下图是转基因绿色荧光鼠的培育过程，回答问题
（1）过程 （填标号）是转基因技术的核心步骤，为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达，需要构建重组表达载体，重组表达载体中目的基因前端必须有 （结构）
（2）③过程在使用合成培养基进行培养时，除了水、无机盐、氨基酸、葡萄糖，还需加入等天然成分
（3）②过程的受体细胞通常为 ，在转录水平上检测GFP基因是否表达的方法是
（4）④过程通过胚胎移植技术实现，科学家想获得多个相同性状的绿色荧光小鼠，则应该选择发育良好的，形态正常的 ，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分隔刀或分割针进行处理
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下图是转基因绿色荧光鼠的培育过程，回答问题
（1）过程 （填标号）是转基因技术的核心步骤，为使GFP基因在小鼠细胞中高效表达，需要构建重组表达载体，重组表达载体中目的基因前端必须有 （结构）
（2）③过程在使用合成培养基进行培养时，除了水、无机盐、氨基酸、葡萄糖，还需加入等天然成分
（3）②过程的受体细胞通常为 ，在转录水平上检测GFP基因是否表达的方法是
（4）④过程通过胚胎移植技术实现，科学家想获得多个相同性状的绿色荧光小鼠，则应该选择发育良好的，形态正常的 ，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分隔刀或分割针进行处理
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GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，下图表示大量培育绿色荧光小鼠流程图以及其的拓展图和应用。请据图回答问题。17分
（1）图中所涉及的现代生物技术有___ 、__ 、____ (填三项)。
（2）下列有关胚胎移植的叙述正确的有（ ）
A．冲卵指的是从子宫中冲出胚胎，而非冲出卵子
B．只有供、受体生理环境高度一致，移入受体的胚胎才能被接受，并继续发育
C．供体和受体要进行免疫检查，防止发生免疫排斥反应
D．不同动物其胚胎移植的时间不同，人的胚胎移植最好在四细胞阶段进行
（3）为了提高①的成功率，可以通过_______技术获得GFP基因的大量拷贝，该技术中使用_______DNA聚合酶。
（4）用于培育绿色荧光小鼠的基因表达载体的组成有复制原点、__ ___、__ ____、启动子和__ ____。过程②常用的方法是__ _____。过程④的早期胚胎最好选择 ___________期。
（5）图中③过程中，必须用_____________处理内细胞团，使之分散成单个细胞；培养基中通常要加入 ________________________ 等天然成分，除了保证被培养细胞处于无菌、无毒及充足氧气的环境中，还需要保证细胞生活所需的____________和___________ ；干细胞形成组织、器官必须要进行细胞__________和 ____________。
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（8分）日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图．据图回答：
（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶I的识别序列和切点是—G’GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的过程：________________________ _________。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_______________ ___。
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_______________________。
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（用数字表示）：_______ ________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。
（5）在培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和___等。
（6）以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________等（至少答出2项）。
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日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因和质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成的黏性末端：______________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
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日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因和质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成的黏性末端：______________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是______________________________________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_________________________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
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日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：
(1)图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：__________________________________________________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
（5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤，第一步是“变性”,这一步骤如果发生在细胞内，是在 的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到 酶。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________________等。(至少答出三项)
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下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
（1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
① 画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？ 理由是 。
（2）以上图示中基因工程的核心是 （用序号表示）,除了目的基因和标记基因外,其上还应包括_____________和_____________。
（3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是 。目的基因能否在受体母猪体内稳定遗传的关键是 。这需要检测才能确定，检测采用的方法是_____________。
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是： （用数字表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）
④表达出蓝色荧光蛋白
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美籍华裔科学家钱永键和日本海洋生生学家下村修等人因在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面的突出贡献，获得了2008年诺贝尔化学奖。下图是我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
(1)图中通过①、②过程形成重组质粒，需要用同一种限制酶切割目的基因和质粒。限制酶的特点是________。
(2)③过程将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是________。
(4)以上培育过程中应用到的生物技术主要有________、________、________等。(写三项即可)
(5)④过程形成重组细胞时应用________期的卵母细胞，去掉其细胞核的原因是。
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（10分）科学家从129品系小鼠中成功分离出胚胎干细胞，并注入小鼠的囊胚，形成嵌合体囊胚，育出嵌合体小鼠。利用该技术，可获得表达绿色荧光蛋白（ GFP）转基因昆明（KM）小鼠，操作流程图如下，请回答：
（1）在基因工程的操作中，携带GFP基因 的病毒作为_______。
（2）步骤②中，利用荧光显微镜观察到细胞_______，将其取出，进行扩增培养。
（3）步骤③中，胚胎的收集方法称为______________。
（4）步骤⑤中，胚胎干细胞可以_______形成包括生殖腺在内的各种组织。
（5）图中X小鼠为_______小鼠。
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下图是转基因猕猴培养过程示意图，请据图回答：
（1）获取绿色荧光蛋白基因的方法包括____________、利用 PCR 技术扩增和用化学方法 直接人工合成等。基因工程的核心步骤是________________________用图中数字表示），②过程常用的方法是________________________________________________。
（2）从分子水平检测目的基因是否成功导入受体细胞的方法是__________________ 技术。
（3）利用 PCR 技术扩增目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，根据这 一序列设计并合成________________________________________________。
（4）从雌性猕猴体内采集的卵母细胞，一般要培养到____________ 阶段才能进行体外受 精。判断卵子受精的重要标志是____________________________________。
（5）图中过程⑦称为____________ ，所用的早期胚胎通常是发育至____________ 期的胚 胎，受体雌猴对移入子宫的外来胚胎不会发生 ____________反应，这为胚胎在受体雌猴体 内的存活提供了可能。
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