靶向药物是指被赋予了靶向能力的药物或制剂。其目的是使药物或其载体能瞄准特定的病变部位，并在...

靶向药物是指被赋予了靶向能力的药物或制剂。其目的是使药物或其载体能瞄准特定的病变部位，并在目标部位蓄积或释放有效成分。“生物导弹”就是主动靶向药物的一种，其疗效高、毒副作用小，具有广阔的应用前景。

（1）“生物导弹”可以把抗癌细胞的单克隆抗体跟_________、_________或细胞毒素相结合，借助单克隆抗体的导向作用，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞。

（2）下图是制备单克隆抗体的途径模式图，据图回答问题：

通过过程①___________技术，可以得到多种杂交细胞，再通过③过程用特定的___________筛选出杂种细胞，对上述筛选出的杂种细胞还需要先后多次进行___________和___________，才能获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。

（3）与传统方法生产的抗体相比，单克隆抗体最主要的优点是___________。

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“基因靶向”技术，指的是应用DNA同源重组原理，通过一定的载体，用设计好的目的基因替代靶基因，从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术，科学家可以用小鼠进行实验，使其体内的某种特定基因丧失功能，以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程．请回答有关问题：

（1）获得胚胎干细胞（ES细胞）。ES细胞是由______中分离出来的一类细胞。实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为ES细胞具有发育的______。

（2）获取目的基因：

①目的基因是靶基因的同源片段。经过修饰使靶基因的功能改变或丧失，就可获得目的基因。如果要获得活性降低了的X酶蛋白的目的基因，可以根据此蛋白的结构及功能进行X酶基因的改造，这一技术叫做______工程。

②为了提高实验成功率，需要通过　　　　　　 技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。

（3）构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成，除了目的基因以外，还必须有______基因，以便于细胞的筛选。质粒具有的一个或多个　　　　　　 位点，使目的基因插入其中成为可能，因此常被选作运载体．

（4）　　　　　　 ，并从中筛选，然后培育出小鼠。

①由ES细胞培育出小鼠的过程中，需要采用______技术和______技术。

②为了确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组，可通过观察小鼠的性状来检测，这属于______水平的鉴定。

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最近科学家发现名为WWP2的基因与癌细胞扩散有关，它主要攻击和分解体内的一种可阻止肿瘤细胞扩散的天然抑制剂。如果用药物抑制这一基因的作用，癌细胞可被有效控制在原发部位。下列相关叙述，正确的是（　　 ）

A．癌细胞是原癌基因和抑癌基因选择性表达的结果

B．WWP2基因负责调控细胞周期，控制细胞生长和分裂过程

C．癌细胞易于扩散的原因是细胞之间的黏着性下阵

D．WWP2基因的表达可能使癌细胞表面糖蛋白增多

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生物导弹是一种专门对小细胞肺癌产生特定靶向性的特异性单抗隆抗体。注入静脉后，会“直扑”小细胞肺癌病灶，使其携带的肿瘤化疗药物能“集中火力”抑制、杀灭肿瘤细胞。这预示着化疗药物有望弥补“良莠不分”、损害自身免疫力的缺陷。

（1）制备单克隆抗体过程中，小鼠必须经过_______才能获得所需要的淋巴细胞，杂交瘤细胞的特点是________________________________________。

（2）在制备杂交瘤细胞的过程中需要经过两次筛选，两次筛选的目的分别是________________、　 __________。

（3）杂交瘤细胞产生的单克隆抗体注入静脉后能够“直扑”肿瘤细胞，原因是______。

（4）单克隆抗体与肿瘤细胞特异性结合后，其携带的药物作用于肿瘤细胞使之发生_____，从而消灭肿瘤细胞。

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研究表明，青蒿素对多种癌细胞均有抑制作用。转铁蛋白是人体内重要的转运蛋白，由于恶性肿瘤细胞表面过度表达转铁蛋白受体，因此转铁蛋白被广泛应用为药物载体，将抗肿瘤药物转运到肿瘤细胞，实现靶向药物运输。在抗癌作用机制的研究中发现，肿瘤细胞的细胞膜是青蒿素攻击的主要靶点。肿瘤细胞膜遭到破坏后，其通透性就随之发生改变,一方面细胞外大量的钙离子会进入细胞内，诱导细胞程序化死亡,即“凋亡”。另一方面细胞膜通透性的增加导致细胞内的渗透压发生变化,细胞吸收大量水分后,发生膨胀直至细胞死亡，即“胀亡”。

(1)肿瘤细胞表面的转铁蛋白受体的化学本质是__________,细胞癌变是细胞_________分化的结果。

(2)设计实验验证青蒿素对癌细胞有抑制作用。（注意:转铁蛋白单独对癌细胞不起作用，青蒿素单独对癌细胞也不起作用，药物对正常细胞不起作用。）

材料用具:乳腺癌细胞悬液、正常乳腺细胞悬液、转铁蛋白、水溶性青蒿素、血细胞计数板、显微镜等。

①_______________________________。

②______________________________。

③_______________________________。

④_______________________________。

(3)预测实验结果_______________________________。

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基因治疗是把外源基因导入人体靶细胞，通过其正常表达来治疗相应疾病的治疗方法。通常需要把目的基因与一种靶向性载体结合后再实施治疗，下面关于靶向性载体选择的叙述不正确的是

A．容易穿过细胞膜                    B．能保护DNA免受核酸酶的降解

C．能够和目的基因结合也能脱离        D．能长时间存在于细胞内不被降解

考点：基因工程的应用、转基因的安全性

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RAS基因是一类与癌症发生有关的基因，该基因突变后被激活，产生了位于细胞特定部位的X蛋白，导致细胞生长和增殖异常，进而引发癌变。科学家研发出一种单克隆抗体RT11－i，能靶向结合癌细胞内的X蛋白使其失活，从而抑制癌细胞的增殖。下图表示体外培养条件下，RT11－i与经改造的海拉细胞(人宫颈癌细胞)作用的过程，请据图分析回答：

(1) 从功能上看，RAS基因属于________(填“原癌基因”或填“抑癌基因”)，该基因________(填“存在”或填“不存在”)于正常细胞中。

(2) 海拉细胞在培养瓶中培养时的特点有______________________等。

(3) 通常情况下，抗体由于其大分子性和亲水性而不能穿过活细胞的细胞膜，只能在________中起作用，而RT11－i可以通过________(填细胞运输物质方式)进入癌细胞内发挥作用。

(4) 改造的海拉细胞是通过转基因技术导入GFP1－10基因形成的，能成功表达相关蛋白，该蛋白片段能与RT11－i上的GFPll蛋白片段相结合。而X蛋白也能在药物的处理下发出红色荧光。实验中发现有的海拉细胞内发出了绿色荧光，这一事实表明______________________。进而发现细胞中红色荧光区域一定伴有绿色荧光，呈现红、绿荧光相伴现象，该事实说明________________________________________________________________________。

(5) 实验表明，利用单克隆抗体RT11－i有望实现对于RAS突变型癌细胞在________水平上的诊断和靶向的治疗，为人类攻克癌症提供了更加灵敏和精准的途径。

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免疫脂质体是将抗体通过聚合物结合在脂质体（双层磷脂分子构成）上构建而成的，它利用抗体特异性靶向作用，与肿瘤细胞表面的抗原结合，将脂质体包裹的药物送达病灶部位，这为乳腺癌的治疗提供了一种新途径。

（1）人类表皮生长因子受体-2（HER2）基因在乳腺癌发生早期具有高表达现象，提高了乳腺癌细胞的转移潜能。研究人员将HER2作为_________刺激小鼠产生免疫反应。获取免疫细胞后，利用_________技术制备单克隆抗体TMAB，其通过阻断_________在HER2上的附着，产生抗肿瘤的效应。

（2）阿霉素是一种脂溶性小分子，可通过_________方式进入细胞，抑制细胞增殖，但其毒副作用较大，利用脂质体将其包裹，通过缓释可以降低药物对机体的毒副作用。

（3）研究者将TMAB与包含阿霉素的脂质体融合，制备出新型的抗乳腺癌药物阿霉素免疫脂质体。为确认阿霉素免疫脂质体的靶向性，研究者设计以下实验，并测定了各组阿霉素进入细胞的量。

注：＋表示添加；－表示不添加

实验中利用的ａ是_________细胞，若_________，说明阿霉素免疫脂质体具有靶向性。

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免疫脂质体是将抗体通过聚合物结合在脂质体（双层磷脂分子构成）上构建而成的，它利用抗体特异性靶向作用，与肿瘤细胞表面的抗原结合，将脂质体包裹的药物送达病灶部位，这也为乳腺癌的治疗提供了一种新途径。请回答。

（1）人类表皮生长因子受体-2（HER2）基因在乳腺癌发生早期具有高表达现象，提高了乳腺癌细胞的转移潜能。研究人员将HER2作为___________刺激小鼠产生___________免疫反应，获取免疫细胞后，制备单克隆抗体TMAB，其通过阻断___________在HER2上的附着，产生抗肿瘤的效应。

（2）阿霉素是一种脂溶性小分子，可通过___________的方式进人细胞，抑制细胞增殖，但其毒副作用较大，利用脂质体将其包裹，通过缓释可以降低药物对机体的毒副作用。

（3）研究者将TMAB与包含阿霉素的脂质体融合，制备出新型的抗乳腺癌药物阿霉素免疫脂质体。为确定其作用效果，测定了不同条件下阿霉素进入细胞的量，实验设计及结果如下所示。

注:“+”表示添加，“-”表示不添加。

和阿霉素脂质体相比，阿霉素免疫脂质体的药物入胞量___________。但___________组阿霉素进入细胞的量最高，原因是____________________________________________。

（4）为确认阿霉素免疫脂质体的靶向性，研究者设计了以下实验，并测定了各组阿霉素进入细胞的量。实验中利用的a细胞是_______________________________，若____________________________________，说明阿霉素免疫脂质体具有靶向性。

注:“+”表示添加，“-”表示不添加。

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下图为某科研小组采用“基因靶向”技术先将小鼠的棕褐毛色基因导入黑色纯种小鼠的ES细胞中，再将改造后的ES细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程。请据图分析并回答问题。

(1)在目的基因获取和构建基因表达载体过程中需要使用的限制酶是_______________，完成此过程还需要的工具酶是_______________ 。

(2)过程Ⅲ常用的方法是_______________。为提高操作的成功率，过程Ⅲ后，需筛选出_______________，才能进行过程IV。

(3)图示技术表明，ES细胞在功能上具有_______________性；目前研究人员正尝试通过科技手段利用ES细胞经过特殊诱导分化，为因故失去手的患者提供新的“手”，完成该过程的实质是_______________。

(4)若经图示过程培育成的小鼠仍为黑色，则能否说明未成功导入棕褐毛基因？_______________，你的理由是_______________。

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