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蛛丝蛋白具有强度高，韧性大等特点，在医学领域有着诱人的前景。构建蛛丝蛋白基因表达载体将其导入牛的受精卵中，可从牛的乳汁中获取蛛丝蛋白。回答问题：
（1）从雌牛的卵巢中采集的卵母细胞需要培养到______期才能进行体外受精；体外受精前，需对精子进行______处理。当一个精子进入卵细胞后会激发卵子发生反应，如透明带反应和卵细胞膜反应等，其意义是_______________________________。
（2）体外受精后产生的受精卵应移入发育培养液中继续培养，培养过程中应定期更换______，目的是清除代谢产物，防止细胞代谢积累对细胞造成伤害。在胚胎移植前，需要取囊胚____的细胞做DNA分析进行性别鉴定，进而选用雌性胚胎进行移植，胚胎移植的实质是_____________。
（3）为了进一步扩大繁殖规模，可通过____________技术获得同卵多胎，该技术的关键是________________________。
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要培育乳汁中含有人干扰素的转基因牛，先要构建目的基因表达载体，然后用显微注射技术将该基因表达载体导入牛的
A. 乳腺细胞 B. 去核的卵母细胞
C. 受精卵 D. 胚胎干细胞
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研究人员将蜘蛛的蛛丝蛋白基因导入羊体内，得到“蜘蛛羊”，使羊的乳汁中含有蛛丝蛋白。高强度的蛛丝蛋白在工业上有许多应用，操作流程如下图。下列叙述正确的是（ ）
A.图中的受体细胞可为来自雌羊的原肠胚细胞
B.供体胚胎的遗传特性植入受体后会发生改变
C.受体细胞在体外培养过程中，多数细胞的基因型会发生改变
D.胚胎干细胞核移植结合基因工程等技术可得到具有新性状的克隆动物
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电影中，“蜘蛛侠”能产生高强度的蜘蛛丝，现实中的基因工程也创造出“蜘蛛羊”，该羊的乳汁中含有蛛丝蛋白，高强度的蛛丝蛋白可用于许多重要的特种工业领域，请回答：
(1)为保证实验成功，产生蛛丝蛋白的基因需要从_________ (基因组/cDNA)文库中获取，并与______________等调控组件重组在一起，然后与载体相连构建成为表达载体；再通过_________等方法，将表达载体导入羊的______________，获得重组细胞。
(2)我们对细胞所需的营养条件还没有完全研究清楚，所以在早期胚胎的培养中，往往还需要添加__________。
(3)细胞培养过程中，将细胞置于5%CO2气体环境中，CO2的作用是_______。
(4)如果利用DNA分子杂交原理检测目的基因是否导入受体细胞，应该用___________________作为探针。
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电影中，“蜘蛛侠”能产生高强度的蜘蛛丝，现实中的基因工程也创造出了“蜘蛛羊”，该羊的乳汁中含有蛛丝蛋白，高强度的蛛丝蛋白可用于许多重要的特种工业领域。请回答：
（1）为保证实验成功，产生蛛丝蛋白的基因最好从 （基因组/cDNA)文库中获取。若要获得大量的目的基因片段，可采用进行扩增，扩增过程需使用 酶。
（2）在构建含蛛丝蛋白基因表达载体时，需使用的工具酶有限制酶和DNA连接酶，目的基因应与 基因的启动子等调控组件组合在一起，启动子是 识别和结合的位点；构建完成的基因表达载体需通过显微注射技术导人羊的 ，获得重组细胞。
（3）若所得到的“蜘蛛羊”乳汁中没有检测到蛛丝蛋白，应先采用 技术检测“蜘蛛羊”乳腺细胞中是否含有 ；若已确认此步成功，则应该继续检测是否 。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是____。科研人员还在两种引物的一端分别加上了__________和___________序列，以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是_________。
A．Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
B．目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
C．酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同
D．酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
（2）步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有___________，步骤③中需先用______处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
（3）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过________获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是___________。
（4）用烟草花叶病毒对获得的转基因烟草和普通烟草进行接种实验，接种后第19天对照组植株进入病情指数（植物受病毒侵染的严重程度）为100的平台期，而转基因植株在第______天才进入平台期，但此时的病情指数为79。说明转基因烟草植株对病毒的侵染表现出一定的抗性，但抗性较低，可能的原因有__________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是__________的特定碱基排列顺序。科研人员还在两种引物的一端分别加上了__________和___________（填DNA序列），以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是_________。
A．Ti质粒内，限制酶的切割位点应位于T-DNA内
B．目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
C．酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同
D．酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
（2）步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的元件还可以有____________，步骤③中需先用____________处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
（3）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过_________获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是①________________________②_____________________________。
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人乳铁蛋白是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白，主要由乳腺上皮细胞表达和分泌。它不仅参与铁的转运，而且具有广谱抗菌、抗氧化、抗癌、调节免疫系统等强大生物功能，被认为是一种新型抗菌、抗癌药物和极具开发潜力的食品和饲料添加剂。下图表示用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程，请据图回答：
（1）在构建重组质粒时，为防止目的基因和载体自身环化，应先选用__________（填具体类型）限制性核酸内切酶处理人乳铁蛋白基因和载体，然后用DNA连接酶处理得到重组质粒。
（2）在进行①操作过程中，为了获得更多的卵子，应对良种母奶牛进行__________处理，从公牛中获得的精子需要经过__________才能与卵细胞结合。
（3）过程③常用__________方法将重组质粒导入到受精卵中。图中采用的生物工程技术④和⑥分别是__________和胚胎移植，前者__________（填需要或不需要）添加胚胎成纤维细胞，后者在操作前通常取囊胚期的滋养层细胞进行__________。
（4）对代孕母牛要进行__________处理，使之与供体的生理状况保持相同，转基因奶牛成功的标志是__________，由此得到的转基因奶牛__________（填属于或不属于）克隆动物。
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请回答下列有关胚胎工程和基因工程方面的问题：
（1）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行______处理。卵子受精的重要标志是______。
（2）若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，要将干扰素基因与启动子连接在一起构建基因表达载体，并将基因表达载体导入牛的______（填“受精卵”或“乳腺细胞”）。
（3）通常奶牛每次排出一枚卵母细胞，采用______激素处理可使其_____。在核移植过程中，受体细胞通常是位于___________期的卵母细胞，在核移植前需要进行______处理。
（4）在胚胎移植前，通过______技术可获得较多胚胎，进行该项技术时，应选用发育良好的、形态正常的______。
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草鱼生长激素基因可促进鲤鱼生长，利用精子载体法（将构建好的表达载体与精子混合培养，使外源基因进入精子内），可将草鱼生长激素基因导入鲤鱼受精卵细胞，培育转基因鲤鱼。请回答。
（1）基因工程中，一个基因表达载体的组成，除了目的基因以外，还必须有____________、以及____________、____________。
（2）作为载体的精子取自____鱼。
（3）可通过检测鲤鱼体内激素增加量或____________来检测目的基因是否成功表达。
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