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【生物——选修3：现代生物科技专题】
我国一科研团队将小麦液泡膜Na+/K+逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到水稻细胞内，获得了转基因耐盐水稻新品种。回答下列有关问题：
（1）为保证目的基因在水稻细胞中能够表达，运载体上应含有特定的______________。
A.复制原点 B.启动子 C.标记基因
（2）水稻的转化过程为：将水稻幼胚接种到诱导培养基上，经过___________伤组织，然后用___________法，将目的基因和相关功能片段整合到愈伤组织细胞的染色体DNA上，最后诱导愈伤组织形成水稻植株。
（3）为验证外源基因整合到水稻基因组后是否转录，可从转基因植株的细胞中提取所有mRNA并反转录成
___________，再以反转录产物为模板，利用TaNHX2基因特异引物，通过__________方法进行基因扩增。若以根细胞为材料扩增结果为阳性（有产物生成），以叶细胞为材料扩增结果为阴性（无产物生成)，则说明_________________________________。
（4）将生长至4叶期的转基因幼苗转入高浓度的NaCl溶液中培养，进行耐盐实验，用非转基因幼苗作为对照。培养30天后观察现象，若_______________________________则说明转基因植株获得了耐盐特性。
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（生物——选修3：现代生物技术专题）
已知生物体内有一种蛋白质（P），该蛋白质是一种转运蛋白，由305个氨基酸组成。如果将P分子中158位的丝氨酸变成亮氨酸，240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸，改变后的蛋白质（P1）不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性。回答下列问题：
（1）从上述资料可知，若要改变蛋白质的功能，可以考虑对蛋白质的__________进行改造。
（2）以P基因序列为基础，获得P1基因的途径有修饰________基因或合成_____基因，所获得的基因表达时是遵循中心法则的，中心法则的全部内容包括___________的复制；以及遗传信息在不同分子之间的流动，即：____________。
（3）蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过___________和_____________，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，在经表达、纯化获得蛋白质，之后还需要对蛋白质的生物________进行鉴定。
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【生物——选修3:现代生物科技专题】
（1）凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。从牛胃液中分离到的凝乳酶以催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。
①科学家已经测出该酶的氨基酸序列，因此可以通过_________方法来获取目的基因。获得目的基因后，常利用_________技术在体外将其大量扩增。
②构建重组DNA分子(如图所示)最好选用___________限制酶，理由是________________。
③工业化生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶，现多采用重组毛霉或重组的酵母菌来生产，毛霉或酵母菌作为受体细胞的优势是_________________________。
④研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是________________________。
（2）转基因技术和细胞工程在动植物都有广泛应用，但是，胚胎工程只是指对动物的_______所进行的多种显微操作和处理技术。
（3）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理(至少答三项)：________。
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【生物-选修3现代生物科技专题】
糖尿病是近年来高发的“富贵病”，常见类型有遗传型糖尿病和II型糖尿病。遗传性糖尿病的主要病因之一是胰岛受损。科研机构作出如下设计：取糖尿病患者的细胞，将人的正常胰岛素基因导入其中，然后做细胞培养，诱导产生胰岛组织，重新植入患者的膜岛，使胰岛恢复功能。
II型糖尿病需要注射胰岛素治疗。目前临床使用胰岛素制剂注射后120min后才出现高峰与人体生理状态不符。科研人员通过一定的工程技术手段，将胰岛素B链的28号和29号氨基酸互换，获得了速效胰岛素，已通过临床试验。
（1）对遗传型糖尿病进行基因治疗的方案中，胰岛素基因为_____________，实验室中要先对该基因利用_____________技术进行扩增。将该基因导入人体细胞所用的方法是_____________。该科研机构采用的基因治疗方法是_____________。
（2）对遗传型糖尿病患者进行治疗的基因工程步骤中的核心步骤是_____________。
（3）科研人员利用蛋白质工程合成速效胰岛素，该技术的实验流程为：
其中，流程A是__________________________，流程B是__________________________。
（4）基因工程技术还可以用于基因诊断，其基本原理是_________________________。
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【生物——选修3：现代生物科技专题】
基因工程又叫做DNA重组技术，植物细胞、动物细胞、微生物细胞都可以作为受体细胞。动物基因工程经常和胚胎工程结合使用，请结合所学知识回答下列问题：
（1）若要将某目的基因导入双子叶植物细胞采用最多的方法是____________。
（2）把目的基因导入动物细胞最有效的方法是____________技术：先利用____________激素做超数排卵处理从雌性动物体内获得多个卵子，直接与_____________________的精子在________________________（液体）中完成体外受精；再将含有目的基因的表达载体提纯，利用相应仪器进行操作，获得含有目的基因的受精卵；此受精卵经过____________培养一段时间后，再移植到雌性动物的输卵管或____________内，使其发育成为具有新性状的动物。此技术通常选择受精卵而不是体细胞做受体细胞，原因是_______________________。
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[生物——选修3：现代生物科技专题]（10分）
利用转基因奶牛乳腺生物发生器生产人的生长激素，需要构建一种能高水平表达的表达载体，选择合适的基因启动子至关重要。由于无法由基因表达产物推知启动子的碱基序列，运用PCR技术单独克隆启动子存在困难。科研人员经过长期研究，终于发明了下图所示的一种克隆启动子的方法。请分析回答：
（1）培育转基因奶牛时，需要在生长激素编码序列前插入 的启动子。运用 将外源基因转入动物细胞。
（2）过程③需要使用的工具酶是 ，过程④中可以根据基因编码序列两端的部分碱基序列设计引物进行扩增．
（3）研究发现将真核生物的蛋
白质基因导入了大肠杆菌菌株中，能转录形成正常mRNA，但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性，最可能的原因是 。（4）由基因表达产物无法推知启动子碱基序列，其原因是 。
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【选修3-现代生物科技专题】（15分）
美籍华人钱永健、美国的沙尔菲和日本的下村修因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。GFP会发出绿色荧光，该蛋白质在生物工程中有着广阔的应用前景。请据图回答相关问题：
（1）图中重组质粒的形成，需要用限制酶对目的基因和质粒进行剪切。如果限制酶Ⅰ的识别序列和切点（用“↓”表示）是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—；在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。质粒和目的基因经过上述两种不同的限制酶处理后，在DNA连接酶的作用下 （填“能”或“不能”）连接成重组质粒，理由是 。
（2）在②过程中对转基因体细胞进行筛选，比较简易的方法是通过设备检测被培养的细胞 ；绿色荧光蛋白在转基因体细胞的________中合成，写出这一过程中的遗传信息传递图【解析】
_________________________________________。（3）在③过程中培养重组细胞时，培养液中通常含有 、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
（4）在核移植过程中，供体细胞一般要选用传代到________代以内的转基因体细胞，原因是__________________________________________________________________；乙兔提供的细胞应是________________________。
（5）钱永健通过 工程技术，改变氨基酸排序，造出能吸收并发出不同颜色光的荧光蛋白，并能让它们发光更久、更强烈。
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[生物——选修3：现代生物科技专题]家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力，科学家将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。请回答下列相关问题：
（1）进行转基因操作前，需用_________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。在培养动物细胞时，培养液中需要通入CO2，作用是_________。
（2）为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_________和___________之间。
（3）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核苷酸、模板DNA、能量、____和______。
（4）利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴满瓶壁的细胞会产生________现象。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以增大_________，从而增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。
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[生物--选修3：现代生物科技专题]
普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶（简称PG）基因，控制细胞产生PG，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗PG基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。请运用所学知识回答下列问题：
（1）该实验中的目的基因是_____________。若实验操作中所用的目的基因既含有内含子也含有启动子，则该基因取自_____________文库。基因工程操作的核心步骤是____________________。
（2）将含有目的基因的番茄细胞培养为番茄植株需借助___________技术，由细胞产生愈伤组织的过程称为_________________。
（3）抗PG基因是PG基因的反义基因，推测转基因番茄抗软化、保鲜时间长的原因为：抗PG基因产生的mRNA与PG基因产生的__________互补，形成了_________________，阻断了基因表达的__________过程，因此番茄细胞就不能产生__________________。
（4）运载体Ti质粒中含有____________序列，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上，若将得到的二倍体转基因番茄植株自交，F1中抗软化与不抗软化的植株数量比为3:1，则可推测目的基因整合到了__________________________________．
A．一对同源染色体的一条上
B．一对同源染色体的两条上
C．两条非同源染色体上
D．线粒体中的DNA上
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【生物——选修3 现代生物科技专题】（14分）
下图表示科学家通过基因工程培育抗虫棉时，从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫基因“放入”棉花细胞中与棉花的DNA分子结合起来而发挥作用的过程示意图。请据图回答下列有关问题：
(1)图中科学家在进行①操作时，要用同一种___________________分别切割目的基因和运载体，运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过__________（键名）而结合，遵循原则。
(2)在获得目的基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应需要在一定的缓冲溶液中加入DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种 、四种脱氧核苷酸和
________的DNA聚合酶。
(3)图中的III是导入了目的基因的受体细胞，经培养、筛选最终获得一株有抗虫特性的转基因植株。经分析，该植株含有一个携带目的基因的DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，在该转基因植株自交产生的F1中，仍具有抗虫特性的植株占总数的，原因是_________
(4) 述抗虫棉植株的后代种子种植下去后，往往有很多植株不再具有抗虫性，原因是_________
________，要想获得纯合体，常采用的方法是__________________。
(5)科学家最初在做抗虫实验时，虽然用一定的方法已检测出棉花的植株中含有抗虫基因，但让棉铃虫食用棉的叶片时，棉铃虫并没有被杀死，这说明_______________。科学家在研究的基础上又一次对棉花植株中的抗性基因进行了修饰，然后在让棉铃虫食用棉的叶片，结果食用的第二天棉铃虫就死亡了
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白质基因导入了大肠杆菌菌株中，能转录形成正常mRNA，但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性，最可能的原因是