下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。请回答：
（1）天然质粒往往需经过改造才能作为基因工程中的运载体，经改造后的质粒同时具备的条件有 （填序号）。
①标记基因
②多个限制酶切割位点
③对受体细胞无害
④启动子
⑤起始密码子
（2）若对图1中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性将会 。
（3）用图2中的人乳铁蛋白目的基因和图1所示的质粒构建重组质粒时，选用的限制酶是 （从“EcoRⅠ”、“BamHⅠ/ HindⅢ”、“SmaⅠ/ HindⅢ”中选择）。不能选择其他限制酶的理由分别
是 、 。
（4）图3中，①常用的导入方法是 ，为了获得雌性转基因牛，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 ，③过程选用的早期胚胎应发育到 阶段。
高三生物非选择题困难题
加试题回答下列（一）、（二）小题：
（一）下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。
（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是________（填字母代号）。
A．ampR B．启动子 C．终止子 D．复制原点
（3）过程①可采用的操作方法是_______(填字母代号)。
A．农杆菌转化 B．显微注射 C．大肠杆菌转化 D．细胞融合
（4）过程②采用的生物技术是______。
（5）对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的_____性。
（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用_____（填字母代号）技术。
A．核酸分子杂交 B．基因序列分析 C．PCR D．抗原—抗体杂交
（二）利用废弃的秸秆生产燃料乙醇，不仅缓解了资源危机、环境污染，同时更为可持续发展提供了保证。下面是利用玉米秸秆来生产乙醇的流程：
（1）从纤维素丰富的土壤中获取微生物1，进行一系列的操作后，用 _________ 将菌种涂布在相应的固体培养基中。
（2）下列有关涂布分离法的叙述错误的是_______
A．从土壤稀释液中取样时，不能只取悬液
B．接种时，涂布工具需先在酒精灯火焰上引燃
C．培养后菌落在整个平板表面分散均匀
D．涂布分离法比划线分离法更易获得单菌落
（3）为了提高生产效率，也可通过培养微生物1获得 ______________酶，并将该酶固定在某介质上制成固定化酶。
（4）微生物2通常是_______________，为了确保获得产物乙醇，接种微生物2时要注意避免_____________，发酵时要注意_____________。这样得到的乙醇浓度不会很高，最高是_________，所以要对生产出来的乙醇经过蒸馏、提纯等加工，才可以得到浓度大于90%的燃料乙醇。
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下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，BAmHI、HinDIII、SmA I直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用__________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含____________的培养基上进行。能驱动人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的____________。过程①采用的操作方法通常是_____________。
（2）过程②代表的生物技术是_____________。对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。目前最常见的是经分割产生的同卵______胎。
（3）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用____________技术。
（4）对代孕牛的要求是_________________。
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下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、Sma I直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用__________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含____________的培养基上进行。能驱动人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的____________。过程①采用的操作方法通常是_____________。
（2）过程②代表的生物技术是_____________。对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。目前最常见的是经分割产生的同卵______胎。
（3）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用____________技术。
（4）对代孕牛的要求是_________________。
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下图表示培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因,ampR表示氨苄青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。请据图回答:
(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有_____________(答出两点即可)。图中将人乳铁蛋白基因插入载体,需用____和____限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是____。
(2)过程①可采用的操作方法是________。
(3)对早期胚胎进行切割,经过程②可获得多个新个体,这利用了细胞的______性。
(4)为检测人乳铁蛋白是否成功表达,可采用________技术。
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（7分，每空1分）下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。
（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是________（填字母代号）。
A．ampR B．启动子 C．终止子 D．复制原点
（3）过程①可采用的操作方法是_______ _(填字母代号)。
A．农杆菌转化 B．显微注射 C．大肠杆菌转化 D．细胞融合
（4）过程②采用的生物技术是____ ____。
（5）对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的______ __性。
（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用_____ ___（填字母代号）技术。
A．核酸分子杂交 B．基因序列分析 C．PCR D．抗原—抗体杂交
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下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉索抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行。能驱动人乳铁蛋白基因的乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的 。过程①采用的操作方法通常是 。
（2）过程②采用的生物技术是_______。对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。目前最常见的是经分割产生的同卵 胎。
（3）为检测人乳铁蛋白基因是否成功表达，可采用 技术。
（4）对代孕牛的要求是 。
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下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中分别表示：tetR为四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉索抗性基因，以及BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用____________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是____________。过程①可采用的操作方法是____________。为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用____________技术。
（2）过程②采用的生物技术是____________。在此之前，需要对代孕牛经过__________处理后，使之与供体的生理状况保持相同。如果对胚胎进行性别鉴定，可选用囊胚期的___________细胞进行鉴定。
（3）用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
①PCR技术扩增目的基因时从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为_______。
②在第____________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
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下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中分别表示：tetR为四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉索抗性基因，以及BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用____________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是____________。过程①可采用的操作方法是____________。为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用____________技术。
（2）过程②采用的生物技术是____________。在此之前，需要对代孕牛经过__________处理后，使之与供体的生理状况保持相同。如果对胚胎进行性别鉴定，可选用囊胚期的___________细胞进行鉴定。
（3）用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
①PCR技术扩增目的基因时从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为_______。
②在第____________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
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如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答：
(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。
(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是________ (填字母代号)。
A.启动子 B.tetR C.复制原点 D.ampR
(3)过程②可采用的生物技术是________________。
(4)对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的________性。
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（2014春•宜昌期中）如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点．
据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 BamHI和HindIII 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因，然后在 DNA连接酶 酶的作用下构建重组载体．筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 氨苄青霉素 的培养基上进行．
（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是 A ．
A．启动子 B．tetR
C．复制原点 D．ampR
（3）过程①可采用的操作方法是 C ．
A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化
C．显微注射 D．细胞融合
（4）过程②采用的生物技术是 胚胎移植 ．
（5）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用 技术．
A．核酸分子杂交 B．基因序列分析
C．抗原﹣抗体杂交 D．PCR．
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