【选修1:生物技术实践】有机化工原料氯苯不易降解，会污染环境，现欲从土壤中分离高效降解氯苯...

【选修1:生物技术实践】

有机化工原料氯苯不易降解，会污染环境，现欲从土壤中分离高效降解氯苯的微生物。

（1）为了获得能降解氯苯的微生物，可在被氯苯污染的土壤中取样，并应选用以_______为唯一________源的培养液进行培养，该培养基从用途上来说属于______________培养基。

（2）将获得的3种待选微生物甲、乙、丙分别接种在1L含20mg氯苯的相同培养液中培养(其它营养物质充裕、条件适宜），观测记录3种微生物从实验开始到停止生长所用的时间：甲是14h、乙是3lh、丙是49h，则应选择微生物______________作为菌种进行后续培养。获得菌种后要长期保存，采用__________管藏的方法，此方法需要在____________℃的冷冻箱中保存。

（3）若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可以在_______________下用血细胞计数板直接计数，也可选用_____________法统计活菌数目，一般前者得到的结果___________(填“大于”、“小于”、或“等于”)后者。

（4）若平板培养基中菌落分布很不均匀，则纯化细菌时选用的方法是___________。纯化细菌的另一种方法稀释涂布平板法主要包括__________操作和____________操作。

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氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如表1。

表1　培养基的组成

请分析回答下列问题：

(1)配制Ⅱ号固体培养基时，除添加Ⅱ号液体培养基成分外，还应添加1%的_______。配制培养基熔化该物质时往往需要用玻璃棒搅拌，原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(2)培养基配制时，操作的先后顺序是计算→ ____　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(3)从用途上来说，Ⅱ号培养基属于____　　　　 ___培养基。在Ⅱ号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是________　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(4)在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为________。若想杀死这种休眠体，在实验室中我们通常选择　　　　　　　　　　　　　　 （消毒/灭菌）。

(5)将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养，得到生长曲线如图。

由图可知，SP1菌在_______　　　　 _培养条件下最早停止生长，其原因是_______　　　　　　　　 。

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[生物——选修1：生物技术实践]（16分，每空2分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以　　　 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于　　 培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即　　 和　　 。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力　　 。

（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 　　　　　 和　　　　 。无菌技术要求实验操作应在酒精灯　 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

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【选修1：生物技术实践】有些细菌可以分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。请回答：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以　　　　　　　 为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于　　　　　　　 培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即　　　　　　　 和　　　　　　　 。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力　　　　　　　 。

（4）通常情况下，在微生物的培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、　　　 和　　　　 。无菌技术要求实验操作应在酒精灯　　　　　　　 附近进行，以免周围环境中微生物的污染。

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【选修1——生物技术实践】

有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为惟一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________培养基

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和________。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力________。

（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。无菌技术要求试验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。

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【选修1-生物技术实践】（15分）

利用微生物分解淀粉生产糖浆具有广阔的应用前景。某研究所为了从长期种植马铃薯的土壤中分离出能够高效分解淀粉的细菌，进行了如下实验。请进一步完善实验内容并回答相关问题：

（1）实验步骤：

①配制以________________________________________________________ 　 ________________________________为碳源的固体培养基，为了使培养基凝固成固体，应该向培养基中加入的物质是________________________________________________________ ________________________________________________________________。

②将土壤样品接种到已灭菌的培养基上，在恒温培养箱中培养一段时间后，培养基上会出现________________________________________________________ ________________________________________________________________________________________________和透明圈。

③将接种针用________________________________________________________ ________________________________________________________________________________________________________________法灭菌后，从②中的培养基上挑取一定量细菌，接种至________ ________________________________________________________________________________________（填“固体”、“半固体”或“液体”）培养基，在恒温摇床上培养24h，使细菌大量繁殖。

④取与①培养基中相同的成分及配比，并加入少量碘液，使制作的培养基呈蓝紫色，灭菌并调节PH，用________________________________________________________ ________________________________　　　　　  法将③过程所获得大量繁殖的细菌接种到该培养基上。

⑤培养一段时间后，观察菌落周围培养基的颜色变化及其范围的大小，周围出现　　　

________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________的菌落即为初选菌落，经进一步分离、纯化后即可达到实验目的。

（2）上述实验步骤中，倒平板和接种的操作都应在超净台上的________________________________________________ ________________________________________________________________________________________________________________附近进行。

（3）上述实验步骤中，从用途看，①所用培养基属于________________________________________________________ ________________________　　 ________________________________________________________________________________ 培养基，④和⑤所用培养基属于________________________________________________________________　　 ________________________________________________________培养基。

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[选修1一生物技术实践]

人和哺乳动物的尿液中含有尿素，大量尿素的排放会对环境造成污染。已知土壤中有些细菌含有脲酶，可降解尿素。下图是某同学从土壤中筛选降解尿素的细菌的实验流程。请回答有关问题：

配制土壤溶液→系列稀释→涂布平板与培养→菌落计数

（1）为筛选能分泌脲酶的细菌，一般选用__________的培养基（从营养物质方面答）。从功能上讲，该培养基属于__________培养基。

（2）__________法是将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养细菌并统计菌落数目。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在__________旁进行操作。稀释处理的目的是___________________。

（3）若培养基中存在含有脲酶的细菌，则其菌落周围会出现红色分解圈，这是由于尿素被分解产生____，遇到培养基中所加酚红指示剂产生了颜色变化。

（4）实验中使用过的培养基在实验完成后应如何处理？__________；为什么？____________________。

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已知一种有机物X（仅含有C、H两种元素）不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌（目标菌）。

Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X（5g/L）。

Ⅱ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量），X（15g/L）。

Ⅲ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量）。X（45g/L）。

回答下列问题。

（1）在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是___________。Ⅱ、Ⅲ号培养基为微生物提供碳源的有机物是_________。

（2）若将土壤悬浮液种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会_________，其原因是_________。

（3）Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是______________。

（4）假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供_________和_________。

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已知一种有机物X（仅含有C、H两种元素）不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌（目标菌）。

Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X（5 g/L）。

Ⅱ号培养基：氯化钠（5 g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量），X（15g/L）。

Ⅲ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量），X（45g/L）。

回答下列问题。

（1）在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是________________。Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是______________。

（2）若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会__________，其原因是_____________________________________________________________。

（3）Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是________________。

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从石油中获取的多环芳烃菲在杀虫剂、染料等生产过程中被广泛使用，是土壤、河水中常见的污染物之一。下图表示科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解多环芳烃菲的菌株Q(需氧型微生物)的主要步骤。请回答：

（1）步骤①→③的培养过程中，培养液中加入___________作为唯一碳源。在培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能______________。

（2）接种环通过灼烧来灭菌，完成步骤④中，共需灼烧接种环_______次。步骤④用平板划线法纯化菌株Q过程中，在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，目的是____________。

（3）为了获得分解多环芳烃菲能力更强的菌株，研究人员又对菌种Q进行了诱变处理，得到突变株K。为了比较两种菌株降解多环芳烃菲的能力，设计了下列实验，请补全实验步骤：

①取9只锥形瓶均分成三组，编号A、B、C

②向A、B、C三组锥形瓶中加入_____________________________________的培养液。

③向A、B、C三组培养液中分别加入_________________________________________。

④28℃恒温培养3天后，测定_______________________________________________。

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