（2015秋•泰兴市校级月考）定点突变技术是指利用PCR等技术向目的DNA片段中引入所需变...

（2015秋•泰兴市校级月考）定点突变技术是指利用PCR等技术向目的DNA片段中引入所需变化，包括碱基的添加、删除、点突变等方法．如图示利用定点突变技术获得突变质粒的过程，请结合图示回答问题：

（1）基因工程中使用的载体除质粒外，还可以用　　　　 和　　　　 ．

（2）在定点突变的过程中，需用含有突变位点的人工DNA片段作为　　　　 ．PCR过程中还需要　　　　 、模板、　　　　 等条件．

（3）甲基化酶Dpn I可以选择性降解质粒模板，说明该酶具有　　　　 ．

（4）定点突变技术可以用于以下的　　　　 ．

①研究某些氨基酸残基对蛋白质结构的影响

②获得符合人们需要的蛋白药物、基因工程酶

③修饰基因表达载体

④给基因表达载体引入新的酶切位点

（5）若要将含有突变位点的质粒导入大肠杆菌中，首先需要用　　　　 处理大肠杆菌细胞使其处于感受态，然后将质粒溶于　　　　 中与感受态细胞混合，在一定温度下促使其转化．

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通过设计引物，运用PCR技术可以实现目的基因的定点诱变。如图为基因工程中获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中引物1和引物2的5'端分别设计增加限制酶a和限制酶b的识别位点。有关叙述正确的是（　　）

A.引物中设计两种限制酶识别位点有利于目的基因定向插入

B.在PCR反应体系中还需要加入4种游离核苷酸、解旋酶、Taq酶等

C.第3轮PCR，引物1能与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因

D.第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA占1/2

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通过设计引物，运用PCR技术可以实现目的基因的定点诱变。如图为基因工程中获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中引物1和引物2的5'端分别设计增加限制酶a和限制酶b的识别位点。有关叙述正确的是（　　）

A.引物中设计两种限制酶识别位点有利于目的基因定向插入

B.在PCR反应体系中还需要加入4种游离核苷酸、解旋酶、Taq酶等

C.第3轮PCR，引物1能与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因

D.第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA占1/2

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利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。以下叙述错误的是

A. 变性过程中断裂的是DNA分子内碱基对之间的氢键

B. 退火时引物A必须与引物B碱基互补配对

C. 由原来的母链为模板合成的两个新DNA分子中，只含有引物A或引物B

D. 延伸时需要耐高温DNA聚合酶催化

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重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景。右图是利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。其主要没计思路是用具有互补配对片段的引物（图中引物2、引物3），分别PCR，获得有重叠链的两种 DNA片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因。结合所学知识，分析下列问题。

（1）引物中G+C的含量影响着引物与模板DNA结合的稳定性，引物中G+C的含量越高，结合稳定性______。

（2）在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA的过程中，必须将引物l、2和引物3、4置于不同反应系统中，这是因为________。

（3）若在引物l和引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均复制一次，共产生________种双链DNA分子。

（4）在引物1、引物2组成的反应系统中，经第一阶段形成图示双链DNA至少要经过________ 次复制。

（5）若利用微生物扩增该目的基因，其基本步骤包括：________、________、微生物的筛选和培养、从菌群中获取目的基因。

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（2014春•台江区校级期末）PCR是多聚酶链式反应技术的缩写，下列有关PCR过程叙述中不正确的是（　 ）

A．目的基因DNA变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键

B．引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成

C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸

D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高

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（2014春•台江区校级期末）PCR是多聚酶链式反应技术的缩写，下列有关PCR过程叙述中不正确的是（　 ）

A．目的基因DNA变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键

B．引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成

C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸

D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高

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有关PCR技术的说法，不正确的是

A. PCR技术是一种在体外复制特定DNA片段的核酸合成技术

B. PCR技术的原理是DNA双链复制

C. 利用PCR技术获取目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列

D. PCR扩增中，需要解旋酶解开双链DNA

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有关PCR技术的说法，不正确的是（ ）

A. PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术

B. PCR技术的原理是DNA双链复制

C. 利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列

D. PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA

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有关PCR技术的说法，不正确的是（ ）

A. PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术

B. PCR技术的原理是DNA双链复制

C. 利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列

D. PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA

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