如图表示利用水母的绿色荧光蛋白基因（GFP基因）培育GFP转基因克隆猪的过程，下列叙述正确...

如图表示利用水母的绿色荧光蛋白基因（GFP基因）培育GFP转基因克隆猪的过程，下列叙述正确的是（　　 ）

A.⑤过程的完成需要借助精密的显微操作仪和高效率的细胞融合法

B.②过程是基因工程的关键步骤，需要限制性核酸内切酶和 DNA聚合酶的参与

C.③过程常用显微注射法实现转化，成纤维细胞是失去增殖力的猪体细胞

D.⑦过程的完成需将早期胚胎移植到经配种和同期发情处理的代孕母猪体内

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绿色荧光蛋白（GFP）能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

（1）图中通过①、②过程形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是一G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是一↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的1个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

①请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端_________________________________。

②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端可以连接起来的原因是_________。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是____________________。

（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_____________________。获得的转基因猪，可以解决的医学难题是________。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是______________________（用序号表示）。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计

③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）

④表达出蓝色荧光蛋白

（5）若科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白与原来的蛋白相比，第222位氨基酸发生了替换，则蓝色荧光蛋白基因与原来的蛋白基因相比，至少有___________个碱基对发生变化。

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下图表示我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的具体培育过程。请据图回答下列问题：

（1）图中A过程是采用从___________中获取绿色荧光蛋白基因，该文库中含有该生物部分基因序列。如果对已有的绿色荧光蛋白基因进行大量扩增，需要用_________方法，该方法的原理是DNA复制，这项技术需要用到Taq酶，该酶需从________的末端开始催化子链的延伸。

（2）将绿色荧光蛋白基因导入成纤维细胞，B过程首先要构建_________，然后通过_______________________法导入成纤维细胞。

（3）从猪胚胎中获取单个的成纤维细胞进行培养，需用C______酶处理猪胚胎的部分组织。

（4）E过程得到卵母细胞后，要做去核处理，最常用方法是_________________________。

（5）G过程需要用___________（化学）方法激活重组细胞，使之完成分裂和发育进程，并最终发育为早期胚胎。

（6）Ⅰ过程可以在分子水平上用___________________方法检测绿色荧光蛋白基因是否成功表达。

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利用现代生物工程技术可以改变传统育种方式，培育出新品种。如图表示绿色荧光蛋白转基因克隆猪的具体培育过程。请回答下列问题：

(1)上述过程涉及的现代生物工程技术中属于分子水平的技术是________。

(2)图中B过程常用________法将绿色荧光蛋白基因导入到成纤维细胞中。

(3)C过程要获得单个的成纤维细胞进行培养，需用________________处理猪胚胎的部分组织；E过程中若要获得大量的卵母细胞需用________激素处理成年母猪；在进行H过程之前，需要对代孕母猪进行________处理。

(4)G过程中，当胚胎发育到囊胚时期时，聚集在胚胎一端，个体较大的细胞是________，将来可发育成胎儿各种组织；滋养层细胞________(填“能”或“不能”)用于性别鉴定，该处细胞将来会发育成________。

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[生物—选修3：现代生物科技专题]

绿色荧光蛋白（GFP）能在绿光的激发下发出荧光，用GFP基因作为目的基因可培育绿色荧光小鼠。请回答问题：

（1）在构建GFP基因表达载体的过程中需要用到______________酶。将基因表达载体导入小鼠受精卵中常用的方法是___________________，然后将导入成功的受精卵在体外培养成早期胚胎。

（2）早期胚胎通过_______________技术移入受体的子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用_________方法保存。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是____________________。

（3）由于荧光蛋白在自然界中不存在，所以科学家通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，该工程最终是通过设计________________________序列来完成的。

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下图表示我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的具体培育过程。请据图回答下列问题：

(1)欲获得大量绿色荧光蛋白基因可利用PCR技术，其基本原理是___________，延伸过程中需要使用___________酶。

(2)过程C处理所用的酶是___________，处理的目的是___________。

(3)过程E中若要获得大量的卵母细胞需用___________激素处理成年母猪。过程H的名称是___________。早期胚胎能移入代孕母猪的子宫的生理学基础是___________。

(4)DNA粗提取实验中选取鸡血作为实验材料，如选用植物细胞作为实验材料需用___________处理。

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1962年，日本科学家下村修从一种水母身上分离出绿色荧光蛋白（GFP）。1992年后，马丁、沙尔菲等人成功实现GFP基因在高等动植物细胞中的高效表达。下图是转基因绿色荧光鼠的培育过程：

（1）将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是（   ）

A．追踪目的基因在细胞内的复制过程

B．追踪目的基因插入到染色体上的位置

C．追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布

D．追踪目的基因编码的蛋白质的空间结构

（2）转基因绿色荧光鼠的培育过程中，首先需要通过PCR技术获得目的基因的大量拷贝。PER反应体系中，起模板作用的是＿＿＿＿＿＿，模板首端或末端和引物的结合是遵循＿＿＿＿＿＿＿＿＿原则，然后在耐热DNA聚合酶作用下进行复制。耐热DNA聚合酶能经受95℃高温，与高等动物细胞内DNA复制过程相比：PCR反应体系不需要＿＿＿＿＿＿酶的参与。

（3）图④过程称作＿＿＿＿＿＿。

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绿色荧光蛋白（简称GFP）含有1条多肽链，由238个氨基酸组成，能发出绿色荧光。下列有关GFP的叙述不正确的是

A．在控制GFP合成的基因中，脱氧核苷酸的数量应该大于1428个

B．合成GFP的转录过程需要RNA聚合酶和游离的脱氧核苷酸等参与

C．将GFP整合到胚胎干细胞中，可用于胚胎发育中细胞的标记定位

D．转入GFP基因的植物细胞能发出荧光说明该基因在植物中成功表达

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8分）下图表示我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的具体培育过程。请据图回答下列问题：

(1)上述过程涉及的现代生物工程技术，属于分子水平的是______，其核心步骤是______。

(2)若要获得单个的成纤维细胞进行培养，需用______处理猪胚胎的部分组织。

(3)E过程中若要获得大量的卵母细胞需用________激素处理成年母猪。

(4)H过程的名称是__________，所选择的胚胎一般处于______期较合适。

(5)经过培养得到早期胚胎后可以用______ ____技术以获得更多基因型相同的转基因克隆猪胚胎，且在进行H过程之前，需要对代孕母猪进行____ ____处理，以给早期胚胎移入受体提供相同的生理环境。

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科学家将绿色荧光蛋白(GFP)基因转入小鼠胚胎干细胞(ES)内，GFP基因若表达就会使细胞带有绿色荧光，继而利用带有绿色荧光的ES细胞培育出嵌合型的小鼠用于科学研究，流程如图所示。请回答：

（1）在步骤①中构建基因表达载体时，需要在GFP基因的首端加入_________，有了它才能驱动GFP基因转录出mRNA，最终获得GFP。

（2）步骤②的受体细胞是小鼠ES细胞，ES细胞一般从囊胚的_________中分离得到。对其进行的初次培养称为__________，在培养ES细胞时，细胞充满培养皿底部后停止分裂，这种现象称为___________。

（3）图中重组囊胚在步骤⑤之前要先检测是否有____________，再通过___________技术移入代孕母鼠子宫内继续发育。

（4）该小鼠诞生过程中涉及到的现代生物技术主要有:______________________。(至少答出3项）

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