Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图:
(1)步骤①中所选的卵母细胞应处于________________________期。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其________________分离出ES细胞,ES细胞在形态上表现为_____________________________的特点。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的__________________。可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成_____________,利用_______________技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有_________________酶的酶切位点。
高二生物非选择题中等难度题
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
请回答:
(1)该技术流程所涉及的生物工程技术有_________________。
①动物细胞培养 ②细胞核移植 ③胚胎干细胞的分离与培养 ④转基因 ⑤动物细胞融合
(2)在步骤①前,应采用______________普遍使用的方法)对卵母细胞进行处理。
(3)ES细胞在功能上的特性是______。在体外培养时,在培养液中添加____,就可以诱导ES细胞向造血干细胞分化。
(4)左图表示含有Rag2基因的DNA片段,右图表示pZHZ11质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、SmaⅠ4种限制酶识别的碱基序列和切割位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、G↓AATTC、CCC↓GGG。
Rag2基因的获得可以从鼠的胎盘细胞中提取 ________,通过逆转录方法合成含Rag2基因的DNA片段。若将Rag2基因和如图的质粒连接形成重组质粒,那么应选用 _______限制酶切割,而后加入DNA连接酶进行连接。
(5)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据_____________设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。
(6)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞中的___________,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
高二生物非选择题中等难度题查看答案及解析
Rag2 基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES 细胞)对 Rag2 基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的_____。小鼠体细胞体外培养时, 所需气体主要是 O2 和 CO2,其中 CO2 的作用是维持培养液(基)的_____。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到_________期时,可从其内细胞团分离出 ES 细胞。体外培养条件下,ES 细胞在_____细胞上,能够维持只增殖不分化的状态。
(3)步骤③中,需要构建含有 Rag2 基因的表达载体。可以根据 Rag2 基因的__________设计引物,利用 PCR 技术扩增 Rag2 基因片段。PCR 过程需要经过多次循环,每一个循环包括:加热变性→冷却复性→_____,其中冷却复性的目的_________。用 HindⅢ和 PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得 Rag2 基因片段。为将该片段 直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有_____酶的酶切位点。
(4)为检测 Rag2 基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_____,用_______________的抗体进行杂交实验。
高二生物综合题中等难度题查看答案及解析
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的________。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到________期时,可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的________设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用Hind Ⅲ和Pst Ⅰ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有________________酶的酶切位点。
(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的________,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
高二生物综合题中等难度题查看答案及解析
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图:
(1)步骤①中所选的卵母细胞应处于________________________期。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其________________分离出ES细胞,ES细胞在形态上表现为_____________________________的特点。
(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的__________________。可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成_____________,利用_______________技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有_________________酶的酶切位点。
高二生物非选择题中等难度题查看答案及解析
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图:
(1)步骤①中所选的卵母细胞应处于__________________期。
(2)步骤②中,分离出ES细胞比体细胞全能性________。
(3)步骤③中,首先要获取目的基因,以下几种方法中需要模板的是___________
A.从基因组文库中获取目的基因
B.利用PCR 技术扩增目的基因
C.构建cDNA 文库
D.通过DNA 合成仪利用化学方法人工合成目的基因
(4)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的______________。
(5)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质,用抗Rag2蛋白的抗体进行________。
高二生物综合题中等难度题查看答案及解析
(2015•广东四模)Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞,科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.有关叙述错误的有( )
A.步骤①中,在核移植前应该先去除小鼠上皮细胞的细胞核
B.步骤②中,培养到原肠胚期时,可从其内细胞团分离出ES细胞
C.步骤③中,常利用显微注射技术将Rag2基因导入胚胎干细胞中
D.经体外诱导产生的造血干细胞,在小鼠骨髓中能够分化出B细胞
高二生物选择题中等难度题查看答案及解析
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞,科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2 基因缺失小鼠进行基因治疗。有关叙述错误的有
A.步骤①中,在核移植前应该先去除小鼠卵母细胞的细胞核
B.步骤②中,培养到原肠胚期时,可从其内细胞团分离出ES细胞
C.步骤③中,常利用显微注射技术将基因导入胚胎干细胞中
D.经体外诱导产生的造血干细胞,在小鼠骨髓中能够分化出B细胞
高二生物选择题中等难度题查看答案及解析
基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞,以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗的目的。干扰素基因缺失的小鼠不能产生成熟淋巴细胞,科研人员利用胚胎干细胞 细胞)对干扰素基因缺失的小鼠进行了基因治疗。请回答:
(1)为使干扰素基因在小鼠细胞中高效表达,需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入基因表达载体的_____________和_____________之间。
(2)将干扰素基因导入ES细胞的方法是_____________,采用_____________可以鉴定目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA分子上,再将能正常表达干扰素的细胞转入到小鼠体内,这种治疗方法称为____________。
(3)干扰素基因缺失的小鼠易患某种细菌导致的肺炎,引起这种现象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴细胞,降低了小鼠免疫系统的_____________功能。
(4)用于基因治疗的基因有三类,一类是把正常基因导入有基因缺陷的细胞中,以表达出正常性状来治疗,第二类是反义基因,即通过产生的mRNA分子与病变基因产生的_____________进行互补结合,来阻断非正常蛋白质的合成;第三类是编码可以杀死癌细胞的蛋白酶基因。
高二生物非选择题困难题查看答案及解析
Ⅰ、基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞,以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗的目的。干扰素基因缺失的小鼠不能产生成熟淋巴细胞,科研人员利用胚胎干细胞对干扰素基因缺失的小鼠进行了基因治疗。请回答:
(1)为使干扰素基因在小鼠细胞中高效表达,需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入基因表达载体的_____________和_____________之间。
(2)将干扰素基因导入胚胎干细胞细胞的方法是_______________,采用_______________可以鉴定目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA分子上,再将能正常表达干扰素的细胞转入到小鼠体内,这种基因治疗方法称为_______________。
Ⅱ、苦荞是一种有名的经济植物,其含有的黄酮类化合物具有降血糖、血脂等功效。CHS是合成黄酮类化合物的关键酶。有人把经修饰的CHS基因导入苦荞细胞中,培育高产黄酮苦荞品系。按图示回答:
(3)过程①中将修饰后的CHS基因与Ti质粒连接成重组Ti质粒的酶称为______________。这种酶主要有两类,一类是从T4噬菌体中分离得到的,另一类是从大肠杆菌中分离得到的,称为______________。这两类酶都能恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的______________键。
(4)图中将修饰后的CHS基因导入苦荞体细胞的方法称为_____________,对过程②操作前,需先用Ca2+处理农杆菌,使其成为_____________细胞。
高二生物综合题中等难度题查看答案及解析
科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图,请回答下列问题:
(1)图中卵母细胞应在体外培养到______期,步骤①应先对卵母细胞进行______处理。
(2)由图可知,步骤②要分离出ES细胞,需将重组胚胎培养到______期。
(3)步骤③选择ES细胞作为受体细胞而不是上皮细胞,是因为ES细胞______,该过程需要先利用______技术扩增干扰素基因,其前提是要有一段已知干扰素基因的核苷酸序列以便合成______。
(4)步骤④应在培养液中加入______。为检测干扰素基因是否在小鼠体内成功表达,可以采用______技术。
高二生物非选择题中等难度题查看答案及解析