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科研人员以抗四环素基因为标记基因，通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白，治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计中，合理的是
A. 可利用小鼠的β-珠蛋白基因通过PCR技术复制出β-珠蛋白基因
B. 构建基因表达载体是基因工程的核心操作
C. 用Ca2+处理大肠杆菌后，将表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中
D. 用含有四环素的培养基筛选出的大肠杆菌一定是含有β-珠蛋白基因
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科研人员以抗四环素基因为标记基因，通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白，治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计中，不合理的是（ ）
A．利用小鼠DNA分子通过PCR克隆出β-珠蛋白基因的编码序列
B．用编码序列加启动子、抗四环素基因等元件来构建表达载体
C．用Ca2＋处理大肠杆菌后，将表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中
D．用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌
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科研人员以抗四环素基因为标记基因，通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白，治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计中，不合理的是
A. 构建表达载体时需要添加启动子，终止子，标记基因等元件
B. 利用小鼠DNA分子通过PCR克隆出β-珠蛋白基因的编码序列
C. 用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌
D. 用Ca2+处理大肠杆菌后，将表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中
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科研人员以抗四环素基因为标记基因,通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β- 珠蛋白,治疗鼠的镰刀型细胞贫血症.下列相关实验设计中,不合理的是( )
A. 用目的基因编码序列加启动子、抗四环素基因等元件来构建表达载体
B. 利用小鼠细胞内相关 RNA 分子通过逆转录β- 珠蛋白基因的编码序列
C. 用含有四环素的培养基筛选出已经导入β- 珠蛋白编码序列的大肠杆菌
D. 用 Ca2+处理大肠杆菌后,将表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中
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科研人员以抗四环素基因为标记基因，通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白，治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计不合理的是( )
A. 从小鼠DNA分子上克隆出β-珠蛋白基因的编码序列
B. 用编码序列加调控序列、抗四环素基因等元件来构建基因表达载体
C. 用Ca2＋处理大肠杆菌后，将基因表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中
D. 用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌
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科研人员以抗四环素基因为标记基因，通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白，治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计不合理的是( )
A.从小鼠DNA分子上克隆出β-珠蛋白基因的编码序列
B.用编码序列加调控序列、抗四环素基因等元件来构建基因表达载体
C.用Ca2＋处理大肠杆菌后，将基因表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中
D.用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌
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科研人员以抗四环素基因为标记基因，通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白，治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计中，不合理的是
A. 用编码序列加启动子、抗四环素基因等元件来构建表达载体
B. 利用小鼠DNA分子通过PCR克隆出β-珠蛋白基因的编码序列
C. 用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌
D. 用Ca2＋处理大肠杆菌后，将表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中
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科研人员以抗四环素基因为标记基因，通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白，治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计中，不合理的是
A. 用编码序列加启动子、抗四环素基因等元件来构建表达载体
B. 利用小鼠DNA分子通过PCR克隆出β-珠蛋白基因的编码序列
C. 用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌
D. 用Ca2＋处理大肠杆菌后，将表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中
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如图所示为人体正常红细胞和镰刀型细胞贫血症患者血红蛋白基因的部分区域及镰刀型细胞贫血症的基因治疗过程，请回答以下问题。
（1）根据上左图正常人与患者血红蛋白基因碱基序列比较，可知镰刀型细胞贫血症是由于________造成的。
（2）已知限制酶E识别序列为CCGG，若用限制酶E分别完全切割正常人和患者的血红蛋白基因部分区域（见上左图），那么正常人的会被切成______个片段；如果某人的血红蛋白基因部分区域经限制酶E完全切割后，共出现170、220、290和460碱基对的四种片段，那么该人的基因型是______（以P+表示正常基因，P-表示异常基因）。
（3）根据上右图基因治疗过程写出以下结构或细胞的名称：
A．_____________；C．动物病毒； D．____________细胞
（4）该方法属于________（填“体内”或“体外”）基因治疗，其特点是_____________。
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鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子，广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因，构建基因表达载体，通过农杆菌介导法导入烟草，以获得抗病毒烟草。下图为科研人员制备能合成鸡干扰素的烟草愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，两种限制酶的识别序列及切割位点如表所示。请回答下列问题：
（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是____。科研人员还在两种引物的一端分别加上了__________和___________序列，以便于后续的剪切和连接。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用两种限制酶，选择的原则是_________。
A．Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
B．目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
C．酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同
D．酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
（2）步骤②所构建的基因表达载体中未标注出的必需元件还有___________，步骤③中需先用______处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。
（3）步骤④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过________获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是___________。
（4）用烟草花叶病毒对获得的转基因烟草和普通烟草进行接种实验，接种后第19天对照组植株进入病情指数（植物受病毒侵染的严重程度）为100的平台期，而转基因植株在第______天才进入平台期，但此时的病情指数为79。说明转基因烟草植株对病毒的侵染表现出一定的抗性，但抗性较低，可能的原因有__________。
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