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SNP是基因组水平上由单个核苷酸的变异引起的DNA序列多态性。科研人员利用SNP对拟南芥抗盐突变体的抗盐基因进行定位。
(1)SNP在拟南芥基因组中广泛存在，在不同DNA分子及同一DNA分子的不同部位存在大量SNP位点，某些SNP在个体间差异稳定，可作为DNA上特定位置的遗传____。
(2)研究者用化学诱变剂处理野生型拟南芥，处理后的拟南芥自交得到的子代中抗盐：不抗盐=1:3，据此判断抗盐为____性状。
(3)为进一步得到除抗盐基因突变外，其他基因均与野生型相同的抗盐突变体（记为m），可采用下面的杂交育种方案。
步骤一：抗盐突变体与野生型杂交；
步骤二：____：
步骤三：____；
步骤四：多次重复步骤一一步骤三。
(4)为确定抗盐基因在Ⅱ号还是Ⅲ号染色体上，研究者用抗盐突变体m与另一野生型植株B杂交，用分别位于两对染色体上的SNP1和SNP2（见下图）进行基因定位。
①将m和B进行杂交，得到的F1，植株自交。将F1植株所结种子播种于____的选择培养基上培养，得到F2抗盐植株。
②分别检测F2抗盐植株个体的SNPI和SNP2，若全部个体的SNP1检测结果为____，
SNP2检测结果SNP2m和SNP2B的比例约为_____，则抗盐基因在Ⅱ号染色体上，且与SNP1m不发生交叉互换。
(5)研究者通过上述方法确定抗盐基因在某染色体上，为进一步精确定位基因位置，选择该染色体上8个不同的SNP,得到与抗盐基因发生交叉互换的概率，如下表。据表判断，抗盐基因位于____SNP位置附近，作出判断所依据的原理是_________________
(6)结合本研究，请例举SNP在医学领域可能的应用前景___________。
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SNP是基因组水平上由单个核苷酸的变异引起的DNA序列多态性。科研人员利用SNP对拟南芥抗盐突变体的抗盐基因进行定位。
(1)SNP在拟南芥基因组中广泛存在，在不同DNA分子及同一DNA分子的不同部位存在大量SNP位点，某些SNP在个体间差异稳定，可作为DNA上特定位置的遗传____。
(2)研究者用化学诱变剂处理野生型拟南芥，处理后的拟南芥自交得到的子代中抗盐：不抗盐=1:3，据此判断抗盐为____性状。
(3)为进一步得到除抗盐基因突变外，其他基因均与野生型相同的抗盐突变体（记为m），可采用下面的杂交育种方案。
步骤一：抗盐突变体与野生型杂交；
步骤二：____：
步骤三：____；
步骤四：多次重复步骤一一步骤三。
(4)为确定抗盐基因在Ⅱ号还是Ⅲ号染色体上，研究者用抗盐突变体m与另一野生型植株B杂交，用分别位于两对染色体上的SNP1和SNP2（见下图）进行基因定位。
①将m和B进行杂交，得到的F1，植株自交。将F1植株所结种子播种于____的选择培养基上培养，得到F2抗盐植株。
②分别检测F2抗盐植株个体的SNPI和SNP2，若全部个体的SNP1检测结果为____，
SNP2检测结果SNP2m和SNP2B的比例约为_____，则抗盐基因在Ⅱ号染色体上，且与SNP1m不发生交叉互换。
(5)研究者通过上述方法确定抗盐基因在某染色体上，为进一步精确定位基因位置，选择该染色体上8个不同的SNP,得到与抗盐基因发生交叉互换的概率，如下表。据表判断，抗盐基因位于____SNP位置附近，作出判断所依据的原理是_________________
(6)结合本研究，请例举SNP在医学领域可能的应用前景___________。
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在天宫二号上进行的拟南芥培育实验中，为监控植物的开花过程，科研人员给拟南芥安装了“追踪器”，即利用控制植物开花基因相同的“启动子”（启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列，决定基因的转录与否）带动绿色荧光蛋白（GFP）基因在微重力条件下表达并获得实时荧光图像。转基因拟南芥植物在构建过程中首先需分别构建植株A和植株B，安装“追踪器”和构建植株A过程如图1所示。
1.据图1分析，图中步骤①进行的切割，选择的限制酶是 。
A.EcoRⅠ酶 B.HindⅢ酶
C.EcoRⅠ酶和HindⅢ酶 D.HindⅢ酶和BamHⅠ酶
2.获得转基因拟南芥植株A的基因工程目的基因是___________；受体细胞是___________。基因工程步骤④是___________。
3.在步骤⑤中，让含重组Ti质粒1的农杆菌侵入拟南芥愈伤组织而非拟南芥叶肉细胞的主要原因是______________________；步骤⑥主要运用的技术是____________。
科研人员进一步构建植株B，构建过程如图2所示，图2中启动子序列与图1中相同。
4.已知步骤⑤为农杆菌转化法。因为Ti质粒既有在细菌中表达的基因，同时又有在高等植物中表达的基因，所以需要将重组质粒2与Ti质粒重组后，再导入受体细胞。下列关于所选Ti质粒的说法正确的是
A.Ti质粒本身应具有绿色荧光蛋白基因
B.Ti质粒本身应具有植物开花基因
C.Ti质粒为双链闭环DNA分子
D.Ti质粒的受体细胞应为农杆菌细胞
5.科研人员对重组质粒2直接进行基因测序，以筛选获得重组质粒2。除此方法外，利用图2所给信息，试举出其他筛选重组质粒2的方法。____________________________________。
6.科研人员成功获得植株A和植株B后，如何获得纯合转基因拟南芥植株?纯合转基因拟南芥植株有何优点?________________________________________________。
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1994年，科研人员发现一株拟南芥突变株，由于NPR1基因突变，使其系统获得性抗性相关蛋白基因的应答性表达被彻底破坏，后来采用定位克隆技术从拟南芥中克隆到了NPR1基因，发现它的表达与植物抗细菌和真菌毒性提高有关。以NPR1基因作为目的基因可人工获得抗性植株。请回答：
（1）抗性相关蛋白基因的应答性表达过程包括____________两个步骤。从野生拟南芥中分离出NPR1基因的mRNA后，以其为模板可_____________出目的片段，然后用PCR技术可实现目的片段的克隆。与生物体内的DNA复制相比，PCR技术的特殊之处有_______________(答出两项）等。
（2）由于DNA复制时，子链只能由5＇向3＇方向延伸，故利用PCR扩增NPR1基因时，可以从图1的A、B、C、D四种单链DNA片段中选取___________作为引物。PCR扩增进行50个循环后，理论上可以产生约为___________个DNA分子，将这些DNA分子与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做拟南芥的_____________，扩增获得的目的基因与拟南芥细胞中该基因碱基序列_______(填“相同”或“不同”）。
（3）将人工合成的NPR1基因导入普通植物之前，需要构建__________。对NPR1基因片段和质粒（图2所示）进行酶切时，可选用限制酶的组合为___________或_____________。
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（16分）科研人员向野生型拟南芥的核基因组中随机插入已知序列的Ds片段（含卡那霉素抗性基因），导致被插入基因突变，筛选得到突变体Y。因插入导致某一基因（基因A）的功能丧失，从突变体Y的表现型可以推测野生型基因A的功能。
（1）将突变体Y自交所结的种子用70%酒精_____ ___处理后，接种在含有卡那霉素的培养基中，适宜条件下光照培养。由于卡那霉素能引起野生型植物黄化，一段时间后若培养基上的幼苗颜色为绿色，则可确定植株DNA中含有______ __。
（2）统计培养基中突变体Y的自交后代，绿色幼苗3326株、黄色幼苗3544株，培养基中突变体Y的自交后代结果表明相关基因______ __（填“符合”或“不符合”）孟德尔自交实验的比例。
（3）研究人员进一步设计测交实验以检测突变体Y产生的__________ ____，实验内容及结果见下表。
| 测交亲本 | 实验结果 |
| 突变体Y（♀）×野生型（♂） | 绿色：黄色=1.03：1 |
| 突变体Y（♂）×野生型（♀） | 黄色 |
由实验结果可知，Ds片段插入引起的基因突变会导致____ __致死，进而推测基因A的功能与______ __有关。
（4）提取突变体Y的基因组DNA，限制酶切割后用_______ _连接，依据Ds片段的已知序列设计引物，扩增出_____ ____，进一步测定其序列。
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DNA序列D能在基因A表达的转移酶作用下，从序列D所在染色体的某个位置转移到其他位置，或随机转移到其他染色体上。科研人员利用这一原理来构建稳定遗传的大豆突变体库。
（1）科研人员分别将序列D和基因A作为____________，插入含卡那霉素抗性基因的T-DNA上，利用农杆菌转化植物，筛选得到转D植株和转A植株。
（2）将得到的转D植株或转A植株自交，若某植株所结种子中具有卡那霉素抗性的占_________，则判断该植株为T-DNA单拷贝插入。继续种植具有卡那霉素抗性的种子，长成植株后进行自交，若某植株所结种子_________，可获得纯合的转D植株或转A植株。
（3）科研人员将纯合的转D植株与转A植株杂交，并根据转入两种植株中的DNA序列的差异，用PCR方法确定杂交是否成功，结果如下图所示。
据图可知，F1植株编号为______的杂交组是杂交成功的，分析其他杂交组杂交不成功的原因是_______。
（4）对杂交成功的所有F1植株进行序列D检测，发现其位置均没有发生转移，推测序列D的转移只发生在_________（填“体细胞”或“配子”）中，按照这种推测，如果让杂交成功的F1植株自交，理论上F2植株中序列D发生了位置转移的最多可占_________。
（5）序列D随机转移会导致被插入基因发生突变，从而可以在F2植株中筛选得到多种突变体。让F2植株自交，应在F3中筛选出序列D和基因A为_________的植株用作构建突变体库，原因是这种植株_________。
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DNA序列D能在基因A表达的转移酶作用下，从序列D所在染色体的某个位置转移到其他位置，或随机转移到其他染色体上。科研人员利用这一原理来构建稳定遗传的大豆突变体库。
（1）科研人员分别将序列D和基因A作为____________，插入含卡那霉素抗性基因的T-DNA上，利用农杆菌转化植物，筛选得到转D植株和转A植株。
（2）将得到的转D植株或转A植株自交，若某植株所结种子中具有卡那霉素抗性的占_________，则判断该植株为T-DNA单拷贝插入。继续种植具有卡那霉素抗性的种子，长成植株后进行自交，若某植株所结种子_____________________________，可获得纯合的转D植株或转A植株。
（3）科研人员将纯合的转D植株与转A植株杂交，并根据转入两种植株中的DNA序列的差异，用PCR方法确定杂交是否成功，结果如下图所示。
据图可知，F1植株编号为________________________的杂交组是杂交成功的，分析其他杂交组杂交不成功的原因是______________________________________________________________________。
（4）对杂交成功的所有F1植株进行序列D检测，发现其位置均没有发生转移，推测序列D的转移只发生在
_________（填“体细胞”或“配子”）中，按照这种推测，如果让杂交成功的F1植株自交，理论上F2植株中序列D发生了位置转移的最多可占_________。
（5）序列D随机转移会导致被插入基因发生突变，从而可以在F2植株中筛选得到多种突变体。让F2植株自交，应在F3中筛选出序列D和基因A为_____________的植株用作构建突变体库，原因是这种植株_______________________。
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（18分）囊性纤维化是由CF基因引起的遗传病。人类个体中存在一个或多个核苷酸不同的短序列（SNP），而且存在个体差异，可以作为标记基因进行分析。据图回答问题：
（1）CF基因的根本来源是________，该基因位于________染色体上，被分析母本的基因组成是________（纯合子或杂合子）
（2）第7位（最右）孩子只具有患病基因而缺少SNP标记基因，其最可能原因是
________。
（3）囊性纤维化（CF）患者呼吸系统受损最为严重，呼吸道分泌的粘液适于绿脓杆菌的繁殖，绿脓杆菌分泌的外毒素A可使人体的蛋白合成受阻并引起组织坏死。针对外毒素人体需要有特异的________与它结合，才能使它丧失毒性，此物质是在特异性免疫的________免疫过程中产生的。对脓杆菌的感染者可以利用细胞工程制备的________进行特异性诊断。
（4）虽然囊性纤维化合体患者的病情非常严重，但杂合个体不会患霍乱或伤寒，因此该突变基因在人群中频率相对较________（高或低）。在此欧地区的人群中，有4%的人是CF基因携带者。如果一个CF基因携带者且色觉正常的男性与另一个CF基因携带者且父母正常、弟弟患红绿色盲性结婚，则他们的子女中既是CF隐性基因纯合体又不患色盲的概率为________。
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日本结缕草是耐旱性最强的草坪草种之一，科研人员将日本结缕草中的抗旱基因F转入拟南芥，培育抗旱转基因拟南芥。请回答下列问题：
（1）从日本结缕草细胞中提取基因组DNA，进而获得基因F的启动子序列，启动子的作用是________。提取日本结缕草相应的mRNA，用________的方法获得cDNA再克隆基因F。构建重组质粒所用的工具酶是________。
（2）将重组质粒转入农杆菌的感受态细胞，检测基因F表达呈阳性的菌落，再将这些菌体与拟南芥细胞共同浸泡在相关的溶液中。上述操作的目的是________________________。
（3）已知野生型拟南芥对草甘膦（一种除草剂）不具抗性。给获得的抗旱转基因拟南芥喷施一定浓度的草甘膦，挑选正常生长的植株，可筛选出成功转化的拟南芥。由此说明重组质粒中的标记基因是________________。
（4）常用________的方法检测基因F能否在拟南芥细胞中转录。将抗旱转基因拟南芥和野生型拟南芥置于干旱环境中培养，若基因F能够提高拟南芥的抗旱性，则预期的实验结果是________________________。
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新一代基因编辑 CRISPR/Cass技术的实质是用特殊的引导序列( sgRNA)将Cas9酶——“基因剪刀精准定位到所需切割的基因上，然后进行编辑。科研人员设想利用新一代基因编辑技术来预防艾滋病。回答下列问题：
(1)动物细胞中没有编码Cas9酶的基因，可通过构建___________，用___________法将其导入受体细胞，最终表达出Cas9酶。
(2)CCR5蛋白是HIV病毒入侵机体细胞的主要辅助受体之一，HIV通过识别膜通道蛋白CCR5侵入宿主细胞。为有效阻止HⅣ侵染新分化生成的T淋巴细胞，科研人员将 SgRNA序列导入骨髓___________细胞中，以构建sgRNA-Cas9酶复合体。Cas9酶可以催化___________键断裂，以实现对DNA序列的定向切割。设计SgRNA序列需要根据___________的核苷酸序列，原因是___________。
(3)为检测T淋巴细胞的CCR5基因是否成功被编辑，采用___________技术检测是否含有CCR5基因，还需要对___________蛋白进行检测。