已知限制性核酸内切酶BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT。图1，图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
（1）基因工程常用载体除质粒外，还有___________________。若要使目的基因在受体细胞中稳定遗传并表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是__________（答两点）
（2）用图中质粒和目的基因构建重组质粒时，若只能选择一种限制酶，则应选用__________来切割。为避免目的基因反向插入带来的不正常表达，应选用两种限制酶__________切割质粒，选用两种限制酶___________________切割含目的基因的DNA片段。
（3）利用PCR技术扩增目的基因时，可以从图2的A、B、C、D四种单链DNA片段中选取__________作为引物。
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已知限制性核酸内切酶BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT。图1，图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
（1）基因工程常用载体除质粒外，还有___________________。若要使目的基因在受体细胞中稳定遗传并表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是__________（答两点）
（2）用图中质粒和目的基因构建重组质粒时，若只能选择一种限制酶，则应选用__________来切割。为避免目的基因反向插入带来的不正常表达，应选用两种限制酶__________切割质粒，选用两种限制酶___________________切割含目的基因的DNA片段。
（3）利用PCR技术扩增目的基因时，可以从图2的A、B、C、D四种单链DNA片段中选取__________作为引物。
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图1表示含有目的基因D的DNA片段和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 四种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列分析中正确的是（ ）
A.限制酶MspI 和SmaI 的识别序列相同，切割后的产物也相同
B.要把图 2 中质粒和目的基因 D 拼接应选限制酶BamHI 和MboI
C.若用BamHI 切割图 2 质粒，则抗生素 B 抗性基因为标记基因
D.若图 1 用限制酶SmaI 完全切割后会产生 4 种不同的 DNA 片段
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图l表示含有目的基因D的DNA片段和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspI、BamHI、MboI、SmaI四种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG，G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．下列分析中正确的是（ ）
A. 若用限制酶MspI完全切割图1中DNA片段，会破坏2个磷酸二酯键
B. 若图1用限制酶SmaI完全切割后会产生4种不同的DNA片段
C. 若切割图2中的质粒以便拼接目的基因D应选择限制酶BamHI和MboI
D. 导入含有目的基因D的重组质粒的细菌在添加抗生素A和B的培养基上不能存活
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图1表示含有目的基因D的DNA片段，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
（1）用限制酶SmaⅠ完全切割图1的DNA片段，产物中至少有_______种不同DNA片段。
（2）为了提高实验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因，在此过程中，要有一段_________________，以便根据这一序列合成引物。
（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_______。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般先用添加抗生素B的培养基进行培养，然后将生长的菌接种到只含______的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。
（4）假设用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，若要将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，___________（是/否/不一定）能用BamHⅠ，为什么?__________。
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图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列，现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG，请回答下列问题：
（1）若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，其产物长度为_____________。
（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaI完全切割，产物中共有____种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过_________技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因。
（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______________。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般先用添加_________的培养基进行培养，然后将生长的菌接种到只含____________的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。
（4）假设用BamHI切割DNA获取目的基因，用MboI切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BamHI? _____（能，不能，不一定）。因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处_______________。
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如图为某种质粒简图，如图表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指分别为限制 性核酸内切酶EcoRI、BamHI、HindⅢ的酶切位点。下列有关叙述错误的是
A. 如果用EcoRI对外源DNA和质粒进行酶切，将多个含有目的基因的DNA片段与多个质粒的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有三种
B. 如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoRI酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcoR I酶切点有1个
C. 为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时应使用BamHI和HindⅢ两种限制酶同时处理
D. —个图1所示的质粒分子经EcoRI切割后，含有2个游离的磷酸基团
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限制性内切酶是—种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图依次为四种限制酶．BanHI，EcoRI，HindⅢ以及BgIⅡ的切割位点和辨识序列。为防止酶切后含目的基因的DNA片段自身连接成环状，下列不能同时切割目的基因的是（ ）
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若要利用某目的基因（见图甲）和P1噬菌体载体（见图乙）构建重组DNA(见图丙），限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ(A↓GATCT)、EcoRI（G↓AATTC)和Sau3AⅠ(↓GATC)。下列分析合理的是
A. 用EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
B. 用BglⅡ和EcoRⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
C. 用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
D. 用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体
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若要利用某目
的基因（见图甲）和P1噬菌体载体（见图乙）构建重组DNA（见图丙），限制性核酸内切酶的酶切位点分别是Bgl Ⅱ（A↓GATCT）、EcoR Ⅰ（G↓AATTC）和Sau3A Ⅰ（↓GATC）。下列分析合理的是（ ）
A．用EcoR Ⅰ切割目的基因和P1噬菌体载体
B．用Bgl Ⅱ和EcoR Ⅰ切割目的基因和P1噬菌体载体
C．用Bgl Ⅱ和Sau3A Ⅰ切割目的基因和P1噬菌体载体
D．用EcoR Ⅰ和Sau
3A Ⅰ切割目的基因和P1噬菌体载体
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若要利用某目的基因（见图甲）和P1噬菌体载体（见图乙）构建重组DNA（见图丙），限制性核酸内切酶的酶切位点分别是Bgl Ⅱ（A↓GATCT）、EcoR Ⅰ（G↓AATTC）和Sau3A Ⅰ（↓GATC）。下列分析合理的是（ ）
A. 用EcoR Ⅰ切割目的基因和P1噬菌体载体
B. 用Bgl Ⅱ和EcoR Ⅰ切割目的基因和P1噬菌体载体
C. 用Bgl Ⅱ和Sau3A Ⅰ切割目的基因和P1噬菌体载体
D. 用EcoR Ⅰ和Sau3A Ⅰ切割目的基因和P1噬菌体载体
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