下图为质粒限制酶酶切图谱，β-葡萄糖苷酶基因（bglB）不含图中所示的限制酶识别序列。研究...

下图为质粒限制酶酶切图谱，β-葡萄糖苷酶基因（bglB）不含图中所示的限制酶识别序列。研究人员在构建bglB基因表达载体时，应先选择限制酶，然后在扩增的bglB基因两端分别引入相应限制酶的识别序列，才能完成质粒和目的基因的重组。以下关于选择限制酶的说法，错误的是

注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同

A．选用限制酶Ndel或BamHI都能够获得所需的重组质粒

B．选用限制酶Xbal获得的重组质粒不能表达出β-葡萄糖苷酶

C．选用限制酶Pstl不能将bglB基因导入受体细胞

D．同时选用限制酶NdeI和BamHI，可避免目的基因与质粒反向连接

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下图为质粒限制酶酶切图谱，β-葡萄糖苷酶基因（bglB）不含图中所示的限制酶识别序列。研究人员在构建bglB基因表达载体时，应先选择限制酶，然后在扩增的bglB基因两端分别引入相应限制酶的识别序列，才能完成质粒和目的基因的重组。以下关于选择限制酶的说法，错误的是

注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同

A. 选用限制酶Ndel或BamHI都能够获得所需的重组质粒

B. 选用限制酶Xbal获得的重组质粒不能表达出β-葡萄糖苷酶

C. 选用限制酶Pstl不能将bglB基因导入受体细胞

D. 同时选用限制酶NdeI和BamHI，可避免目的基因与质粒反向连接

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基因工程中，需使用特定的酶处理目的基因和质粒，以便构建表达载体。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。下列操作正确的是

A．该质粒分子由四种碱基组成

B．构建该表达载体的工具酶是限制酶和耐高温DNA聚合酶

C．本实验应采用GeneⅡ作为载体的标记基因

D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。请回答下列问题：

(1)若用图1所示的限制酶EcoR Ⅰ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是_____之间相连的化学键,该化学键为________。

(2)图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是________(多选)。

A．若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子

B．DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用于①处

C．若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种

D．就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基

(3)若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D 4种单链DNA片段中应选取________作为引物(DNA复制子链的延伸方向是5′→3′)。至少需要经过____次扩增才能得到等长的目的基因。

(4)为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是________。

(5)如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是__________。

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基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示质粒。回答下列问题：

（1）用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是_________之间相连的化学键，该化学键为_________。

（2）采用PCR扩增目的基因的原理是_________。图2中A、B、C、D4种单链DNA片段中，有_________两种引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。

（3）在构建目的基因表达载体时，用PstⅠ、EcoRⅠ两种酶同时切割目的基因和质粒，是为了防止一种酶切割时造成_________。不选用限制酶PstⅠ和HindⅢ同时对质粒和目的基因进行切割的原因是_________。

（4）目的基因进入受体细胞并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为_________；要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，经常采用的检测方法是_________技术。

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基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：

（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。

（2）已知DNA复制子链的延伸方向是5′→3′，图3中的A、B、C、D在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生目的基因片段__________个。

（3）图4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对此质粒进行三种方法切割。第一种方法用其中一种酶、第二种方法用其中两种酶、第三种方法用其中三种酶分别切割，依次产生_______、_______、_____三种片段。

（4）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用____________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过______________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经____________处理过的_____________态的大肠杆菌中。

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下图为获得抗除草剂转基因玉米的技术路线，请回答：

（1）构建表达载体选择限制性核酸内切酶时，要求Ti质粒内每种限制性核酸内切酶只有一个切割位点，同时要求酶切后，G基因形成的两个粘性末端序列不相同，这个过程需用______种限制酶，目的是___________。除草剂抗性基因G和Ti质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是________________________

（2）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带_______________插入受体细胞的核DNA。若核DNA中仅插入一个G基因，自交后代含G基因的植株中，纯合子占________________。

（3）获得抗除草剂转基因玉米涉及到多次筛选，其中筛选含重组质粒的农杆菌应使用含_______________的选择培养基，使用含_______________的选择培养基筛选出转化的愈伤组织，再诱导愈伤组织再生出抗除草剂转基因玉米。

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在基因工程的操作中，为了防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是　　

①质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，质粒形成的两个黏性末端序列相同

A. ①③ B. ①④ C. ②③ D. ②④

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关于基因工程的操作工具的说法,正确的是(  )

A. 所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列

B. 质粒具有标记基因,以便为目的基因的表达提供条件

C. 载体必须具备的条件之一:具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接

D. DNA连接酶使黏性末端的碱基之间形成氢键

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下列关于基因工程工具的说法不正确的是(　　 )

A. 构建基因文库和构建基因表达载体都需要限制酶和DNA连接酶

B. DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列有专一性要求

C. Ti质粒的T-DNA能将目的基因插入到植物细胞中染色体DNA上并使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达

D. 基因工程的核心步骤是构建基因表达载体

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