农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插入到被侵染植物的染色体DNA中。研究者将下图中...

农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插入到被侵染植物的染色体DNA中。研究者将下图中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板进行PCR，扩增岀T-DNA插入位置两侧的未知序列，以此可确定T-DNA插入的具体位置。下列说法不正确的是（　　 ）

注：子链从引物的3/端开始延伸

A.PCR扩增依据的是DNA分子双链复制的原理

B.进行PCR扩增需要的酶有解旋酶和热稳定DNA聚合酶

C.利用图中的引物②、③组合可扩增岀两侧的未知序列

D.通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定T-DNA的插入位置

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水稻穗粒数可影响水稻产量。农杆菌Ti质粒上的T-DNA序列，可以从农杆菌中转移并随机插入到被侵染植物的核基因组中，导致被插入的基因功能丧失。研究者用此方法构建水稻突变体库，并从中筛选到穗粒数异常突变体进行了相关研究。

（1）研究者分别用EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ三种限制酶处理突变体的总DNA，用Hind Ⅲ处理野生型的总DNA，处理后进行电泳，使长短不同的DNA片段______。电泳后的DNA与DNA分子探针（含放射性同位素标记的T-DNA片段）进行杂交，得到下图所示放射性检测结果。

①由于杂交结果中____________________________________________，表明T-DNA成功插入到水稻染色体基因组中。（注：T-DNA上没有EcoRⅠ、Hind Ⅲ、BamHⅠ三种限制酶的酶切位点）

②不同酶切结果，杂交带的位置不同，这是由于_____________________________________。

③由实验结果断定突变体为T-DNA单个位点插入，依据是____________________________________。

（2）研究者用某种限制酶处理突变体的DNA（如下图所示），用__________将两端的黏性末端连接成环，以此为模板，再利用图中的引物__________组合进行PCR，扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列。经过与野生型水稻基因组序列比对，确定T-DNA插入了2号染色体上的B基因中。

（3）研究发现，该突变体产量明显低于野生型，据此推测B基因可能_______（填“促进”或“抑制”）水稻穗粒的形成。育种工作者希望利用B基因，对近缘高品质但穗粒数少的低产水稻品系2进行育种研究，以期提高其产量，下列思路最可行的一项是______。

a．对水稻品系2进行60Co照射，选取性状优良植株

b．培育可以稳定遗传的转入B基因的水稻品系2植株

c．将此突变体与水稻品系2杂交，筛选具有优良性状的植株

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土壤农杆菌含有一个大型的Ti质粒，在侵染植物细胞的过程中，其中的T-DNA片段转入植物的基因组。若想用基因工程手段获取抗旱植株，以下分析不合理的是

A.若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，目的基因的插入位置应该在T-DNA片段内，且要保证复制起始点和用于转移T-DNA的基因片段不被破坏

B.将重组Ti质粒导入土壤农杆菌中时，可以用钙离子处理细菌

C.用含有重组Ti质粒的土壤农杆菌感染植物细胞后，可通过植物组织培养技术得到具有抗旱基因的植物

D.若能在植物细胞中检测到抗旱基因，则说明该基因工程项目获得成功

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在植物基因工程中，用土壤农杆菌中的Ti质粒作为运载体，把目的基因重组导入Ti 质粒上的T-DNA片段中，再将重组的T-DNA插入植物细胞的染色体DNA中。

（1）基因工程是指在体外通过人工＿＿＿＿和“拼接”等方法，对生物的基因进行＿＿＿＿和重新组合，然后导入受体细胞并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类所需的基因产物的技术。该技术又称为＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）科学家在进行上述基因操作时，要用同一种＿＿＿＿分别切割质粒和目的基因，质粒和目的基因的黏性末端就可通过＿＿＿＿＿＿＿＿原则而黏合。

（3）将携带抗除草剂基因的重组Ti质粒导入二倍体油菜细胞，经培养、筛选获得一株有抗除草剂特性的转基因植株。经分析，该植株含有一个携带目的基因的T-DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，在该转基因植株自交F₁代中，仍具有抗除草剂特性的植株占总数的＿＿＿＿，原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（4）种植上述转基因油菜，它所携带的目的基因可以通过花粉传递给近缘物种，造成“基因污染”。如果把目的基因导入叶绿体DNA中，就可以避免“基因污染”，原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

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下列关于质粒的说法，正确的是

A.质粒是能自我复制的细菌拟核内的环状DNA

B.质粒上的抗生素抗性基因有利于质粒与外源基因的连接

C.利用农杆菌中Ti质粒的T—DNA，可以使目的基因插入到植物细胞的染色体DNA上

D.基因工程中用作载体的质粒都是天然质粒

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农杆菌中的Ti质粒是植物基因工程中常用的载体，下列有关叙述正确的是（　　 ）

A.Ti质粒是能够自主复制的单链DNA

B.Ti质粒要有限制酶的识别位点和标记基因

C.目的基因应插入T-DNA片段外，以防止破坏T-DNA

D.Ti质粒上的基因可全部整合到受体细胞染色体上

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土壤农杆菌含有一个大型的Ti质粒(如图所示)，在侵染植物细胞的过程中，其中的T－DNA片段转入植物的基因组。若想用基因工程并通过土壤农杆菌向某种植物中导入抗旱基因，以下分析不合理的是

A. 若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，要保证复制原点和用于转移T－DNA的基因片段不被破坏

B. 农杆菌转化法自然条件下用于将目的基因导入双子叶植物和裸子植物

C. 用含有重组Ti质粒的土壤农杆菌去感染植物细胞，可以通过植物组织培养技术培育出具有抗旱基因的植物

D. 若能够在植物细胞中检测到抗旱目的基因，则说明该基因工程项目获得成功

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土壤农杆菌含有一个大型的Ti质粒(如图所示)，在侵染植物细胞的过程中，其中的T－DNA片段转入植物的基因组。若想用基因工程并通过土壤农杆菌向某种植物中导入抗旱基因，以下分析不合理的是

A. 若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，要保证复制原点和用于转移T－DNA的基因片段不被破坏

B. 农杆菌转化法自然条件下用于将目的基因导入双子叶植物和裸子植物

C. 用含有重组Ti质粒的土壤农杆菌去感染植物细胞，可以通过植物组织培养技术培育出具有抗旱基因的植物

D. 若能够在植物细胞中检测到抗旱目的基因，则说明该基因工程项目获得成功

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土壤农杆菌含有一个大型的Ti质粒（如右图所示），在侵染植物细胞的过程中，其中的T—DNA片段转入植物的基因组。若想用基因工程并通过土壤农杆菌向某种植物中导入抗旱基因，以下分析不合理的是

A．若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，目的基因的插入位置应该在T—DNA片段内，且要保证复制起始点和用于转移T—DNA的基因片段不被破坏

B．将重组Ti质粒导入土壤农杆菌中时，可以用Ca²⁺处理细菌

C．用含有重组Ti质粒的土壤农杆菌去感染植物细胞，可以通过植物组织培养成具有抗旱基因的植物

D．若能够在植物细胞中检测到抗旱目的基因，则说明该基因工程项目获得成功

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将几丁质酶基因导入棉花细胞中,可获得抗真菌的转基因棉,其过程如下图所示(注:农杆菌中Ti质粒上只有T-DNA片段能转移到植物细胞中)。

(1) 图中基因工程的基本过程可以概括为“四步曲”，其中的核心步骤是__________________。

(2)构建重组Ti质粒用到的工具酶是___________________。

(3) 该几丁质酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码几丁质酶的基因进行了改造，使其表达的几丁质酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了其耐热性。资料中的技术属于__________________工程范畴，其基本途径是从预期蛋白质的功能出发，通过__________________和人工合成的方法获得该基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

(4)检验转基因棉的抗菌性状，常用方法是___________________________。

(5)除了图中所示的将目的基因导入受体细胞的方法，还可用_______________或____________方法。

(6)棉花细胞经③④⑤得到试管苗，依据的理论基础是______________________。

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