基因工程的第一步是筛选获取目的基因，利用PCR技术获取目的基因是一种常用的手段。图示某DNA分子经切后，DNA片段自身环化并利用PCR技术扩增的部分过程。
（1）PCR与生物体内DNA复制过程不同，解旋时不需要_______________酶催化而是通过_______________实现的，因此PCR技术使用的DNA聚合酶必须是_______________的。
（2）如果在某基因组中定位了一个目的基因X，其碱基序列未知，但已知X临近区域的一段DNA序列，此时可利用图示方法进行目的基因的筛选和扩增。作用于图示多个酶切点的限制酶种类应_______________（相同/不同）。操作时根据图中的_______________设计引物，将含有目的基因的DNA片段克隆出来，为便于目的基因与载体结合，可在_______________添加特定的限制酶识别序列。
（3）实践中也常用RT-PCR技术扩增目的基因，这种技术是以RNA为模板。若利用RT-PCR技术扩增胰岛素基因，应选择_______________细胞提取RNA。
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基因工程的第一步是筛选获取目的基因，利用PCR技术获取目的基因是一种常用的手段。图示某DNA分子经切后，DNA片段自身环化并利用PCR技术扩增的部分过程。
（1）PCR与生物体内DNA复制过程不同，解旋时不需要_______________酶催化而是通过_______________实现的，因此PCR技术使用的DNA聚合酶必须是_______________的。
（2）如果在某基因组中定位了一个目的基因X，其碱基序列未知，但已知X临近区域的一段DNA序列，此时可利用图示方法进行目的基因的筛选和扩增。作用于图示多个酶切点的限制酶种类应_______________（相同/不同）。操作时根据图中的_______________设计引物，将含有目的基因的DNA片段克隆出来，为便于目的基因与载体结合，可在_______________添加特定的限制酶识别序列。
（3）实践中也常用RT-PCR技术扩增目的基因，这种技术是以RNA为模板。若利用RT-PCR技术扩增胰岛素基因，应选择_______________细胞提取RNA。
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利用PCR技术扩增目的基因是目的基因获取的常用方法之一。现有目的基因“X基因”，它是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，如图2所示。
（1）获取目的基因是实施基因工程的第一步，基因工程的核心步骤是________，基因工程的原理是________。目的基因的获取除利用PCR技术扩增外，还可以从基因文库中获取。基因文库包含____和____等类型，前者的基因中含有启动子。。
（2）PCR的原理是____。PCR扩增的过程一般是：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的____，该过程在细胞内也可利用____酶实现。复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠________完成。在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是
________。
（3）至少需要循环一～轮，图2所示的五种不同的DNA分子在产物中才都会出现。经4轮循环后，图中④、⑤所示的DNA分子数分别占DNA分子总数的比例为________和________。
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有关PCR技术的说法，不正确的是（ ）
A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术
B．PCR技术的原理是体外模拟DNA的复制
C．利用PCR技术获取目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列已知
D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA
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下列有关PCR技术的说法不正确的是
A.PCR技术是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术
B．PCR技术的原理是DNA双链复制
C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有—段已知目的基因的核苷酸序列
D.PCR技术中必须有解旋酶才能解开双链DNA
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有关PCR技术的说法，不正确的是（ ）
A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术
B．PCR技术的原理是DNA双链复制
C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列
D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA
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有关PCR技术的说法，不正确的是
A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术
B．PCR技术的原理是DNA双链复制
C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列
D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA
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利用PCR技术从某种生物的基因组DNA中获取目的基因的前提是( )
A.有目的基因的DNA片段，作为模板进行复制
B.有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物
C.有足够的脱氧核苷酸作为原料
D.加入足够数量的DNA连接酶进行指数式扩增
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植物基因工程在农业中的应用发展迅速。其中最关键的核心是构建基因表达载体,在此之前首先要获取目的基因,PCR是获取大量目的基因的一种方法,PCR技术可以实现在生物体外复制特定的DNA片段。最后将目的基因导入受体细胞并检验是否可以维持和表达其遗传特性。
（1）抗病转基因植物所采用的基因,使用最多的是_____________（答一种即可）。
（2）PCR技术的原理是________________；构建基因表达载体的目的是______________________（答出两点即可）。
（3）我国的转基因抗虫棉用的方法是_______________；将目的基因导入单子叶植物常用的方法是____________；导入双子叶植物常用的方法是______________，在此方法中，植物受到损伤后会分泌__________________________。
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PCR技术是把某一DNA片段在酶的作用下，在体外合成许多相同片段的一种方法，利用它能快速而特异的扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段；电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖凝胶)中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质作亲子鉴定。图中是电泳装置及相应电泳结果。
(1)电泳和叶绿体色素分离采用的纸层析法比较，后者使用的介质是________，叶绿体中的色素能够在滤纸上彼此分离开的原因是________________________________________________。
(2)PCR技术能把某一DNA片段进行扩增，依据的原理是_____________。PCR实验步骤主要包括 。
(3)图3是把含21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，据图可推知该多肽由______种氨基酸构成。
(4)图4通过提取某小孩和其母亲以及待测定的四位男性的DNA，分别由酶处理后，生成含有若干DNA片段，并进行扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱。请分析：F1～F4中，谁是该小孩真正生物学上的父亲？为什么？____________________________________________________。
(5)电泳过程中分子的迁移速率除了与本身所带的净电荷的多少有关外，你认为还与什么因素有关？(至少列出一种)________________________________________________________。
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基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段。如图是基因工程示意图，请据图回答下列问题：
（1）利用PCR技术对目的基因进行扩增时，需加入____________酶。该技术依据的原理是____________，在操作步骤中需要加热至90～95℃使____________，然后降温至55～60℃，使________________________。
（2）进行①过程时，需用________________________酶切开载体以插入目的基因。若要使目的基因在受体细胞中表达，需要导入基因表达载体，而不是直接导入目的基因，其原因是：________________________________________________（答出两点即可）。
（3）若图中宿主细胞为大肠杆菌，一般情况下②过程采用____________处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞 。
（4）真核生物基因（目的基因）在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用________________________缺陷型的大肠杆菌作为受体细胞，并在蛋白质纯化的过程中应添加蛋白酶的抑制剂。
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