下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回...

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图一、图二中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

（1）若图二中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科学家要将该基因注射到羊的_______________中，则发育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。这一过程涉及以下那些过程___________________。

A．DNA自我复制           B．DNA以其一条链为模板合成RNA

C．RNA自我复制           D．按照RNA上密码子的排列顺序合成蛋白质

（2）限制酶Sma和限制酶Xma作用的不同点是_________________________________。

（3）图二中的目的基因D需要同时使用Mse酶和Pst酶才能获取，而图一所示的质粒无相应的限制酶切位点。所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶切位点。试写出构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：

①首先用_______________酶处理质粒；

②然后用_______________酶处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；

③再运用T4DNA连接酶处理质粒，形成新的限制酶切位点，即可被_________酶识别。

（4）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。下图表示运用影印培养法（使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有________________________。从检测筛选的结果分析，含目的基因的是________（填编号）菌落中的细菌。

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下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图一、图二中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

（1）若图二中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科学家要将该基因注射到羊的_______________中，则发育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。这一过程涉及以下那些过程___________________。

A．DNA自我复制           B．DNA以其一条链为模板合成RNA

C．RNA自我复制           D．按照RNA上密码子的排列顺序合成蛋白质

（2）限制酶Sma和限制酶Xma作用的不同点是_________________________________。

（3）图二中的目的基因D需要同时使用Mse酶和Pst酶才能获取，而图一所示的质粒无相应的限制酶切位点。所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶切位点。试写出构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：

①首先用_______________酶处理质粒；

②然后用_______________酶处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；

③再运用T4DNA连接酶处理质粒，形成新的限制酶切位点，即可被_________酶识别。

（4）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。下图表示运用影印培养法（使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有________________________。从检测筛选的结果分析，含目的基因的是________（填编号）菌落中的细菌。

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下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）若图2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，研究者需将该基因通过　　　　 （方法）注入到羊的　　　　　　　 中，则发育成的羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。这一过程涉及到以下哪些过程（多选）　　　　　　　　 。

A．DNA自我复制B．DNA以其一条链为模板合成RNA

C．RNA自我复制D．按照RNA上密码子的排列顺序合成蛋白质

（2）若图2中目的基因D需要同时使用MetⅠ和PstⅠ才能获得，而图1所示的质粒无相应的限制酶酶切位点。所以在该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶酶切位点。试帮助完成构建需要的限制酶酶切位点的思路（选填①-⑤）：

①EcoRⅠ②MetⅠ③PstⅠ④DNA连接酶⑤DNA聚合酶

首先用　　　　　　 处理质粒；然后用　　　　　　　　 处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；再用　　　　　　　　　　 处理质粒，形成了的限制酶酶切割位点，它可被②识别。

（3）检测筛选是一个重要步骤。图3表示在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种方法与培养方法，以检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有　　　　　　　　 。从筛选结果分析，含目的基因的是　　　　　 （填编号）菌落中的细菌。

⑷DNA分子中，一条链的两个核苷酸通过　　　　　　　　　 连接。如要检测目的基因是否成功表达，须提取培养后大肠杆菌解的　　　　　　　　　 ，用相应抗体检测。

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下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)若图2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，研究者需将该基因通过　　　　 （方法）注入到羊的　　　　　　　 中，则发育成的羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。这一过程涉及到以下哪些过程（多选）　　　　　　　　 。

A．DNA自我复制B．DNA以其一条链为模板合成RNA

C．RNA自我复制D．按照RNA上密码子的排列顺序合成蛋白质

(2)若图2中目的基因D需要同时使用MetⅠ和PstⅠ才能获得，而图1所示的质粒无相应的限制酶酶切位点。所以在该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶酶切位点。试帮助完成构建需要的限制酶酶切位点的思路（选填①-⑤）：

①EcoRⅠ②MetⅠ③PstⅠ④DNA连接酶⑤DNA聚合酶

首先用　　　　　　 处理质粒；然后用　　　　　　　　 处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；再用　　　　　　　　　　 处理质粒，形成了的限制酶酶切割位点，它可被②识别。

(3)检测筛选是一个重要步骤。图3表示在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种方法与培养方法，以检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有　　　　　　　 、　　　　　　　 。从筛选结果分析，含目的基因的是　　　　　 （填编号）菌落中的细菌。

⑷DNA分子中，一条链的两个核苷酸通过　　　　　　　　　 连接。如要检测目的基因是否成功表达，须提取培养后大肠杆菌解的　　　　　　　　　 ，用相应抗体检测。

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（10分）．下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有____，____个游离的磷酸基团。

(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是___________

________________________________________________________________________。

(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________________________________________________________。

(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。

(6)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_________________________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

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下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题

(1)一个图Ⅰ所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有________个游离的磷酸基因

(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是________.

(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BmaHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止。

(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶

(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________。

(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测

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下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有_______个游离的磷酸基团。

（2）根据限制酶识别和切割的位点，应选择_________________酶对质粒和含目的基因的外源DNA进行切割。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能用BamH Ⅰ切割，原因是____________________________________________。

（3）通过PCR技术扩增目的基因时，加入的引物有A、B两种，引物A、B序列设计的依据是_______________________，若该目的基因扩增4代，则需要消耗引物A____________个。

（4）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶，若只考虑DNA切段两两连接，则混合物中将形成_______种环状DNA。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了__________________________________。

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请回答下列有关基因工程的问题。下表是基因工程中几种限制酶识别序列及其切割位点。图是转基因香蕉的培育过程，含目的基因的外源DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。

（1）从转基因香蕉培育图中反映了质粒作为运载体的特点是_______________答出其中两点即可），基因工程中还可以用_____________作为运载体。

（2）图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaI酶切割，原因是_____________。

（3）下图是用___________ (限制）酶进行切割得到的目的基因。可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后自身环化。

（4）人体细胞内含有抑制癌症发生的某基因，生物技术可对此类基因的变化进行检测。该基因含有800对碱基对(bp)，用BamHⅠ切割得到的400bp，200bp，200bp,．用EcoRⅠ再次切割得到100bp,300bp,150bp，50bp,200bp．而患者体内获取的这段基因，用BamHⅠ切割得到的区段变为400bp，400bp ，用EcoRⅠ再次切割得到100bp,300bp,150bp，250bp．在正常人体内BamHⅠ和EcoRⅠ识别序列分别有 _______个和_______个，患者体内发生了 ________________。

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下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图1所示的质粒分子用限制酶Sma Ⅰ切割时，需断开　　　　　 个磷酸二酯键。

（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越　　　　　　　　　 。

（3）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入　　　　　　 酶。

（4）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　　　　　　　　　　　 。

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（8分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的切位点。请回答下列问题：

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有　　　 和　　　 个游离的磷酸基团。

（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越　　　 。

（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是　　　 。

（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止　 　 。

（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入　　　 酶。

（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　　　 。

（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在　　　 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

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