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利用基因工程技术将植物进行改造，使植物成为生物反应器并生产转基因疫苗已成为制药产业重点开发的热点领域。回答下列问题：
（1）在生产疫苗过程中，为将目的基因导入植物受体细胞，通常先用______处理农杆菌，使含有目的基因的重组质粒进入农杆菌，后借助______法改造植物基因组。对改造并脱分化形成的愈伤组织细胞进行______培养，形成特定的细胞系，就可以从培养液中提取疫苗蛋白，该过程实现了人类需要的植物细胞______产物的工业化生产。
（2）从培养液中提取疫苗过程复杂，科学家用一定的方法，使抗原基因表达于植物的可食部位，生产可食疫苗。该方法中可调节______的配比，诱导愈伤组织细胞分化出根、芽的______，进而再生出新的植株。
（3）科学家又发现，以植物病毒为载体构建重组病毒形成植物病毒反应器，并生产转基因蛋白，具有更多优点：病毒基因组小，易操作；______，短时间具有高表达量。烟草花叶病毒的RNA可以作为mRNA合成蛋白质，疟疾的抗原蛋白已由烟草花叶病毒反应器获得，在构建表达载体时，和烟草花叶病毒RNA重组的是______。
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变异链球菌在牙面的粘附、集聚是龋齿发生的先决条件。转基因防龋疫苗是通过基因工程技术，将变异链球菌中与龋齿发生密切相关的抗原基因（PAcA基因）转入植物的表达载体中，利用植物生物反应器生产的基因工程疫苗。请回答下列相关问题：
(1)转基因植物的制备
单一使用PAcA基因，机体免疫应答不理想，霍乱毒素中有增强机体免疫应答的氨基酸序列（CTB)，将CTB基因与PAcA基因连接成嵌合（PAcA-CTB)基因，作为________与Ti质粒的T-DNA拼接，构建表达载体，此过程需要的酶是________。用_______法导入离体的黄瓜叶肉细胞中，经植物组织培养获得转基因植株。相关基因能否在黄瓜细胞中稳定遗传的关键是________。此基因疫苗起抗原作用的是_______(基因/蛋白质）。
(2)转基因植株目的基因的PCR鉴定与检测 已知PAcA-CTB基因部分序列如下（左侧为基因的首端）：
5'…CCGTGT……ATGCCT---3’
3'…GGCACA……TACGGA---5’
根据上述序列选择引物________(填字母）进行PCR。
A.引物：5'-GGCACA-3' B.引物：5，-AGGCAT-3'
C.引物：5'-CCGUGU-3' D.引物：5，-CCGTGT-3'
反应结束后，电泳检测PCR产物，结果如下图（1来自未转化植株，2是含PAcA-CTB基因的质粒，3-8来自转基因植物)，从结果可以看出，________________号植物含有PAcA-CTB基因。若获得的转基因植物并没有产生相应的基因工程疫苗，根据中心法则分析，其可能的原因是_______。
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胚胎干细胞（ES细胞）的研究是当前生物技术领域研究的热点之一，尤其是在生产转基因动物方面具有极大的科研及应用价值。下图表示利用胚胎干细胞所作的一系列研究，请据图分析回答：
（1）过程Ⅰ将胚胎干细胞置于γ射线灭活的鼠胎儿成纤维细胞的滋养层上，并加入_________、抗生素等物质，维持细胞不分化的状态。在此过程中，滋养层提供干细胞增殖所需的营养物质，加入抗生素是为了________，这对于研究细胞分化和细胞凋亡的机理具有重要意义。
（2）过程Ⅱ将带有遗传标记的ES细胞注入早期胚胎的囊胚腔，通过组织化学染色，用于研究动物体器官形成的时间、发育过程以及影响的因素，这项研究利用了胚胎干细胞具有___________的特点。在哺乳动物早期发育过程中，囊胚的后一个阶段是_________。
（3）过程Ⅲ中目的基因导入胚胎干细胞最常用的方法是________，将目的基因转入胚胎干细胞前需构建基因表达载体，其目的是__________。
（4）通过检测目的基因是否表达出蛋白质产品，可以确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组。这种检测方法是________。
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胚胎干细胞（ES细胞）的研究是当前生物技术领域研究的热点之一，尤其是在生产转基因动物方面具有极大的科研及应用价值。如图表示利用胚胎干细胞所作的一系列研究，请据图分析回答：
(1)过程Ⅰ将胚胎干细胞置于γ射线灭活的鼠胎儿成纤维细胞的饲养层上，并加入__________、抗生素等物质，维持细胞不分化的状态。在此过程中，饲养层提供干细胞增殖所需的营养物质，加入抗生素是为了________，这对于研究细胞分化和细胞凋亡的机理具有重要意义。
（2）过程Ⅱ将带有遗传标记的ES细胞注入早期胚胎的囊胚腔，通过组织化学染色，用于研究动物体器官形成的时间、发育过程以及影响的因素，这项研究利用了胚胎干细胞具有____________的特点。在哺乳动物早期发育过程中，囊胚的下一个阶段是_________。
(3)过程Ⅲ中目的基因导入胚胎干细胞最常用的方法是___________，将目的基因转入胚胎干细胞前需构建基因表达载体，其目的是___________________________________________________________________________。
（4）通过检测目的基因是否表达出蛋白质产品，可以确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组。这种检测方法是____________________。
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变异链球菌在牙面的粘附、集聚是龋齿发生的先决条件，转基因可食防龋疫苗是通过基因工程技术，将变异链球菌中与龋齿发生密切相关的抗原基因(PAcA基因)转入植物细胞，利用植物生物反应器生产的可食用基因工程疫苗。
（1）转基因植物的制备：
单一使用PAcA基因，机体免疫应答不理想，霍乱毒素中有增强机体免疫应答的氨基酸序列(CTB)，将CTB基因与PAcA基因连接成嵌合(PAcA—CTB)基因，作为目的基因与Ti质粒的________拼接，并用______法导入离体的豌豆叶肉细胞中，经植物组织培养获得转基因豌豆植株。
（2）对上述含PAcA—CTB基因的豌豆植株进一步研究，发现其中一些植株体细胞中含两个PAcA—CTB基因(用字母A表示，基因无累加效应)。请设计最简便的实验方案探究这两个基因在豌豆染色体的位置。
实验思路：______________________________，观察记录子一代表现型及其比例。
实验结果和结论：
①若F1中疫苗植株出现的概率是_____________，则基因的位置如图甲所示；
图甲：
②若F1中疫苗植株出现的概率是_______，则基因的位置如图乙(请参照图甲绘制图乙并标出基因A的位置)；
图乙：______
③若F1中疫苗植株出现的概率是________，则基因的位置如图丙(请参照图甲绘制图丙并标出基因A的位置)。
图丙：_____
（3）上述三种情况中适于进行推广种植的是两个基因位于_______的植株。多年后，若出现了非疫苗植株，请写出可能的变异类型及产生的原因①___________；②_____________；③_________________。
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脂肪酶在洗涤剂、食品、造纸、油脂、化妆品、制药、生物柴油等多个工业领域中有广泛应用，人们应用生物技术可以对脂肪酶进行改造和生产。回答下列问题。
(1)科学家将脂肪酶位于蛋白质表面的一个异亮氨酸替换为苏氨酸，使脂肪酶的半衰期提高2倍，大大提高其稳定性，在改造过程中需要对_____________ (填“脂肪酶”、“脂肪酶mRNA”或“脂肪酶基因”)进行定向改造，和传统的基因工程相比，该技术的突出优点是_____________。
(2)制备酵母菌作为工程菌生产脂肪酶时，需构建基因表达载体，并使脂肪酶基因插入到基因表达载体的____________________之间，欲检测目的基因是否在受体细胞中转录，应采用的方法是____________ ，和大肠杆菌相比，利用酵母菌作为工程菌生产的脂肪酶一般可以直接投入使用，其原因是________________________________ 。
(3)脂肪酶还可以借助动物细胞的大规模培养来生产，培养动物细胞时所用的合成培养基，通常还需要加入一些_____________等天然成分，培养细胞时需要加入一定量的CO2，其作用是______________。
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变异链球菌在牙面的粘附、集聚是龋齿发生的先决条件，转基因可食防龋疫苗是通过基因工程技术，将变异链球菌中与龋齿发生密切相关的抗原基因（PAcA基因）转入植物的表达载体中，利用植物生物反应器生产的可食用基因工程疫苗。
（1）转基因植物的制备：
单一使用PAcA基因，机体免疫应答不理想，霍乱毒素中有增强机体免疫应答的氨基酸序列（CTB），将CTB基因与PAcA基因连接成嵌合（PAcA-CTB）基因，作为_______与Ti质粒的T-DNA拼接，并用_______法导入离体的黄瓜叶肉细胞中，经植物组织培养获得转基因植株。
（2）转基因植株目的基因的PCR鉴定：已知PAcA-CTB基因部分序列如下
5’---CCGTGT…………ATGCCT---3’
3’---GGCACA…………TACGGA---5’
根据上述序列选择引物__________（填字母）进行PCR。
A. 引物：5′-GGCACA-3′
B. 引物：5′-AGGCAT-3′
C. 引物：5′-CCGUGU-3′
D. 引物：5′-CCGTGT-3′
反应结束后，电泳检测PCR产物，结果如图（1来自未转化植株，2是含PAcA-CTB基因的质粒，3-10来自转基因植物），从结果可以看出，__________号植物含有PAcA-CTB基因。
（3）对上述含PAcA-CTB基因的植株进一步研究，发现其中一些植株体细胞中含两个PAcA-CTB基因（用字母A表示，基因间无累加效应）。为了确定这两个基因与染色体的位置关系，研究人员单独种植每株黄瓜，将同一植株上雄花花粉授到雌花柱头上，通过子一代表现型及其分离比进行分析：
①若F1中疫苗植株∶非疫苗植株=__________，则PAcA-CTB基因位于非同源染色体上，基因与染色体的位置关系如图甲所示。
②若F1中疫苗植株∶非疫苗植株=3∶1，则两个基因位于__________，请在图乙中标出基因。③若F1全为疫苗植株，则两个基因位于__________，请在图丙中标出基因。
（4）上述三种基因与染色体的位置关系适于进行推广种植的是两个基因位于__________的植株。多年后，在子代中出现了非疫苗植株，请推测三种可能的原因。
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利用转基因技术将病毒外壳蛋白基因导入羊细胞中，培育的转基因羊可用于生产基因工程疫苗。
回答下列问题：
（1）为了获得转基因乳腺生物反应器，将病毒外壳蛋白基因导入羊细胞，通常选用的受体细胞是_________。也可以结合体细胞核移植技术获得转基因乳腺生物反应器，此过程中接受体细胞核的细胞是________。
（2）哺乳动物早期胚胎的发育要经历卵裂期、桑椹胚期、_________、________、组织器官形成期等阶段。
（3）在胚胎移植技术中，需对一批母羊持续注射适量激素X，经过一定时期后，同时停止激素X的处理。经检查发现，随着激素X水平的下降，处理的这一批母羊的卵泡同时开始迅速生长，推测使用激素X处理的目的是为了实现供体、受体母羊的________（填“同期发情”或“超数排卵”）。上述操作的目的是________________。
（4）为检测培育的转基因羊是否可用于生产基因工程疫苗，可采用抗原—抗体杂交的方法，该方法的主要操作是_________________。
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目前全世界生物技术药物中，使用生物工程生产的已超过80%，如蛋白质、单克隆抗体、疫苗等，动物细胞工程、基因工程涉及的领域非常广泛。请回答下列问题：
（1）用于动物细胞培养的培养基中通常需要加入____________等天然成分，但由于其含有许多未知成分，对研究结果有所影响，因此，可以采取添加一些已知的促进____________的物质代替其作用。
（2）细胞培养时还需气体环境，其中CO2的作用是____________。培养基中添加一定量的__________以防止培养过程中微生物的污染。
（3）单克隆抗体制备过程中，融合、筛选出杂交细胞后需要经过____________和____________才能得到符合要求的杂交瘤细胞。
（4）应用于核移植的供体细胞一般选用传代10代以内的细胞，原因是____________。
（5）基因工程为一般药物很难治疗的遗传病提供了最有效的治疗手段：基因治疗。基因治疗的思路是________________________。
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目前全世界生物技术药物中，使用生物工程生产的已超过80%，如蛋白质、单克隆抗体、疫苗等，动物细胞工程、基因工程涉及的领域非常广泛。请回答下列问题：
（1）用于动物细胞培养的培养基中通常需要加入____________等天然成分，但由于其含有许多未知成分，对研究结果有所影响，因此，可以采取添加一些已知的促进____________的物质代替其作用。
（2）细胞培养时还需气体环境，其中CO2的作用是____________。培养基中添加一定量的__________以防止培养过程中微生物的污染。
（3）单克隆抗体制备过程中，融合、筛选出杂交细胞后需要经过____________和____________才能得到符合要求的杂交瘤细胞。
（4）应用于核移植的供体细胞一般选用传代10代以内的细胞，原因是____________。
（5）基因工程为一般药物很难治疗的遗传病提供了最有效的治疗手段：基因治疗。基因治疗的思路是________________________。
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