如图表示构建基因表达载体所用的质粒与目的基因。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。据图分析，下列叙述正确的是（ ）
A.使用限制酶Ⅰ、Ⅱ切割可以防止目的基因自身环化
B.限制酶Ⅱ可以切割两种标记基因，所以没有特异性
C.可以用限制酶Ⅱ切割质粒、限制酶工切割目的基因
D.将目的基因插入到四环素抗性基因内完成构建
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如图表示构建基因表达载体所用的质粒与目的基因。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。据图分析，下列叙述正确的是（ ）
A.使用限制酶Ⅰ、Ⅱ切割可以防止目的基因自身环化
B.限制酶Ⅱ可以切割两种标记基因，所以没有特异性
C.可以用限制酶Ⅱ切割质粒、限制酶工切割目的基因
D.将目的基因插入到四环素抗性基因内完成构建
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如图表示构建基因表达载体所用的质粒与目的基因。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。据图分析，下列叙述正确的是（ ）
A.使用限制酶Ⅰ、Ⅱ切割可以防止目的基因自身环化
B.限制酶Ⅱ可以切割两种标记基因，所以没有特异性
C.可以用限制酶Ⅱ切割质粒、限制酶工切割目的基因
D.将目的基因插入到四环素抗性基因内完成构建
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基因工程中，需使用特定的酶处理目的基因和质粒，以便构建表达载体。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。下列操作正确的是
A．该质粒分子由四种碱基组成
B．构建该表达载体的工具酶是限制酶和耐高温DNA聚合酶
C．本实验应采用GeneⅡ作为载体的标记基因
D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。请回答下列问题：
(1)若用图1所示的限制酶EcoR Ⅰ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是_____之间相连的化学键,该化学键为________。
(2)图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是________(多选)。
A．若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子
B．DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用于①处
C．若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种
D．就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基
(3)若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D 4种单链DNA片段中应选取________作为引物(DNA复制子链的延伸方向是5′→3′)。至少需要经过____次扩增才能得到等长的目的基因。
(4)为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是________。
(5)如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是__________。
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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒。回答下列问题：
（1）用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是_________之间相连的化学键，该化学键为_________。
（2）采用PCR扩增目的基因的原理是_________。图2中A、B、C、D4种单链DNA片段中，有_________两种引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。
（3）在构建目的基因表达载体时，用PstⅠ、EcoRⅠ两种酶同时切割目的基因和质粒，是为了防止一种酶切割时造成_________。不选用限制酶PstⅠ和HindⅢ同时对质粒和目的基因进行切割的原因是_________。
（4）目的基因进入受体细胞并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为_________；要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，经常采用的检测方法是_________技术。
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基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：
（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。
（2）已知DNA复制子链的延伸方向是5′→3′，图3中的A、B、C、D在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生目的基因片段__________个。
（3）图4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对此质粒进行三种方法切割。第一种方法用其中一种酶、第二种方法用其中两种酶、第三种方法用其中三种酶分别切割，依次产生_______、_______、_____三种片段。
（4）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用____________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过______________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经____________处理过的_____________态的大肠杆菌中。
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转基因生物可用于生产人类所需要的药用蛋白，如激素、抗体、疫苗、酶等。下图甲是通过生物工程培育能产生人胰岛素的烟草的过程。请据图回答下列问题：
（1）基因工程的核心步骤是___________（填字母）。此过程所需的工具酶是___________。
（2）下图乙是载体和反转录得到的胰岛素基因的片段，已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。Gene Ⅰ和Gene Ⅱ为质粒上的标记基因，根据图示分析，应用限制酶_____切割质粒，用限制酶________切割目的基因。构建的重组质粒中，除含有外源基因、标记基因外，还必须含有________________。
（3）B过程中，常用_________处理使细菌成为感受态细胞，从而利于重组质粒的导入。
（4）如果从分子水平检测人胰岛素基因是否表达成功，可以采用__________方法。
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已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—；限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。据图判断下列操作正确的是
A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
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基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC— ，限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。根据图示判断下列操作正确的是
A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
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基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC— ，限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。根据图示判断下列操作正确的是
A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
B．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
C．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
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基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是－↓GATC－。根据图示,判断下列操作正确的是
A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
B．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
C．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
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