回答下列（一）、（二）小题（一）自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌，其中有些好氧种类能产...

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回答下列（一）、（二）小题

（一）自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌，其中有些好氧种类能产生 PHB（一种生物可降解的热塑性塑料）。现欲从活性污泥中分离、纯化、筛选出高产 PHB 的固氮菌，操作流程如下：采集土样→富集培养→分离、纯化培养→初步筛选 PHB 固氮菌→筛选高产 PHB 固氮菌→保存备用。请回答：

（1）富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加________ 。培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在__________上振荡培养，主要目的是为细菌的生长提供 ____________。

（2）用于筛选高表达量菌株的方法之一是经涂布分离获得______。涂布分离时用_______ 将菌液均匀涂布在培养基上，此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，添加了一定量的_____________。

（3）在纯化过程中，在固体培养基上划线时，下列操作正确的是__________。

A．接种环采用 70%酒精灭菌　　

B．接种时应在酒精灯火焰附近进行

C．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连

D．划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种

（二）毛角蛋白11型中间丝（KIF II）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关，获得转KIF II基因的高绒质绒山羊的简单流程如图：

（1）转基因过程用到的工具酶有_______________和____________。

（2）在过程②中，用________处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。由于人们对动物细胞所猫营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养液中加入一定量的_________，在培养过程中，应将培养瓶宜于__________中培养。

（3）若要获得多只相同的转基因山羊，可对图中早期胚胎进行_________后进行胚胎移植。

（4）下列有关墓因工程的叙述，正确的是___________。

A．切割目的基因和载体DNA时为获得相同的枯性末端，必须用相同的限制性核酸内切酶

B．基因工程的原理是基因重组，其核心是上图中的过程④

C．图示过程获得的转基因绒山羊并不是克隆动物

D．重组表达载体上含有RNA聚合的的识别结合位点

高二生物非选择题中等难度题