人体移植器官短缺是一个世界性难题。目前科学家正试图利用基因工程方法对哺乳动物器官进行改造，已培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆器官，其操作过程如图：
（1）过程一：获取供体组织块并剪碎后，需用_______处理，使组织细胞分散。
（2）过程二中需要用Cas9将a-Gal抗原基因从供体DNA中敲除，则Cas9是_____酶。可将含有a-Gal抗原基因的DNA片段用放射性同位素标记作为探针，使探针与②细胞的DNA杂交，若_______，则表明该基因已成功敲除。
（3）过程三：将人类基因导入受体细胞常用_______技术，在工具酶______的作用下将该基因与②细胞的DNA进行定点整合。检测人类基因是否成功表达，可用_______技术。
（4）过程五：通常需要将早期胚胎培养至_______阶段才可进行胚胎移植。进行核移植后的重组细胞可以发育成基因修饰克隆供体是因为_______。
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人体移植器官短缺是一个世界性难题。目前科学家正试图利用基因工程方法对哺乳动物器官进行改造，已培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆器官，其操作过程如图：
（1）过程一：获取供体组织块并剪碎后，需用_______处理，使组织细胞分散。
（2）过程二中需要用Cas9将a-Gal抗原基因从供体DNA中敲除，则Cas9是_____酶。可将含有a-Gal抗原基因的DNA片段用放射性同位素标记作为探针，使探针与②细胞的DNA杂交，若_______，则表明该基因已成功敲除。
（3）过程三：将人类基因导入受体细胞常用_______技术，在工具酶______的作用下将该基因与②细胞的DNA进行定点整合。检测人类基因是否成功表达，可用_______技术。
（4）过程五：通常需要将早期胚胎培养至_______阶段才可进行胚胎移植。进行核移植后的重组细胞可以发育成基因修饰克隆供体是因为_______。
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人体移植器官短缺是一个世界性难题。目前，科学家正试图利用基因工程方法对猪的器官进行改造，再结合克隆技术，培养出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪器官。下图为科学家借助CPISPR－Cas9 基因编辑技术剔除猪抗原决定基因的示意图（不同的sgRNA可以识别不同的DNA序列），请回答下列问题：
（1）DNA重组技术主要用到的工具酶包括DNA连接酶和_________________。图中充当该酶的物质是_________________。
（2）Cas9－sgRNA 复合体能够精准识别某核苷酸序列的原因可能是_________________。
（3）培育转基因猪时，应使用_________________技术将剔除了猪抗原决定基因的基因表达载体导入猪成纤维细胞中，再将该细胞的细胞核注入_________________期的去核卵母细胞中，构建重组胚胎。
（4）胚胎培养液中除了一些无机盐和有机盐外，还需要添加“两素”（维生素、激素）、“两酸”等营养成分，以及血清等物质，其中“两酸”是指_________________。
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供体细胞的抗原决定基因能编码抗原或与抗原形成的关的酶，导致器官移植过程中出现免疫排斥。科学家利用基因工程方法对猪的基因组进行改造，以解决人体移植器官的短缺和免疫排斥问题。回答下列问题：
（1）对猪基因组进行改造，可以选择某种有调控作用的目的基因，重组后导入爱体细胞，以达到抵制猪抗原决定基因_______________的目的。进行DNA重组时需要使用的工具酶是___________。
（2）选择猪胚胎干细胞作为受体细胞，胚胎干细胞是由_____________或______________中分离出来的一类细胞。将目的基因导入后，利用标记基因的作用_____________________含有目的基因的受体细胞。
（3）将含有目的基因的胚胎干细胞注入猪囊胚，而后将囊胚通过________________技术移入受体子宫，获得转基因猪。
（4）采用核移植技术克隆转基因猪时，应选用处于______________期的卵母细胞作为受体细胞；随后从构建的重组胚胎中分离得到胚胎干细胞，经诱导分化形成多种器官，这是利用了胚胎干细胞的_________________。
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目前，器官移植面临的世界性难题是器官短缺。现代生物工程技术的兴起迎来了解决这一难
题的曙光。
（1）利用转基因动物作器官移植的供体。科学家将目光集中在小型猪身上，实现这一目标的最大难题是 。科学家试图用基因工程方法对动物器官进行改造：向器官________（填“供体”或“受体”）基因组中导入某种调节因子，以抑制________（抗原或抗体）决定基因的表达，或设法除去该基因，再结合克隆技术，培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪。
（2）利用克隆技术获得器官。据图回答下列问题
1、图示过程应用到的生物技术主要有______________ 。
2、若将上述技术用于白血病病人的骨髓移植，图中患者是O型血，提供卵细胞的女性是AB型血，则骨髓移植成功后患者的血型是__________型。
3、按上述方法克隆器官在器官移植方面的主要优点是______。
4、在克隆人的问题上，中国政府的态度是 。
①禁止生殖性克隆人②坚持四不原则（不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验） ③不反对治疗性克隆 ④不反对生殖性克隆和治疗性克隆
A．①② B．①②③ C．②③④ D．①②③④
（3） 利用ES细胞培养技术获得移植器官。ES细胞在培养液中加入________________可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化。如果要移植自身ES细胞培育出的器官，患者还是否需要长期使用免疫抑制药物？（是或否）
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据卫生部统计，中国每年约有150万的人需要器官移植，但是每年仅1万人能够接受移植手术。器官缺乏和免疫排斥是器官移植过程中存在的两大世界性难题。
（1）有些研究人员正试图利用基因工程方法对与人相似的动物器官进行改造，采用的方法是向器官供体动物的___________中导入某种调节因子，以抑制______________的表达，或设法除去抗原决定基因，再结合______________技术，培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆动物器官。
（2）有些研究人员利用体细胞核移植技术培养免疫匹配的移植器官，具体思路是：将病人体细胞核移入培养到______________（时期）的去核卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎。利用从早期胚胎分离出来的胚胎干细胞（ES或EK细胞）具有______________，在培养液中加入______________，诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化。
（3）克隆技术目前尚不成熟，有较大的争议，对此中国政府的态度是______________生殖性克隆人。一再重申四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人的实验。但是______________治疗性克隆。
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供体器官的短缺和排斥反应是制约器官移植的两个重要问题。如何利用现代生物科学技术解决这一难题成为热点问题。
（1）目前临床器官移植多为同种异体移植，患者需要长期服用___________，预防排斥反应。为了扩大器官供体的来源，人们尝试异种移植，人们发现小型猪的器官可用来替代人体器官进行移植，但小型猪器官表面的某些抗原仍可引起免疫排斥。目前科学家正试图利用基因工程对小型猪的器官进行改造，在改造中导入小型猪基因组中的一些调节因子属于基因工程中的___________,作用是___________ ，再利用克隆技术培育出没有免疫排斥反应的猪器官，从而解决供体短缺问题。获得该转基因猪的核心步骤是_________。治疗性克隆能最终解决这两个问题。下图是治疗性克隆的过程图解。
（2）自体移植供受体为同一个体，最大的优点是___________，但移植器官种类受限。利用细胞工程技术的治疗性克隆，重组细胞培养时除了保证无菌、无毒环境，还需丰富的营养，通常会在培养液中加入________等天然成分。核移植的胚胎干细胞通常只分裂不分化，所以需在培养液中加入___________诱导形成相应的组织、器官后用于移植。
（3）重组细胞发育的过程中，若想获得基因型完全相同的两个胚胎，采用胚胎分割技术。与试管婴儿不同的是该技术属于______（有性／无性）生殖。
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请根据资料回答问题：
资料1：人体器官移植最大的难题是免疫排斥。猪细胞表面有一些人体没有的抗原，如α-1，3半乳糖苷转移酶就是其中的一种，因此人体会对移植的猪器官产生免疫排斥反应。
资料2:可利用基因打靶技术对猪细胞α-l，3半乳糖苷转移酶基因进行改造，去除α-l，3半乳糖苷转移酶引起的免疫排斥，主要过程如下：
第一步：从猪囊胚中分离出胚胎干细胞（野生ES)。需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步：在含有一段与靶基因同源的序列上，插入新霉素抗性基因（neo)完成打靶载体的构建。
第三步：打靶载体导入胚胎干细胞，与含有同源序列的DNA分子重新组合，发生置换，形成突变ES细胞基因。
第四步：突变ES细胞筛选、增殖。
（1）资料2基因改造过程中，“靶基因”是________，打靶载体的构建过程相当于基因工程基本操作步骤中的__________。插入新霉素抗性基因后，“靶基因”不能表达的原因是_________，插入的新霉素抗性基因作为标记基因起到___________作用。
（2）利用克隆技术，使突变ES细胞增殖、分化，培育出不合成α—1，3半乳糖苷转移酶的猪器官，该过程体现了胚胎干细胞在功能上具有__________。但得到的器官还不能直接移植入人体，原因是_______。
（3）基因打靶技术给人体移植器官短缺难题的解决带来了可能。据图可知，该项技木能精准定位进行基因改造是由于_____________。
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请根据资料回答问题：
资料1：人体器官移植最大的难题是免疫排斥。猪细胞表面有一些人体没有的抗原，如α-l，3半乳糖苷转移酶就是其中的一种，因此人体会对移植的猪器官产生免疫排斥反应。
资料2:可利用基因打靶技术对猪细胞α-l，3半乳糖苷转移酶基因细胞进行改造，去除α-l， 3半乳糖苷转移酶引起的免疫排斥，主要过程如下：
第一步：从猪囊胚中分离出胚胎干细胞（野生ES）。需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步：在含有一段与靶基因同源的序列上，插入新霉素抗性基因（neo）完成打靶载体的构建。
第三步：打靶载体导入胚胎干细胞，与含有同源序列的DNA分子重新组合，发生置换，形成突变ES细胞基因。
第四步：突变ES细胞筛选、增殖。
（1）除了经济易获取因素外，请写出科学家选择猪器官作为人体器宫移植供体的生物学依据（写出其中一条即可）____________________________________________。
（2）资料2基因改造过程中，“靶基因”是______________________，打把载体的构建过程相当于基因工程基本操作步骤中的______________________。插入新霉素抵抗基因后，“靶基因”不能表达的原因是______________________，插入的新霉素抵抗基因作为标记基因起到______________________作用。
（3）利用___________技术，使突变ES细胞增殖、分化，培育出不合成α—1，3半乳糖苷转移酶的猪器官，但得到的器官还不能直接移植入人体，原因是______________________。
（4）基因打靶技术给人体移植器官短缺难题的解决带来了可能，该项技木能精准定位进行基因改造是由于______________________。
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请根据资料回答问题：
资料1：人体器官移植最大的难题是免疫排斥。猪细胞表面有一些人体没有的抗原，如α-l,3半乳糖苷转移酶就是其中的一种，因此人体会对移植的猪器官产生免疫排斥反应。
资料2：可利用基因打靶技术对猪细胞α-l,3半乳糖苷转移酶基因进行改造，去除α-l,3半乳糖苷转移酶引起的免疫排斥，主要过程如下：
第一步：从猪囊胚中分离出胚胎干细胞（野生ES）。需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步：在含有一段与靶基因同源的序列上，插入新霉素抗性基因（neo）完成打靶载体的构建。
第三步：打靶载体导入胚胎干细胞，与含有同源序列的DNA分子重新组合，发生置换，形成突变ES细胞基因。
第四步：突变ES细胞筛选、增殖。
（1）除了经济易获取因素外，请写出科学家选择猪器官作为人体器官移植供体的生物学依据（写出其中一条即可）_______________。
（2）资料2基因改造过程中，“靶基因”是______________，打靶载体的构建过程相当于基因工程基本操作步骤中的_____________。插入新霉素抗性基因后，“靶基因”不能表达的原因是___________，插入的新霉素抗性基因作为标记基因起到_______作用。
（3）利用克隆技术，使突变ES细胞增殖、分化，培育出不合成α—1，3半乳糖苷转移酶的猪器官，该过程体现了胚胎干细胞在功能上具有_____________。但得到的器官还不能直接移植入人体，原因是______________________________。
（4）基因打靶技术给人体移植器官短缺难题的解决带来了可能。据图可知，该项技木能精准定位进行基因改造是由于_____________________________。
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人体移植器官短缺是一个世界性难题。但随着生物技术的发展，人们逐渐有了新的解决思路：
I.寻求可替代器官
剔除猪的某些基因，用猪的器官作为供体。目前科学家借助CPISPR—Cas9基因编辑技术能够剔除猪的某些相关基因，如图为Cas9蛋白依据sgRNA片段切割DNA示意图（不同的sgRNA可以识别不同的DNA序列），请回答下列问题：
（1）DNA重组技术主要用到的工具酶包括DNA连接酶和_____________，图中充当该酶的物质是_________________。
（2）Cas9—sgRNA复合体能够精准识别某核苷酸序列的原因可能是_____________。
II.自体器官培养
大体思路是：将病人的体细胞核放入去核的卵母细胞中，让重组细胞发育为早期胚胎，利用胚胎干细胞诱导分化为特定的器官。
（3）重组细胞体外培养需要一定的O2和CO2，CO2的主要作用是__________；胚胎干细胞的功能特点为：______________。
（4）该过程的核心技术是：_________，该过程依据的原理是_________。这种方法获得的器官移植时不会发生免疫排斥反应，这是因为：_____________。
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