某乙型肝炎疫苗是把编码乙型肝炎病毒表面抗原的基因定向插入酵母菌细胞中，使之充分表达，经纯化...

某乙型肝炎疫苗是把编码乙型肝炎病毒表面抗原的基因定向插入酵母菌细胞中，使之充分表达，经纯化后而制得的疫苗。回答下列问题：

（1）人体接种乙型肝炎疫苗后，该疫苗可作为________刺激机体发生特异性免疫反应。乙型肝炎疫苗先后需要接种多次，其目的是__________________________。

（2）如果已知乙型肝炎病毒表面抗原氨基酸序列，可以推测出相应目的基因的核苷酸序列，但推测出的目的基因核苷酸序列并不是唯一的，其原因是___________________。

（3）将编码乙型肝炎病毒表面抗原的基因导入酵母菌细胞之前需要构建基因表达载体，这一过程中需要的工具酶主要有_______________________。构建的基因达载体中，编码乙型肝炎病毒表面抗原的基因应该位于____________________之间。

（4）将编码乙型肝炎病毒表面抗原的基因导入酵母菌细胞时，使该基因在酵母菌细胞中得以稳定遗传的关键是____________。

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将乙型肝炎病毒表面抗原的基因插入酵母菌基因组中，使之在酵母菌细胞中充分表达，获得的产物经纯化后可制成乙型肝炎疫苗。回答下列问题：

（1）获取乙型肝炎病毒表面抗原基因的方法有多种，如可根据表面抗原蛋白质的结构推测__________，进而推测目的基因的脱氧核苷酸序列，再进行人工合成。目的基因合成后可在Taq酶的作用下通过PCR技术大量扩增，该技术的原理是_________；扩增前要根据一段已知目的基因的核苷酸序列合成______________。

（2）目的基因在导入酵母菌细胞之前需要构建基因表达载体，该过程的工具酶有________。基因表达载体中RNA聚合酶识别和结合的部位被称为_________________________。

（3）目的基因在受体细胞中是否翻译出蛋白质，可用___________技术来检测。若目的基因导入酵母菌细胞后未能稳定维持和表达其遗传特性，其原因可能是______________________（答出两点即可）。

（4）实验证明，一定时间内间隔注射该疫苗3次效果更好，其主要原因是___________。

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基因工程疫苗是把天然的或人工合成的遗传物质（目的基因）定向插入受体细胞中，使之充分表达，再经纯化后而制得的疫苗，如将乙肝表面抗原的基因插入细菌的基因组，可制成DNA重组乙型肝炎疫苗。请回答下列问题：

（1）如果已知乙肝表面抗原基因表达产物蛋白质的氨基酸序列，可以推测出目的基因的核苷酸序列，但推测出的目的基因核苷酸序列并不是唯一的，其原因是__________________。

（2）获得目的基因后，常采用____________技术在体外将其扩增，这一过程中需要加入一种特殊的酶，即________________________。

（3）将目的基因导入受体细胞之前需要构建_________________，这一过程中需要的工具酶有_______________________。

（4）将目的基因导入细菌之前，需要先用_________________对细菌进行处理，使其成为_________________细胞。

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乙型肝炎病毒感染引发的乙型肝炎（以下简称乙肝）是医学上难以攻克的疾病，给人类的生活、学习和工作等造成较大的影响。请回答下列有关问题：

（1）医学上常用重组酵母菌表达的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）经纯化、加试剂吸附后制成重组乙肝疫苗，用于预防乙肝，这样的疫苗既安全又有效，其主要原因是_______________________________。重组酵母是通过___________工程培育成的，此项工程技术用到的工具酶有______________________。

（2）为了治疗乙肝，科研人员利用经乙肝病毒感染后的小鼠的___________细胞和骨髓瘤细胞进行杂交。然后进行两次筛选，从而获得专一的抗体，第二次筛选的目的是______________________，此抗体的主要优点是_____________________。

（3）肝脏是蛋白质代谢的重要器官，多种转氨酶存在于肝脏细胞中。在肝功能检查时，血液中转氨酶常作为诊断肝炎的一个重要参考指标，这主要是由于肝脏发生病变时，______________________，肝细胞中的转氨酶会大量进入血液，使血液中转氨酶的量增加。

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回答有关现代生物技术的问题

乙肝是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种慢性传染病，主要采用基因工程乙肝疫苗进行防治。科研人员采用转基因技术将乙肝病毒表面抗原（HBsAg）基因片段导入酵母细胞或中国仓鼠卵巢细胞（CHO），让重组后的酵母或CHO细胞在体外培养过程中产生HBsAg，将其分离、提纯之后制成乙肝疫苗，部分生产过程如图。

（1）下列①～④表示获得重组CHO细胞的步骤，其中步骤④是______；①-④步骤的正确排序是______。

①重组DNA分子导入CHO细胞

②筛选成功导入HBsAg基因的CHO细胞

③人工合成HBsAg基因

④______

（2）大量培养重组酵母和重组CHO细胞生产乙肝疫苗过程中，需将培养液中HBsAg与其他杂质分离，可采用的方法是______（多选）。

A．破碎细胞 B．加入硫酸铵 C．改变pH D．冷冻干燥

（3）利用重组酵母和重组CHO细胞生产乙肝疫苗，分别属于生物工程中的______、______领域。

（4）利用重组CHO细胞和重组酵母生产基因工程乙肝疫苗，目前都在进行规模化生产，但两种方法各有不足和优势。请在下列选项中选择合适的编号填入表对应的空格中，以表示你对此问题的分析（编号可重复选用）：

①结构简单、遗传操作较为容易

②表达的HBsAg更接近天然形式，疫苗稳定性好

③表达的HBsAg与天然形式存在差异

④培养条件要求高，生产成本较高

⑤可将HBsAg分泌到胞外，易于分离提纯

⑥易于培养、繁殖迅速，生产成本较低

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基因疫苗指的是DNA疫苗，是将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒

上，然后将质粒直接导人人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫

应答。回答下列问题：

（1）要获得编码抗原的基因，首先要提取出病原体的DNA或RNA，并将RNA 　　 ，要

大量获得表达特异抗原的基因，可采用____方法。

（2）将抗原基因插入质粒的过程，即构建基因表达载体的过程，通常一个基因表达载体的

组成，除了抗原基因（目的基因）外，还有　　 。

（3）一般将重组质粒利用　　　　 的方法送人受体细胞，进入细胞核并表达抗原蛋白。

（4）与传统疫苗相比，基因疫苗不仅能在宿主体内较长时间存在，还可以诱导产生（填“体液免疫”“细胞免疫”或“体液免疫和细胞免疫”）。

（5）-个质粒载体可插人多个抗原基因组成多价疫苗，导人这样的疫苗可达到 　　 的目的。

（6）基因疫苗是在基因治疗技术的基础上发展而来的。基因治疗是把　　 导入病人体内，使该基因表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。

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基因疫苗指的是DNA疫苗，是将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。回答下列问题：

（1）要获得编码抗原的基因，首先要提取出病原体的DNA或RNA，并将RNA_________，要大量获得表达特异抗原的基因，可采用________方法。

（2）将抗原基因插入质粒的过程，即构建基因表达载体的过程，通常一个基因表达载体的组成，除了抗原基因（目的基因）外，还有___________、___________、___________。

（3）一般将重组质粒利用_____________的方法送入受体的肌肉细胞，进入细胞核并表达抗原蛋白。

（4）一个质粒载体可插入多个抗原基因组成多价疫苗，该多价疫苗可达到_______的目的。

（5）基因疫苗是在基因治疗技术的基础上发展而来的。基因治疗是把_____________导入病人体内，使该基因表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。

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基因疫苗即DNA疫苗，是将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体通过产生免疫应答来预防疾病。回答下列有关问题：

(1)要获得编码抗原的基因，首先要提取出病原体的DNA或RNA，并将RNA___________，要大量获得表达特异抗原的基因，可采用___________方法。

(2)将抗原基因插入质粒的过程，即构建基因表达载体的过程。通常一个基因表达载体的组成，除了抗原基因（目的基因）外，还有___________________。

(3)一般将重组质粒利用_______________的方法送入动物细胞并表达抗原蛋白；要想检测导入的抗原基因是否表达,在分子水平上可用_______法进行检测。

(4)基因疫苗不仅能在宿主体内较长时间存在，还可以诱导产生__________(填“体液免疫”“细胞免疫”或“体液免疫和细胞免疫”）。

(5)基因疫苗是在基因治疗技术的基础上发展而来的。基因治疗是把_____________导入病人体内，使该基因表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。

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某种能感染人的禽流感病毒为RNA病毒，该病毒表面有多种蛋白质，其中A蛋白为主要抗原（能被宿主细胞强烈识别）。可通过制备基因疫苗或蛋白质疫苗预防该病毒的感染。请回答下列问题：

（1）要获得编码A蛋白的基因疫苗，首先要提取该抗原的RNA并将RNA__________形成DNA（基因疫苗）。要获得大量的基因疫苗可利用PCR技术完成，该技术依据的原理是____________________。

（2）以A蛋白作为疫苗比基因疫苗更安全，其原因是A蛋白自身没有感染力，但保留有__________。A蛋白进入人体将引起人体特异性免疫中的__________免疫。

（3）若利用基因工程技术培育能在分泌乳汁时产生A蛋白的牛，需要向牛的受精卵中导入__________。在目的基因的前端位置上有一段特殊结构的DNA片段，称为__________，它是__________识别和结合的位点。在上述研究中 要获得胚胎干细胞，则其来源于囊胚的__________或胚胎的原始性腺。

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编码乙肝病毒（HBV）表面S蛋白的基因疫苗，被小白鼠骨骼肌细胞吸收后可表达出S蛋白。S蛋白（抗原）引发系列的体液免疫和细胞免疫。图中数字代表细胞，字母代表生理过程，细胞⑦可诱导靶细胞裂【解析】
图乙中抗体效果价用衡量免疫效果的数量单位表示。有关分析错误的是

A.图甲中细胞①和⑤军事T细胞，细胞⑦是效应T细胞

B.树突状细胞的功能是识别和处理抗原，呈递抗原S蛋白

C.经图甲中N过程形成的细胞③与细胞⑦细胞膜上均缺少抗原S蛋白的受体

D.图乙是用50µg空基因疫苗作对照组，两周后抽取小鼠血清检测抗体含量得到的

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