请回答基因工程相关问题：（1）基因工程的四个基本操作步骤：获取目的基因、_______、将...

以下是基因工程四个主要操作步骤：①基因表达载体的构建；②将目的基因导入受体细胞；③目的基因的获取；④目的基因的检测与鉴定。请分析回答相关问题：

(1)基因工程操作的正确步骤是 ____（填数字）。　　

(2)进行③操作时，可以从基因文库中获取，基因文库分为基因组文库和______两种，其区别是______；PCR扩增也是获取目的基因常用的方法，进行PCR时，需要向扩增仪中加入热稳定DNA聚合酶、四种原料、_____以及引物，合成引物的前提是____。

(3)进行操作①时，应先选择合适的载体，常见的载体是质粒，质粒的本质是_______；右图是常用的pBR322质粒载体，该质粒含有抗氨苄西林基因(Ampt)和抗四环素基因(Tetr)，两个抗性基因中均具有限制酶酶切位点。若用限制酶Psl I切割并构建好表达载体，后将构建好的表达载体导入受体菌中，若受体菌_____，则说明目的基因插入到了pBR322载体中。若受体菌____，则说明目的基因没有插入到pBR322载体中。

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请回答基因工程相关问题：

（1）基因工程的四个基本操作步骤：获取目的基因、_______、将目的基因导入受体细胞、目的基因检测与鉴定；获取目的基因的两条途径为______和_______。

（2）在基因表达载体中，启动子是_______聚合酶识别和结合的部位。若将真核基因在原核细胞中表达，对该目的基因的基本要求是________；在获得转基因奶牛时，将基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是________。

（3）假设以大肠杆菌质粒作为运载体，并以同一种限制性内切酶切割运载体与目的基因将切割后的运载体与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶。连接产物至少有__________种环状DNA分子，它们分别是____________。

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下面是利用基因工程、胚胎工程等技术以牛为对象进行的研究工作，请分析回答问题：

（1）基因工程的基本操作流程中，当获取目的基因后，在将其导入受体细胞前需要进行一个 重要的操作步骤，即构建______________，该步骤使用的两种工具酶分别是______________。一个完整的基因表达载体中______________是RNA聚合酶识别、结合的部位。

（2）从公牛体内采集的精子需经过______________处理，才能在体外与成熟卵细胞结合形成 受精卵。将目的基因导入受精卵中，受精卵在体外培养至早期胚胎，再移植到母牛子宫中。进行胚胎移植的优势是可以________________________________________________________。

（3）在早期胚胎时期取滋养层细胞通过______________方法进行DNA检测，来判断目的基因是否导入细胞中。外源基因是否合成相应的蛋白质，可从转基因牛中提取蛋白质，并用相应的抗体进行“_____________”杂交，若有杂交带出现，则表明牛体内的外源基因______________（填“已表达”或“未表达”）。

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基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，包括以下几个环节：目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。回答下列相关问题：

（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即____________和从生物材料中分离。如果利用某植物为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两者相比cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的__________（多/少）。

（2）在构建基因表达载体时，经常使用质粒载体作为基因工程的工具，其应具备的基本条件有__________（答出两点即可）。除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。启动子是__________酶识别并结合的部位。这一步骤中通常还会利用到DNA连接酶，常见的有E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是__________。

（3）将目的基因导入受体细胞时，如果受体为植物细胞，采用最多的方法是__________，如果受体为动物细胞，采用最多的方法是__________。

（4）最后，要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，经常采用的检测方法是_______________。

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基因工程操作的核心步骤是

A. 获取目的基因　　 B. 构建基因表达载体

C. 将目的基因导入受体细胞　　 D. 目的基因的检测和鉴定

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以下是基因工程四个主要操作程序：

①基因表达载体的构建　 ②将目的基因导入受体细胞　　　　 ③目的基因的获取　 ④目的基因的检测与鉴定

请回答下列问题：

（1）进行③操作时，可以从基因文库中获取，基因文库分为_____________ 两种，其区别是_____________ ，PCR扩增也是获取目的基因常用的方法，进行PCR时，需要向扩增仪中加入热稳定DNA聚合酶、四种原料、_____________ 以及引物，合成引物的前提是_____________ 。PCR扩增时，与引物结合的是_____________ 。

（2）进行操作①时，应先选择合适的载体，常见的载体是质粒，质粒的本质是______；如图是常用的质粒载体，基因工程中利用BamH I限制酶识别CCATCC序列，并在GG之间切割，通过BamH I限制酶切割形成的末端属于___________，科研人员利用该质粒完成基因工程，则通过___________基因供重组DNA的鉴定与选择。

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在基因工程的操作步骤中，未发生碱基互补配对的是                               （    ）

A．目的基因的获取                               B．基因表达载体的构建

C．将目的基因导入受体细胞                    D．目的基因的检测与鉴定

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正确表示基因操作“四步曲”的是(    )

A. 获取目的基因→目的基因导入受体细胞→目的基因与载体结合→目的基因的检测和鉴定

B. 目的基因的检测和鉴定→获取目的基因→目的基因与载体结合→目的基因导入受体细胞

C. 获取目的基因→目的基因与载体结合→目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和鉴定

D. 目的基因与载体结合→获取目的基因→目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和鉴定

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基因工程的步骤中，不发生碱基互补配对的是

A. 获取目的基因　　 B. 目的基因与运载体结合

C. 目的基因导入受体细胞　　 D. 目的基因的检测与表达

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在基因工程的基本操作程序中，会发生碱基互补配对现象的是

A. 利用反转录法获取目的基因　　 B. 基因表达载体的构建

C. 将目的基因导入受体细胞　　 D. 目的基因的检测与鉴定

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