下图是分离烟草原生质体的过程，下列说法错误的是A.制备原生质体的叶片应采用高压蒸汽法进行消...

下图是分离烟草原生质体的过程，下列说法错误的是（　　 ）

A.制备原生质体的叶片应采用高压蒸汽法进行消毒

B.制备原生质体的酶溶液可能含纤维素酶和果胶酶

C.血细胞计数板是检测原生质体密度的工具之一

D.分裂出的烟草原生质体可用于植物体细胞杂交

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研究人员为了制备烟草（四倍体,4n=48）的叶片细胞与紫罗兰（二倍体，2n=14）的紫色花瓣细胞的原生质体，并诱导其融合形成紫罗兰烟草植株，进行了如下实验：

一、原生质体的制备

酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛（以植物为食）消化腺中提取；果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果，某实验小组取无菌烟草幼叶，切成相同大小的小片，等量放入6支试管中，试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题。

（注：“+”越多表示绿色越深，“—”表示颜色无显著变化）

（1）实验过程中，需要轻摇试管，其目的是________，使原生质体从叶小片中游离出来，以便观察悬浮液绿色的深浅。

（2）从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有________

等多种酶。该实验中________是空白对照组，其设置意义是________　　 。

（3）如果对制取的烟草叶肉细胞原生质体是否还有活性进行检验，其检验的方法可以是。

二、用同样方法制取紫罗兰花瓣细胞原生质体悬浮液

三、原生质体融合

将等量的紫罗兰花瓣细胞原生质体悬浮液与烟草叶肉细胞原生质体悬浮液加入到装有20%的PEG溶液的离心管中混合后，离心10min，将分离得到的融合成团的原生质体悬浮液与含有琼脂的液体培养基混合均匀后，凝固形成很薄的平板。再利用有关显微镜观察、鉴定融合的原生质体。请分析：

（4）步骤三中，若所有的原生质体均两两融合，则所得到的某一个融合的原生质体中含有的染色体数可能是 。

（5）只利用显微镜观察，不借助其他手段

________（能，不能）鉴别出杂种融合的原生质体，你所依据的观察现象是。

四、制取紫罗兰烟草的人工种子

（6）如右图2中，包埋形成人工种子过程中，先适当加热使海藻酸钠溶化，然后将溶化的海藻酸钠溶液________，再加入________充分搅拌混合均匀。

若将得到的人工种子播种后成长为成紫罗兰烟草植株，杂种植株为倍体。

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某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：

（1）原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5mol/L甘露醇（维持较高渗透压）的_________混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。

（2）原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该_________培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞团经球形胚、_________和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述发芽培养基中含量相对较高的激素是_________，胚性细胞的主要特点是：_________。

A．液泡小、细胞核小　 B．液泡大，细胞核大　 C．液泡大，细胞核小　 D．液泡小、细胞核大

（3）为了对烟草的某些性状进行改良，分离到两种烟草的原生质体后，通过_________方法将他们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA，采用_________扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。

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通过植物体细胞杂交可以获得“烟草—菠菜” —— 一种新型的烟草品种。下图为培育杂种植株过程的示意图,下列操作不是必需的是(　 )

A.在融合之前除去两种细胞的细胞壁

B.原生质体先进行脱分化处理再融合

C.原生质体融合后筛选杂种细胞继续培养

D.诱导杂种细胞形成愈伤组织再分化成植株

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（14分）下面是烟草叶片原生质体分离和培养的流程图：

请回答：

（1）酶解时，在纤维素酶和果胶酶的混合液中，还需添加________来提高混合液的渗透压，以利于获得完整的原生质体。

（2）获得原生质体后，可用方法检测原生质体是否存活。然后将原生质体制成悬浮液，滴加在________上，用显微镜观察并计数。要判定原生质体是否已形成细胞壁，可用________方法鉴别。

（3）欲通过原生质体培养得到愈伤组织，从培养基的成分考虑，配制培养基时需要注意的主要方面有哪些？

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（14分）下面是烟草叶片原生质体分离和培养的流程图：

请回答：

（1）酶解时，在纤维素酶和果胶酶的混合液中，还需添加________来提高混合液的渗透压，以利于获得完整的原生质体。

（2）获得原生质体后，可用方法检测原生质体是否存活。然后将原生质体制成悬浮液，滴加在________上，用显微镜观察并计数。要判定原生质体是否已形成细胞壁，可用________方法鉴别。

（3）欲通过原生质体培养得到愈伤组织，从培养基的成分考虑，配制培养基时需要注意的主要方面有哪些？

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（6分）植物细胞原生质体的制备是植物体细胞杂交、原生质体转化等技术的基础。下图表示利用机械法和酶解法制备原生质体的简要过程，请据图回答：

（1）将植物叶片放在较高浓度的蔗糖溶液中，一段时间后，在细胞的细胞壁和细胞膜之间充满了＿＿，原因是＿＿。

（2）机械法是指剪碎已经发生质壁分离的组织时，有些细胞只被剪去细胞壁，释放出完整原生质体的方法。使用这种方法，蔗糖溶液浓度对获得原生质体的数量和活性有很大影响，浓度过低会造成＿＿＿＿＿＿＿＿，易剪碎原生质体；浓度过高，则会使＿＿＿＿。

（3）用酶解法制备原生质体的过程中，一般使用＿＿＿处理叶片。与机械法相比，酶解法的优点是＿＿＿。

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植物细胞原生质体的制备是植物体细胞杂交等技术的基础。下图表示利用机械法和酶解法制备原生质体的简要过程，请据图回答：

(1)将植物叶片放在较高浓度的蔗糖溶液中，一段时间后，在细胞壁和细胞膜之间充满了________

________，原因是。

(2)机械法是指剪碎已经发生质壁分离的组织时，有些细胞只被剪去细胞壁，释放出完整原生质体的方法。使用这种方法，蔗糖溶液浓度对获得的原生质体数量和活性有很大影响，浓度过低会造成________不充分，易剪碎原生质体；浓度过高，则会________

________。

（3）用酶解法制备原生质体的过程中，一般使用________处理叶片。与机械法相比，酶解法的优点是。

（4）16×25型的血球计数板的计数室长和宽各为1mm，深度为0.1mm，有以双线为界的中方格16个，每中方格又分成25个小方格。图示一个中方格原生质体的分布情况，以该中方格作为一个样方，计数结果是原生质体有________个。如果计数的中方格原生质体平均数为18个，则1mL培养液中原生质体的总数为________个。

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某研究小组进行植物组织培养相关实验过程如下。下列叙述错误的是（　　）

A.实验过程中叶肉细胞应进行灭菌处理

B.过程①获得的原生质体可用于质壁分离实验

C.实验过程中获得愈伤组织可在显微镜下观察到叶绿体

D.丛生芽可以用于人工种子的制备

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如图表示培养烟草叶肉细胞原生质体进行遗传改良的过程，据图分析错误的是

A．可用红墨水染色的方法检测原生质体有无活性

B．①过程需在一定浓度的甘露醇溶液中用纤维素酶和果胶酶处理

C．④过程要求生长素与细胞分裂素比例合适

D．上述过程中可发生染色体畸变、基因突变和基因重组

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