甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质。为了改善黄瓜的品质，科学家采用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因...

甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质。为了改善黄瓜的品质，科学家采用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，得到了转基因植株。回答下列问题：

（1）用农杆菌感染时，应优先选用黄瓜________（填“受伤的”或“完好的”）叶片与含重组质粒的农杆菌共培养，选用这种叶片的理由是________________________。农杆菌转化法通常适用于________植物。

（2）若在转基因黄瓜中检测到这种甜蛋白，则表明该重组质粒中________已转移到植物细胞中且能够表达；用该转基因黄瓜的某一植株与多株非转基因植株杂交，发现子代中含甜蛋白个体数与不含甜蛋白个体数之比均为1∶1，则说明甜蛋白基因已经整合到________（填“核基因组”“线粒体基因组”或“叶绿体基因组”）中。

（3）检测发现，转入的甜蛋白基因在黄瓜细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与甜蛋白基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按如图方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。

① 这是一种________技术。

② 图中所示的4次PCR都涉及到引物的选择，其中PCR1选择的引物是________（填字母，下同），PCR2选择的引物是________。

A． 引物A　　B． 引物B

C． 引物C　　　　 D． 引物D

（4）假设某种转基因作物因为受到病毒感染而减产，若要以该转基因作物的丛芽、胚状体为材料获得脱毒苗，则脱毒苗具备________________的优点，因此品质好，产量高。

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某竹芋科植物果实中含有一种甜蛋白，其甜度为蔗糖的三千倍，是理想的甜味剂。为了改善黄瓜的品质，科学家采用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，得到了转基因植株。回答下列问题：

(1)为获取甜蛋白基因，可从竹芋科植物的细胞中提取对应mRNA，在___________酶的作用下合成双链cDNA片段，获得的cDNA片段与竹芋科植物中该基因碱基序列___________(填“相同”或“不同”)

(2)用农杆菌感染时，应优先选用黄瓜___________(填“受伤的”或“完好的”)叶片与含重组质粒的农杆菌共培养，选用这种叶片的理由是_________________________________。

(3)目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为___________。经测定，甜蛋白基因导入了黄瓜细胞的一条染色体上并成功表达，该转基因植株自交产生的F1代中，具有甜蛋白的植株占总数的___________。

(4)假设某种转基因作物因为受到病毒感染而减产，若要以该转基因作物为材料获得脱毒苗，应选用___________作为外植体进行组织培养。

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为了改善马铃薯的品质，增加其蛋白质含量，使做出的马铃薯粉条更加有嚼劲。某科研小组将某种蛋白基因成功导人马铃薯细胞，得到了转基因植株。请回答下列问题：

（1）将目的基因导人马铃薯细胞，经常采用农杆菌转化法。操作时，需要先将目的基因插入到________，通过转化作用，最终将目的基因插入到马铃薯细胞中染色体的DNA上。

（2）科研小组欲将转基因马铃薯细胞进一步培养成幼苗。如上图所示，需将细胞接种到诱导培养基上，通过_______________过程形成结构1，再转接到培养基2即_______________培养基上培养一段时间， 就可以诱导出试管苗。在这一过程中使用的固体培养基是由无机营养成分、有机营养成分、_______________四部分组成。

（3）科研小组若要将转基因马铃薯细胞与番茄细胞杂交，需要首先用酶解法去掉细胞壁。去掉细胞壁的原因是_______________。杂交过程的另一个关键环节是原生质体间的融合，所需人工诱导的方法分为两大类，其中物理法包括_______________。但最终没能如愿培养出如图C所示的结果，分析其原因可能是_____________________________________________。

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北方寒冷地区为了延长大豆的生长时间来提高产量，科学家采用农杆菌转化法将一种抗冻蛋白基因成功导入大豆细胞，得到了转基因植株。回答下列问题：

（1）用农杆菌感染时，应优先选用大豆____________（填“受伤的”或“完好的”）叶片与含重组质粒的农杆菌共培养，选用这种叶片的理由是___________________。

（2）植物基因工程常采用农杆菌转化法是因为农杆菌细胞中的Ti质粒上有一段特殊序列称为_____________，其特点是_________________________________________。

（3）若要检测转基因大豆中是否产生这种抗冻蛋白，采用的方法是_______________。即使检测出抗冻蛋白也还需进行个体水平鉴定，可以采用的方法为__________。

（4）通常基因工程操作主要有4个步骤，核心步骤是________________。基因工程的定义可以概括为______________________________________________________。

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北方寒冷地区为了延长大豆的生长时间来提高产量，科学家采用农杆菌转化法将一种抗冻蛋白基因成功导入大豆细胞，得到了转基因植株。回答下列问题：

（1）用农杆菌感染时，应优先选用大豆____________（填“受伤的”或“完好的”）叶片与含重组质粒的农杆菌共培养，选用这种叶片的理由是_________________________ 。

（2）植物基因工程常采用农杆菌转化法是因为农杆菌细胞中的Ti质粒上有一段特殊序列称为_____________，其特点是________________________________。

（3）若要检测转基因大豆中是否产生这种抗冻蛋白，采用的方法是_______________。若有_________，表明目的基因已形成蛋白质产品。即使检测出抗冻蛋白也还需进行个体水平鉴定，可以采用的方法为________________________________。

（4）通常基因工程操作主要有4个步骤，核心步骤是__________________。

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某竹芋科植物果实中含有一种甜蛋白，其甜度为蔗糖的三千倍，是理想的甜味剂。某研究小组试图把甜蛋白基因(目的基因)导入黄瓜中，以改良这种黄瓜的品质。获得转基因黄瓜植株的流程图如下，请回答：

(1)通过步骤①和②可人工合成目的基因，在步骤②中先以mRNA为模板在______

酶的作用下合成互补DNA，然后通过一系列实验从中筛选出　　　　　 基因。此外，还可以根据甜蛋白的氨基酸序列推测出　　　　　　　　 序列，再用　　　　　 合成。

(2)通过　　　　　 技术，可以获得大量目的基因。利用该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成　　　　　 。

(3)导入了目的基因的叶片组织细胞经过步骤③　　　　　 和④_______

　　 　 后形成了完整的植株，说明　　　　　　　　　　 。

(4)可以通过　　　　　 技术检测黄瓜植株中是否含有甜蛋白。

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科学家运用基因工程技术将结核杆菌 MPT64 基因（能控制合成 MPT64 蛋白）成功导入胡萝卜细胞，最终表达出肺结核疫苗。请回答下列问题：

(1)为获取 MPT64 基因，可从结核杆菌的细胞中提取对应 mRNA，在_____的 作用下合成双链 cDNA 片段，获得的 cDNA 片段与结核杆菌中该基因碱基序列____(填 “相同”或“不同”)。

(2)通常采用_____技术扩增 MPT64 基因，前提是要有一段已知 MPT64 基因的核苷 酸序列，以便根据这一序列合成引物，在操作步骤中需要加热至 90-95℃的目的是_____。

(3)根据农杆菌的特点，如果将 MPT64 基因插入到_____上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入胡萝卜细胞，并将其插入到植物细胞中上。要确认 MPT64 基因是否在胡萝卜植株中表达，应检测胡萝卜植株中是否含有______。

(4)研究发现，如果将 MPT64 蛋白 20 位和 24 位的氨基酸改变为半胱氨酸，其保存时间将 大大延长，科学家可以生产上述耐储存的 MPT64 蛋白的现代生物工程技术是_。

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科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因（能控制合成MPT64蛋白）成功导入胡萝卜细胞，最终表达出肺结核疫苗。回答下列问题：

（1）为获取MPT64基因，可从结核杆菌的细胞中提取对应mRNA，在_______的作用下合成双链cDNA片段，该cDNA片段__________(填“可以”、“部分可以”或“不可以”）实现物种间的基因交流。

（2）通常采用PCR技术扩增MPT64基因，前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列，原因是____，在操作步骤中需要加热至90～95℃的目的是__________。

（3）根据农杆菌的特点，如果将MPT64基因插入_______上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入胡萝卜细胞，并将其插入植物细胞中的_____上。要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达，应检测胡萝卜植株中是否含有__________。

（4）科学家探知，若能把MPT64蛋白第20位和第24位的氨基酸都改变为半胱氨酸，可以更好保证所生产的肺结核疫苗分子的稳定性。根据蛋白质工程的原理，可对_______进行修饰或改造，以达到生产目的。

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科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因(能控制合成MPT64蛋白)成功导入胡萝卜细胞,最终表达出肺结核疫苗。请回答下列问题:

(1)为获取MPT64基因,可从结核杆菌的细胞中提取对应的mRNA,在____的作用下合成双链cDNA片段,获得的cDNA片段与结核杆菌中该基因碱基序列____(填“相同”或“不同”)。

(2)通常采用PCR技术扩增MPT64基因,前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成____。在操作步骤中需要加热至90~95 ℃,目的是_______________。

(3)根据农杆菌的特点,如果将MPT64基因插入________上,通过农杆菌的转化作用,就可以使目的基因进入胡萝卜细胞,并将其插入植物细胞中的____上。要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达,应检测胡萝卜植株中是否含有__________。

(4)研究发现,如果将MPT64蛋白的第20位和24位的氨基酸改变为半胱氨酸,其保存时间将大大延长。可以生产上述耐储存的MPT64蛋白的现代生物工程技术是___________。

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我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述中，错误的是（    ）

A．重组DNA分子中增加一个碱基对，不一定会导致毒蛋白的毒性丧失

B．棉花细胞导入了抗虫基因后，在无菌、适宜的温度和光照条件下，置于只加入了必需矿质元素离子和激素的固体培养基上培养，可以培养成植株

C．抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘物种，从而造成基因污染

D．种植抗虫棉时，须同时种植普通的不抗虫棉，主要目的是减缓棉铃虫抗性基因频率增加的速度

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