脱氧核苷酸链是有方向的，一端为5’端，另一端为3’端，DNA分子两条脱氧核苷酸链反向平行。...

脱氧核苷酸链是有方向的，一端为5’端，另一端为3’端，DNA分子两条脱氧核苷酸链反向平行。DNA复制时，称为引物的小段核苷酸链先与模板链配对结合，然后在引物的3'端进行子链延伸，在引物的5’端不能进行子链延伸（如图1）。

1.在图中的数字编号①～③中，代表解旋过程的是___________，此过程中发生断裂的键是___________。

聚合酶链反应（PCR）可自动化重复进行图中所示的①～③步骤，每完成一次①～③步骤称为完成一个循环，每个循环各步骤的反应条件设计为：步骤①在94℃持续30秒，步骤②在55℃持续30秒，步驟③在72℃持续1分钟。某研究小组拟用PCR技术和引物1、2从图2所示DNA分子中扩增出编码蛋白质H的基因，并开展后续研究。

2.下列关于PCR的叙述中，正确的是___________。

A.PCR是检测生物遗传多样性最可靠的方法

B.可从人体细胞提取DNA聚合酶用于PCR反应

C.通过PCR扩增目的基因属于化学方法人工合成

D.若引物能与模板DNA多个位置结合，则可提高PCR扩增效率

3.通过上述PCR反应获得目的基因片段后，拟将其插入质粒pZHY1中构建重组DNA分子pZHY2。已知在pZHY1上存在EcoRⅠ、BamHⅠ、KpnⅠ、XbaⅠ4种限制酶的识别序列（如表），则应选用的限制酶组合是__________。

A.BamHⅠ和EcoRⅠ B.BamHⅠ和KpnⅠ

C.EcoRⅠ和KpnⅠ D.EcoRⅠ和XbaⅠ

4.将重组DNA分子pZHY2导入大肠杆菌后，就可通过大规模培养大肠杆菌制备蛋白质H。若要获得纯化的蛋白质H，下列操作步骤中Ⅰ代表___________，Ⅱ代表___________。

破碎细胞→过滤一Ⅰ→Ⅱ→通过冷冻干燥结晶蛋白质

①改变pH沉淀蛋白质　　　　　　　　　　 ②加入硫酸铵沉淀蛋白质

③将蛋白质进行固定化　　　　　　　　 ④通过层析提纯蛋白质

5.若要制备抗蛋白质H的单克隆抗体，相关说法中正确的有___________。

A.可以用上述步骤所得纯化的蛋白质H作为抗原免疫动物

B.从动物的脾脏收集B淋巴细胞，并使之与杂交瘤细胞融合

C.单克隆抗体是由单个杂交瘤细胞增殖产生的杂交瘤细胞群分泌的成分单一的抗体

D.从PCR扩增目的基因到制备单克隆抗体，共涉及基因工程、发酵工程、细胞工程

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DNA分子由两条反向平行的脱氧核苷酸链组成。DNA复制时，一条子链是连续合成的，另一条子链是不连续合成的（即先形成短链片段再相互连接），这种复制方式称为半不连续复制，如图1。

（1）DNA复制时，子链延伸的方向为____________（DNA单链中具有游离磷酸基团的一端称为5’末端），这一过程需要_______酶催化，该酶作用的机理是__________________。

（2）半不连续复制是1966年日本科学家冈崎提出的。为验证假说，他进行了如下实验:让T4噬菌体在20℃时侵染大肠杆菌70min后，将同位素3H标记的脱氧核苷酸添加到大肠杆菌的培养基中，在2秒、7秒、15秒、30秒、60秒、120秒后，分离T4噬菌体DNA并通过加热使DNA分子变性、全部解螺旋，再进行密度梯度离心，以DNA单链片段分布位置确定片段大小（分子越小离试管口距离越近），并检测相应位置DNA单链片段的放射性，结果如图2。

①在噬菌体DNA中能够检测到放射性，其原因是_______________________________。

②研究表明，富含G-C碱基的DNA分子加热变性时需要的温度较高。推测其原因是_____________________。

③图2中，与60秒结果相比，120秒结果中短链片段的量_______，原因是___________。

④研究还发现提取的噬菌体DNA上紧密结合了一些小RNA，根据PCR反应所需条件推测，RNA的作用是____________________。

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关于DNA分子的结构及其复制的叙述，错误的是

A．四种脱氧核苷酸构成的两条链按反向平行方式盘旋成双螺旋结构

B．将单个的脱氧核苷酸连接成DNA分子的主要的酶是DNA聚合酶

C．在DNA双链中，任意两个不互补碱基之和相等，为总碱基数的50%

D．1个DNA分子在15N的培养液中复制两代，子代中含15N的DNA占50%

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下列关于DNA分子的叙述，正确的是

A. 碱基对的排列构成了DNA分子的基本骨架

B. DNA分子的特异性决定于四种脱氧核苷酸的比例

C. 双链DNA分子的两条链是反向平行的

D. 两条链解旋后均可作为复制和转录的模板

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下列有关双链DNA结构和复制的叙述，正确的是（　　 ）

A.不同DNA分子中嘌呤数与嘧啶数的比例具有特异性

B.DNA的两条脱氧核苷酸链间通过磷酸二酯键相互连接

C.细胞中DNA复制离不开解旋酶、Taq酶、引物、dNTP等

D.边解旋、边配对可以降低DNA复制的差错

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下图为一个被³²P标记的DNA分子含有100个碱基对，现在放入含有³¹P的脱氧核苷酸培养液的体系中进行复制。复制开始均要合成一段RNA引物。下图是合成过程。对此图叙述正确的是

A．限制性核酸内切酶作用于②处      B．RNA聚合酶作用于③处

C．DNA复制3次，则DNA分子平均分子量减少25

D．此图结构具有五种碱基和五种核苷酸。

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下图为一个被³²P标记的DNA分子含有100个碱基对，现在放入含有³¹P的脱氧核苷酸培养液的体系中进行复制。复制开始均要合成一段RNA引物。下图是合成过程。对此图叙述正确的是

A．限制性核酸内切酶作用于②处

B．RNA聚合酶作用于③处

C．DNA复制3次，则DNA分子平均分子量减少25

D．此图结构具有五种碱基和五种核苷酸

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双链DNA是由两条反向平行的脱氧核苷酸链组成。早在1966年，日本科学家冈崎提出DNA半不连续复制假说：DNA复制形成互补子链时，一条子链是连续形成，另一条子链不连续即先形成短链片段(如图1)。为验证这一假说，冈崎进行了如下实验：让T4噬菌体在20°C时侵染大肠杆菌70min后，将同位素3H标记的脱氧核苷酸添加到大肠杆菌的培养基中，在2秒、7秒、15秒、30秒、60秒、120秒后，分离T4噬菌体DNA并通过加热使DNA分子变性、全部解螺旋，再进行密度梯度离心，以DNA单链片段分布位置确定片段大小(分子越小离试管口距离越近)，并检测相应位置DNA单链片段的放射性，结果如图2。请分析回答：

(1)若1个双链DNA片段中有1000个碱基对，其中胸腺嘧啶350个，该DNA连续复制四次，在第四次复制时需要消耗________个胞嘧啶脱氧核苷酸。

(2)以3H标记的脱氧核苷酸添加到大肠杆菌的培养基中，最终在噬菌体DNA中检测到放射性，其原因是_________________________________________________________。

(3)DNA解旋在细胞中需要解旋酶的催化，在体外通过加热也能实现。解旋酶不能为反应提供能量，但能________________________。研究表明，在DNA分子加热解链时，DNA分子中G＋C的比例越高，需要解链温度越高的原因是______________________。

(4)图2中，与60秒结果相比，120秒结果中短链片段减少的原因是________。该实验结果为冈崎假说提供的有力证据是___________________________________________。

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关于DNA分子结构的叙述错误的是

A. 脱氧核糖和磷酸交替连接构成基本骨架

B. 两条链上的碱基通过磷酸二酯键连接成碱基对

C. 两条脱氧核苷酸链按反向平行方式盘旋成双螺旋结构

D. 某双链DNA分子片段含50个腺嘌呤，则同时含50个胸腺嘧啶

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如图是一个DNA分子的片段，从图中能得到的信息是（多选）（   ）

A.DNA是双螺旋结构

B.碱基严格互补配对

C.嘌呤数等于嘧啶数

D.两条脱氧核苷酸链反向平行

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