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回答下列(一)(二)小题：
(一)请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题：
(1)LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加________，灭菌备用。
(2)尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用______灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗__________________，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。
(3)取适量含产脲酶细菌的10－4、10－5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48 h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是____(A.10－5稀释液＋尿素固体培养基 B．10－5稀释液＋LB固体培养基 C．10－4稀释液＋尿素固体培养基 D．10－4稀释液＋LB固体培养基)。
在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现______，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生______所致。
(4)制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是________________________________________________________________________。
(二)某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：
(1)原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5 mol/L甘露醇(维持较高渗透压)的________混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。
(2)原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该________培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞团经球形胚、______和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述发芽培养基中含量相对较高的激素是________，胚性细胞的主要特点是：________(A.液泡小、细胞核小 B．液泡大，细胞核大 C．液泡大，细胞核小 D．液泡小、细胞核大)。
(3)为了对烟草的某些性状进行改良，分离得到两种烟草的原生质体后，通过________________方法将它们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA，采用______________扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。
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回答下列（一）（二）小题
（一）请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题
（1）LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加 _______ ，__________灭菌备用。
（2）尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用灭菌过的 _______过滤，然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有_____ 的培养基中，备用。
（3）取适量含产脲酶细菌的10-4、10-5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是_____（A． 10-5稀释液+尿素固体培养基 B． 10-5稀释液+LB固体培养基 C． 10-4稀释液+尿素固体培养基 ）。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现__________ 。
（4）制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是 _____________。
（二）某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：
（1）原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0．5mol/L甘露醇（维持较高_________）的混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。
（2）原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成______ 。此时，应该降低培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞团经球形胚、______和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，从状芽经过生根后形成完整植株。上述发芽培养基中含量相对较高的激素是___________ ，胚性细胞的主要特点是：________。
（A．液泡小、细胞核小 B．液泡大，细胞核大 C．液泡大，细胞核小 D．液泡小、细胞核大）
（3）为了对烟草的某些性状进行改良，分离的到两种烟草的原生质体后，通过________方法将他们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA，采用__________扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。
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请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题
（1）LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加_________，灭菌备用。
（2）尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用_______灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗________，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。
（3）取适量含产脲酶细菌的10-4、10-5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是______（A. 10-5稀释液+尿素固体培养基 B. 10-5稀释液+LB固体培养基 C. 10-4稀释液+尿素固体培养基 D. 10-4稀释液+LB固体培养基）。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现______，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生______所致。
（4）制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是_________。
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如图表示从土壤中分离分解尿素的细菌的实验过程，回答下列有关问题:
（1）土壤中的细菌之所以能利用尿素，是因为它们能合成________。除尿素外，培养基还应含有______等营养成分。
（2）实验中为什么要对土壤样品进行稀释？_____________________。
（3）图中将细菌转移到固体培养基上接种时，可采用的方法是___________。其中________还常用来统计样品中活菌数目，统计结果一般用_______来表示。和实际相比，统计结果偏小，原因是__________。
（4）如果将此培养基改为用来分离分解纤维素的微生物的培养基，应将培养基的成分做哪些改变？
_______________________________________________________________________。
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土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请根据下图回答相关问题：
(1)能分解尿素的细菌代谢类型为＿＿，应从富含有机质的土壤表层取土样。
(2)为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用________的培养基进行分离，并加入＿＿＿指示剂进行鉴别。
(3)若取土样5g，应加入＿＿ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液。取样稀释前，一定要＿＿＿以减少误差。将103-107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用＿＿＿＿将菌液铺平。这种接种方法称为＿＿＿＿。
(4)将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有＿＿＿＿(现象)的菌落数，结果如下表，其中＿＿＿＿倍的稀释比较合适。
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土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请根据图回答相关问题：
（1）能分解尿素的细菌代谢类型为 异氧需氧型 ，应从富含有机质的土壤表层取土样．
（2）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用 尿素为唯一氮源 的培养基进行分离，并加入 酚红 指示剂进行鉴别．
（3）若取土样5g，应加入 45 ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液．因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液．取样稀释前，一定要 摇均 以减少误差．将103﹣107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用 涂布器（玻璃刮刀） 将菌液铺平．这种接种方法称为 稀释涂布（平板）法 ．
（4）将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有 红色环带 （现象）的菌落数，结果如下表，其中 105或106 倍的稀释比较合适．
稀释倍数 103 104 105 106 107
菌落数（个） 500 367 248 36 18
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土壤有“微生物的天然培养基”之称，其中的微生物，数量大，种类多，大约70%～90%是细菌。某科研小组现对土壤中某种细菌进行分离和计数实验，回答下列问题：
（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基和选择培养基。制备牛肉膏蛋白胨固体培养基具体操作步骤包括：计算→称量→溶化→_________→_________。在牛肉膏蛋白胨固体培养基的基础上再制备选择培养基。
（2）从适宜的土壤环境中取样，并进行系列梯度稀释。将稀释相同倍数的菌液，分别在牛肉膏蛋白胨固体培养基和选择培养基上涂布，在适宜条件下进行培养，最终在牛肉膏蛋白胨固体培养基上生长的菌落数目________（“多于”、“少于”或“等于”）选择培养基上的菌落数目。产生此现象的原因_____________________________________________。
（3）细菌的计数。当菌落数目稳定时，选取菌落数在______________的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对_______个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出土样中细菌的数目。
（4）为了保持菌种的纯净，需要对菌种进行保藏。目前菌种保藏常用方法包括__________和__________，前者保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异。
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下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请根据图回答相关问题：
（1）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用________________________的培养基进行分离，并加入________指示剂进行鉴别。
（2）若取土样5g，应加入____________ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液，分别吸取0.1mL的稀释液涂布到固体培养基上，这种接种方法称为________________。某同学用该方法接种后，在某个平板上没有得到菌落，可能的原因是_______________________________________
（3）将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计符合要求的菌落数，结果如下表，其中_______________倍的稀释比较合适。
稀释倍数
103
104
105
106
107
菌落数
>500
367
248
36
18
（4）若需要将分离的菌种进行长期保藏，应使用的方法是_______________________。
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（１５分）根据生物技术实践的有关知识，回答下列问题：
（1）欲从土壤中分离出能高效降解有机磷农药的细菌，可在培养基中加入 制成选择培养基进行分离。若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是 。
（2）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是 。
（3）在月季花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感，一般来说，在 期，花药培养成功率高。
（4）在香料工业提取的“液体黄金”玫瑰精油，要求不含任何添加剂和化学原料，其提取方法主要是 ；玫瑰精油的提取过程中向获得的乳化液中加入ＮａＣｌ，增加盐浓度的目的是 。
（５）某兴趣小组将豆腐块灭菌，接种微生物后培养２天，加入适量食盐，经密封放置１０天后制的豆腐乳。在保质期内，豆腐乳放置时间越长，蛋白质含量越低，其原因是豆腐中蛋白质被微生物产生的 分解。最终使 含量增加，因此保质期内豆腐乳放置越久风味越佳。
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根据生物技术实践的有关知识，回答下列问题：
（1）欲从土壤中分离出能高效降解有机磷农药的细菌，可在培养基中加入_____制成选择培养基进行分离。若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是_______________________________。
（2）生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是__________。
（3）在香料工业提取的“液体黄金”玫瑰精油，要求不含任何添加剂和化学原料，其提取方法主要是__________，玫瑰精油的提取过程中向获得的乳化液中加入NaCl，增加盐浓度的目的是___________。
（4）某兴趣小组将豆腐块灭菌，接种微生物后培养2天，加入适量食盐，经密封放置l0天后制得豆腐乳。在保质期内，豆腐乳放置时间越长，蛋白质含量越低，其原因是豆腐中蛋白质被微生物产生的________分解，最终使________含量增加，因此保质期内豆腐乳放置越久风味越佳。
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