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含有限制酶的细胞中通常还具有相应的甲基化酶，这两种酶对 DNA 分子有相同的作用序列，但具有不同的催化功能。甲基化酶可以对 DNA 序列进行修饰，使限制酶不能对这一序列进行识别和切割。回答下列问题：
（1）目前，基因工程中使用的限制酶主要是从__________生物中分离纯化获得的，鉴定其化学本质可用_____________________。构建“基因组文库”和“cDNA文库”的过程中需要使用DNA连接酶的是____________(填“基因组文库”、“cDNA 文库”或“基因组文库和 cDNA 文库”）。
（2）含有某种限制酶的细胞，可以利用限制酶切割外源 DNA，但不破坏细胞自身的 DNA，其原因可能有①_______________________；②__________________________。
（3）DNA分子复制过程需要引物，引物是一小段____________。体外扩增DNA的PCR技术的中文名称是______________，PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可分为变性、复性和延伸三步。在循环之前，常要进行一次预变性，以便_______________________
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含有限制酶的细胞中通常还具有相应的甲基化酶，这两种酶对DNA分子有相同的作用序列，但具有不同的催化功能。甲基化酶可以对DNA序列进行修饰，使限制酶不能对这一序列进行识别和切割。回答下列问题：
（1）目前，基因工程中使用的限制酶主要是从_____________生物中分离纯化获得的。构建“基因组文库”和“cDNA文库”的过程中需要使用DNA连接酶的是_____________（填“基因组文库”、“cDNA文库”或“基因组文库和cDNA文库”）。
（2）为在短时间内大量获得目的基因，可用的技术是_____________。目的基因获取之后，需要进行_____________，此步骤是基因工程的核心。
（3）用酵母菌合成的人胰岛素和利用细菌合成的人胰岛素在空间结构上存在一定差异，其原因是_____________。
（4）含有某种限制酶的细胞，可以利用限制酶切割外源DNA，但不破坏细胞自身的DNA，其原因可能有①_____________；②_____________。
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含有限制酶的细胞中通常还具有相应的甲基化酶，这两种酶对DNA分子有相同的作用序列，但具有不同的催化功能。甲基化酶可以对DNA序列进行修饰，使限制酶不能对这一序列进行识别和切割。回答下列问题：
（1）目前，基因工程中使用的限制酶主要是从___________生物中分离纯化获得的。构建“基因组文库”和“cDNA文库”的过程中需要使用DNA连接酶的是________（填“ 基因组文库”“cDNA文库”或“基因组文库和cDNA文库”）。
（2）含有某种限制酶的细胞，可以利用限制酶切割外源DNA，但不破坏细胞自身的DNA，其原因可能有①_____________；②_____________。
（3）利用PCR扩增目的基因的过程由高温变性（90~95℃）、低温复性（55 ~60℃）、适温延伸（70-75℃）三个步骤构成一个循环，为使得DNA聚合酶能够重复利用，选用的酶应在_________________ ℃处理后仍然 具备催化活性。
（4）在PCR扩增目的基因时，为实现序列中的腺嘌呤被放射性同位素标记，反应体系中添加的原料应包括碱基已被标记的__________ （填“腺嘌呤核糖核苷酸”、“dATP”或“ATP”）。
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含有限制酶的细胞中通常还具有相应的甲基化酶，这两种酶对DNA分子有相同的作用序列，但具有不同的催化功能。甲基化酶可以对DNA序列进行修饰，使限制酶不能对这一序列进行识别和切割。回答下列问题：
（1）目前，基因工程中使用的限制酶主要是从__________生物中分离纯化获得的。
（2）含有某种限制酶的细胞，可以利用限制酶切割外源 DNA，但不破坏细胞自身的 DNA，其原因可能有①______；②______。
（3）利用 PCR 扩增目的基因的过程由高温变性（90〜95℃)、低温复性（55〜60℃)、适温延伸(70〜75℃)三个步骤构成一个循环，为使得 DNA 聚合酶能够重复利用，选用的酶应在____℃处理后仍然具备催化活性。
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mtDNA是存在于人类细胞线粒体中双链闭合环状的DNA分子，具有自我复制、转录和控制合成蛋白质的功能。mtDNA的类型具有明显的种族特异性。若用两种识别切割序列完全不同的限制酶M和N切割某人的mtDNA，通过凝胶电泳分离分析得下表。限制酶M和N的识别序列和切割位点如图所示。
凝胶电泳结果
（1kb=1000对碱基）（+表示该片段的存在以及含量）
分子量（kb）
酶M
酶N
酶M+酶N
1.0
+
+
2.0
+
3.0
+
4.0
+
5.0
+
6.0
+
7.0
+
9.0
+
10.0
+
⑴．该mtDNA的长度为___________kb。在该DNA分子中，M酶与N酶的切割位点分别有____________个。
⑵．M酶与N酶切出的能相互粘连的末端能在______________酶的作用下相互连接，请将连接的结果表示出来：_______________________。连接后的序列是否可以用M酶、N酶进行切割，并简述理由：_________________________________________________
⑶．有人认为mtDNA能成为研究人类起源与进化的一个有力工具，请简述理由：_________________________________________________________________________ 。
下图为真核细胞的某基因的结构图以及限制酶M和N的切割位点。
⑷．现用该基因作为目的基因，若采用直接从供体细胞中分离，具体方法是：_____________。这个方法虽操作方便，但切割下的基因中含有不能指导蛋白质合成的区域。因此，目前往往采用逆转录的人工合成的方法，其基本步骤是：__________________________。
⑸．已知Ⅱ区的碱基数是2000个，其中阴影区域碱基数是800个，空白区域中G和C的总数共有400个，则由该区转录的mRNA中A和U总数是________。
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mtDNA是存在于人类细胞线粒体中双链闭合环状的DNA分子，具有自我复制、转录和控制合成蛋白质的功能。mtDNA的类型具有明显的种族特异性。若用两种识别切割序列完全不同的限制酶M和N切割某人的mtDNA，通过凝胶电泳分离分析得下表。限制酶M和N的识别序列和切割位点如图所示。
凝胶电泳结果：（1kb=1000对碱基）（+表示该片段的存在以及含量）
分子量（kb）
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
9.0
10.0
酶M
+
+
+
酶N
+
+
酶M+酶N
+
+
+
+
+
下列说法中错误的是
A．该mtDNA的长度为16kb
B．在该DNA分子中，M酶与N酶的切割位点如图所示
C．M酶与N酶切出的能相互粘连的末端能在DNA连接酶的作用下相互连接，连接后的序列可以用M酶、N酶进行切割
D．mtDNA能成为研究人类起源与进化的一个有力工具
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下列关于基因工程的说法中正确的有（多选）（ ）
A.一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列
B.DNA聚合酶可以用来“缝合”目的基因与运载体之间的缺口
C.“不同的DNA分子具有相同的双螺旋结构”是基因工程成功实施的基础
D.黏性末端碱基对之间的连接需要DNA连接酶的催化
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下列与“中心法则”有关的叙述，错误的是（ ）
A.核酸苷序列不同的基因可表达出相同的蛋白质
B.基因转录形成的 RNA 产物中，可能存在氢键
C.RNA 聚合酶具有催化 DNA 双螺旋结构形成的功能
D.HIV 的遗传物质可直接整合到宿主细胞的遗传物质中
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下列关于基因工程技术的叙述，正确的（ ）。
①切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列
②PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应
③载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因
④抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达
A. 有一项 B. 有两项 C. 有三项 D. 有四项
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下列有关蛋白质的叙述，正确的是（ ）
A.生物膜上的蛋白质的功能一定是作为载体或通道蛋白
B.氨基酸序列相同的多肽链可能形成功能不同的蛋白质分子
C.人体内环境中的某些蛋白具有催化丙酮酸氧化分解的功能
D.在噬菌体侵染细菌实验中，“S”或“P”均可被用于标记蛋白质
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