阻碍了PG合成时的翻译过程，抑制PG基因的正常表达．最终使番茄番茄获得抗软化的性状．若 ____________（性状） ，则可确定转基因番茄培育成功。
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[生物--选修3：现代生物科技专题]
普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶（简称PG）基因，控制细胞产生PG，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗PG基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。请运用所学知识回答下列问题：
（1）该实验中的目的基因是_____________。若实验操作中所用的目的基因既含有内含子也含有启动子，则该基因取自_____________文库。基因工程操作的核心步骤是____________________。
（2）将含有目的基因的番茄细胞培养为番茄植株需借助___________技术，由细胞产生愈伤组织的过程称为_________________。
（3）抗PG基因是PG基因的反义基因，推测转基因番茄抗软化、保鲜时间长的原因为：抗PG基因产生的mRNA与PG基因产生的__________互补，形成了_________________，阻断了基因表达的__________过程，因此番茄细胞就不能产生__________________。
（4）运载体Ti质粒中含有____________序列，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上，若将得到的二倍体转基因番茄植株自交，F1中抗软化与不抗软化的植株数量比为3:1，则可推测目的基因整合到了__________________________________．
A．一对同源染色体的一条上
B．一对同源染色体的两条上
C．两条非同源染色体上
D．线粒体中的DNA上
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普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶（简称PG）基因，控制细胞产生PG，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗PG基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。请运用所学知识回答下列问题：
（1）该实验中的目的基因是__________。若实验操作中所用的目的基因既含有内含子也含有启动子，则该基因取自__________文库。基因工程操作的核心步骤是____________。
（2）将含有目的基因的番茄细胞培养为番茄植株需借助__________技术，由细胞产生愈伤组织的过程称为_______________。
（3）抗PG基因是PG基因的反义基因，推测转基因番茄抗软化、保鲜时间长的原因为：抗PG基因产生的mRNA与PG基因产生的____________互补，形成了____________，阻断了基因表达的__________过程，因此番茄细胞就不能产生_______________。
（4）运载体Ti质粒中含有__________序列，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上。若将得到的二倍体转基因番茄植株自交，F1中抗软化与不抗软化的植株数量比为3:1，则可推测目的基因整合到了_______________。
A．一对同源染色体的一条上 B．一对同源染色体的两条上
C．两条非同源染色体上 D．线粒体中的DNA上
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番茄不易储存与多聚乳糖醛酸酶（PG）有关，科学家将人工合成的反义多聚乳糖醛酸酶基因导入番茄，获得转基因延熟番茄，是番茄的存储时间大大延长。已知质粒上有Pst I、Sma I 、Hind III 、 Alu I 等四种限制酶切割位点。下图是转基因延熟番茄培育过程的示意图（a mpr为抗氨苄青霉素基因），其中1~ 4是培育过程中的相关步骤，I 、II是相关结构或细胞。请据图作答。
例1 在构建含反义多聚乳糖醛酸酶基因的表达载体时，若用Sma I与Pst I完全酶切含目的基因的DNA后，反应管中有________种片段。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，实际操作中，一般应选用限制酶___________，分别同时对_____________进行切割。
例2 通过农杆菌转化法，可将带有目的基因的T-DNA（重组质粒）导入番茄细胞。导入番茄细胞的目的基因，通常插入到细胞核某一条染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性得以____________________。上述途径所获得的番茄，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是________。
(3) 为了检测番茄细胞是否导入了目的基因，可以采用特定的DNA分子探针进行检测，也可以向植物组织培养基中加入_______________，以筛选获得导入上述重组质粒的特定受体细胞。
向正常番茄细胞内导入反义多聚乳糖醛酸酶基因后，发现多聚乳糖醛酸酶基因能正常转录形成mRNA，但细胞内却不再合成多聚乳糖醛酸酶（PG），其原因最可能是____________。
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番茄营养丰富，是人们喜爱的一类果蔬。但普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因（PG），控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。为满足人们的生产生活需要，科学家们通过基因工程技术，给普通番茄细胞中导入抗多聚半乳糖醛酸酶基因（抗PG），培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种。操作流程如图所示，请据图回答：
（1）过程①通常会用两种限制酶切割目的基因的原因是________________________ 。
（2）经过程②可获得三种土壤农杆菌，除依据质粒上的____________筛选出的含重组DNA的土壤农杆菌外，还有____________、____________的两种土壤农杆菌。
（3）从图中可见，mRNA1和mRNA2的结合直接导致了____________无法合成，最终使番茄获得抗软化的性状。
（4）目的基因能否在番茄细胞内稳定存在的关键是____________。
（5）如果利用上述方法培育出的蕃茄不具抗软化性状，经分子杂交技术检测，发现细胞内有抗PG存在，但检测不到mRNA2分子，可能原因是目的基因（抗PG）上游缺少____________。
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普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。目的基因和质粒（含卡那霉素抗性基因KmR）上有 Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、Hind Ⅲ、Alu Ⅰ 四种限制酶切割位点，操作流程如下图所示。请分析回答下列问题：
（1）本实验的目的基因指的是______， 在构建重组质粒时，为了确保目的基因和质粒定向连接，应该选用的限制酶是______。若用 Pst Ⅰ和Alu Ⅰ切割重组质粒，则完全酶切后将会出现______个序列不同的DNA片段。
（2）要利用培养基筛选已导入目的基因的番茄细胞，培养基中应加入______。图中步骤①→②所示技术的生物学原理是______。
（3）据图中转基因番茄细胞中的信息传递过程可知，由于______而直接阻碍了多聚半乳糖醛酸酶基因表达时的______过程，最终使番茄获得抗软化的性状。
（4）如果利用上述方法培育出的番茄不具抗软化性状，经分子杂交技术检测，发现细胞内有目的基因存在，但检测不到mRNA1分子，可能原因是目的基因上游缺少______。
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普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。目的基因和质粒（含卡那霉素抗性基因KmR）上有 Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、Hind Ⅲ、Alu Ⅰ 四种限制酶切割位点，操作流程如下图所示。请分析回答下列问题：
（1）本实验的目的基因指的是______， 在构建重组质粒时，为了确保目的基因和质粒定向连接，应该选用的限制酶是______。若用 Pst Ⅰ和Alu Ⅰ切割重组质粒，则完全酶切后将会出现______个序列不同的DNA片段。
（2）要利用培养基筛选已导入目的基因的番茄细胞，培养基中应加入______。图中步骤①→②所示技术的生物学原理是______。
（3）据图中转基因番茄细胞中的信息传递过程可知，由于______而直接阻碍了多聚半乳糖醛酸酶基因表达时的______过程，最终使番茄获得抗软化的性状。
（4）如果利用上述方法培育出的番茄不具抗软化性状，经分子杂交技术检测，发现细胞内有目的基因存在，但检测不到mRNA1分子，可能原因是目的基因上游缺少______。
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（10分）根据材料回答问题：
普通番茄中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制多聚半乳糖醛酸酶的合成，该酶能够破坏细胞壁，使番茄软化而不易储藏，科学家通过基因工程的方法，将一种抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，获得了抗软化番茄，保鲜时间长，口味也更好。主要机理是采用了相应的技术，使相关基因保持沉默。如上图所示：
（1）基因工程实施的第一步是获得目的基因，在本例中的目的基因是_______________。
第二步，____________________，需要用到的工具酶是_______________，在这一步工作中，通常用_______________作为基因的载体。第三步是_______________。
（2）图中①过程的进行要以_______________为原料。图中②过程的进行要以____________为原料，进行的场所是_______________。
（3）抗多聚半乳糖醛酸酶基因能抗番茄软化的机理是：抗多聚半乳糖醛酸酶基因转录产生的mRNA与多聚半乳糖醛酸酶基因转录产生的mRNA互补配对形成双链RNA，使后者不能在核糖体上完成_____________过程，阻止了_______________的合成。
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