科研人员利用基因工程技术构建蜂鸟的基因组文库，研究β-球蛋白基因的功能，流程如图1所示。 ...

科研人员利用基因工程技术构建蜂鸟的基因组文库，研究β-球蛋白基因的功能，流程如图1所示。

（1）首先需要用同种__________处理蜂鸟的DNA和质粒，并用DNA连接酶处理，得到__________，再与经__________处理得到的感受态大肠杆菌混合。将混合物接种到添加__________的培养基上培养，一段时间后，选择颜色为__________（填“白色”或“蓝色”）的菌落进一步培养，获得导入蜂鸟DNA片段的大肠杆菌。用上述方法可以获得导入蜂鸟不同基因的大肠杆菌，构建出蜂鸟的__________。

（2）科研人员可从获得的大肠杆菌中提取__________，利用图2中的__________引物组合进行PCR，以进一步研究蜂鸟β-球蛋白基因的功能。

（3）导入大肠杆菌的蜂鸟β-球蛋白基因并未表达正常功能的蛋白质，可能的原因是__________。（写出一项即可）

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科研人员利用精子作为载体，将人胰岛素基因（hINS）转入绵羊体内（图中BLG是羊的乳腺蛋白基因），以获得动物乳腺生物反应器，使羊的乳汁中含有人胰岛素。其技术流程如下：

请回答下列相关问题：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

（1）构建的BLG-hINS重组质粒中目的基因的首端是________________，将重组质粒导入精子中的方法是_________________。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

（2）给供体母羊注射促性腺激素，目的是使其________。在体外受精前，要对精子进行_______处理。在胚胎移植过程中，受体选择好后要用激素进行_________处理，其目的是_________，以保证移植的胚胎能够继续正常发育。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

（3）为获得转基因母羊，在进行移植前，还需取滋养层细胞进行___________。将早期胚胎移植至代孕母羊体内时，不宜选择_________（填“原肠胚”、“桑椹胚”或“囊胚”）时期的胚胎。　　　　　

（4）欲增加图中早期胚胎的数量，可通过胚胎工程中的___________技术来实现，在对囊胚进行操作时应注意________________________。

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hNaDC3（人钠/二羧酸协同转运蛋白-3）主要分布于肾脏等重要器官，它具有促进人肾小管上皮细胞能量代谢和转运等功能。科研人员利用基因工程技术构建绿色荧光蛋白与hNaDC3融合基因，并在肾小管上皮细胞中表达，以动态观察hNaDC3在肾小管上皮细胞中的定位情况，为进一步研究hNaDC3的生理功能奠定基础。研究主要过程如图（实验中使用的限制酶SacⅠ的识别序列是GAGCT↓C，限制酶SacⅡ识别序列是CCGC↓GG）。请分析回答：

（1）与PCR相比，过程①需要的特有的酶是______，应从人体______（器官）的组织细胞中获得模板RNA。

（2）DNA分子被SacⅠ切割后，形成的黏性末端是______。过程②选用SacⅠ、SacⅡ分别切割hNaDC3基因和质粒载体，可实现目的基因定向插入并正常表达的原因是______。

（3）过程③可获得多种重组DNA，可依据不同DNA分子的大小，运用______（技术）分离、筛选重组表达载体。

（4）显微观察导入“绿色荧光蛋白-hNaDC3融合基因”的猪肾小管上皮细胞后发现：转染后第1天绿色荧光混合分布于细胞质和细胞膜，核中未见绿色荧光；到第5天绿色荧光清晰聚集于细胞膜，细胞质和细胞核中未见绿色荧光。根据这一观察结果还不能得出“hNaDC3是在细胞质中生成后，在细胞膜上发挥作用”的结论，需要设置对照实验以排除绿色荧光蛋白本身的定位，对照实验的设计思路是______。

（5）研究人员以较高浓度的葡萄糖溶液培养导入融合基因的猪肾小管上皮细胞，一段时间后发现，转染细胞的细胞膜上绿色荧光明显增强。这一实验结果可以说明______。

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科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C导入番木瓜，培育出转基因抗病番木瓜，Ti质粒如图所示。下列叙述，正确的是（　　 ）

A.农杆菌的拟核DNA与番木瓜基因发生重组

B.构建重组质粒需要限制酶和DNA聚合酶

C.含重组Ti质粒的农杆菌具有四环素抗性

D.转基因抗病番木瓜不具有卡那霉素抗性

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科研人员以抗四环素基因为标记基因，通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白，治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计中，不合理的是

A. 构建表达载体时需要添加启动子，终止子，标记基因等元件

B. 利用小鼠DNA分子通过PCR克隆出β-珠蛋白基因的编码序列

C. 用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌

D. 用Ca2+处理大肠杆菌后，将表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中

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科研人员利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗， 其技术流程如图。 请回答：

⑴ 过程①获得重组胚胎之前需要通过______技术获得重组细胞， 接受细胞核的卵母细胞应处于时期， 并用微型吸管吸出______。

⑵ 步骤②中， 重组胚胎培养到囊胚期时， 可从其______分离出 ES 细胞， ES 细胞在形态上表现为细胞核______ 、明显， 在功能上具有______。

⑶ 步骤③中， 需要构建含干扰素基因的______， 构建之前可以利用______技术对目的基因进行扩增。

⑷ 步骤③中将基因导入 ES 细胞的方法通常是______法， 为了检测 ES 细胞的 DNA 上是否插入了干扰素基因， 可采用______技术。 在正常的小鼠体内， 干扰素是在______(填一种细胞器)上合成的。

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重组人胰岛素原基因生产胰岛素，首先要获得目的基因，但一般不用下面哪种方法（　 ）

A．利用聚合酶链式反应，扩增需要的目的基因

B．用化学方法合成目的基因

C．构建基因文库，从文库中调取目的基因

D．直接从细胞内总DNA中分离目的基因

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科研小组利用蛋白质工程将某细胞中的一种转运蛋白X进行改造，并使改造后的转运蛋白X基因在细胞中正常表达。下列说法正确的是

A.该过程无需构建基因表达载体

B.该过程需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用

C.经改造后的蛋白质不需要再进行功能鉴定

D.经改造后的基因在表达过程中不遵循中心法则

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下列操作中，不需要核酸分子杂交的是：

A.从基因文库中筛选目的基因           B.检测目的基因是否转录出了mRNA

C.基因表达载体的构建                 D.利用基因芯片技术检测单基因遗传病

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某研究所利用基因工程、胚胎工程等技术获得能产生人凝血因子的转基因山羊。回答下列问题：

(1)基因工程的基本操作流程中，当获取目的基因后，在将其导入受体细胞前需要进行一个重要的操作步骤，即构建_______________________，该步骤使用的两种工具酶分别是__________________________________。

(2)从公羊体内采集的精子需经过__________处理，才能在体外与卵细胞结合形成受精卵。常用_______________法将目的基因导入受精卵中，受精卵在体外培养至____________阶段时，再移植到母羊子宫中。

(3)利用分子杂交技术可检测转基因山羊细胞中的人凝血因子基因是否转录出了____________(填“tRNA”、“mRNA” 或“rRNA”)；利用针对_________________的抗体进行抗原－抗体杂交，可检测目的基因是否翻译。

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