为生产具有特定性能的α-淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656个碱...

为生产具有特定性能的α-淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656个碱基对），利用基因工程大量制备琢α-淀粉酶，实验流程见下图。请回答下列问题：

(1)利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前，需先合成两条引物，并获得细菌的_______________________。

(2)为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的____________________端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的_________________________。

(3)进行扩增时，反应的温度和时间需根据具体情况进行设定，下列选项中________的设定与引物有关，________的设定与扩增片段的长度有关。（填序号）

①加热至90～95℃(变性)

②冷却至55～60℃(复性)　　

③加热至70～75℃(延伸)

④90～95℃维持时间  　　　　

⑤55～60℃维持时间  　　　　

⑥70～75℃维持时间

(4)下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列：

图中虚线框内mRNA片段包含________个密码子，如虚线框后的序列未知，预测虚线框后的第一个密码子最多有________种。

(5)获得工程菌表达的α-淀粉酶后，为探究影响酶活性的因素，以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性，结果如下：

根据上述实验结果，初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为___________________________

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为生产具有特定性能的α-淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656个碱基对），利用基因工程大量制备琢α-淀粉酶，实验流程见下图。请回答下列问题：

（1）利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前，需先获得细菌的_________。

（2）为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的____端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是________________。

（3）进行扩增时，反应的温度和时间需根据具体情况进行设定，下列选项中_______的设定与引物有关，________的设定与扩增片段的长度有关。（填序号）

①变性温度②退火温度③延伸温度④变性时间⑤退火时间⑥延伸时间

（4）下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列：

图中虚线框内mRNA片段包含___个密码子，如虚线框后的序列未知，预测虚线框后的第一个密码子最多有__种。

（5）获得工程菌表达的α-淀粉酶后，为探究影响酶活性的因素，以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性，结果如下：

根据上述实验结果，初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为______。

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基因克隆是对分离出来的目的基因进行大量扩增的过程。经过基因克隆，可以生产出大量的目的基因或在基因表达时获得大量的蛋白质。细菌质粒是基因克隆的合适载体，经研究发现，某些细菌质粒中含有两个抗生素抗性基因——氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，而且，在四环素抗性基因中存在限制酶的单一识别序列。

下图表示利用质粒进行基因克隆的过程，其中A-D表示物质，I和II表示抗性基因，①—⑦表示过程，其它数字表示菌落，据图回答下列问题：

（1）写出下列字母和编号的名称：A：； II：。

（2）将A和B形成D所需的酶是________。⑤过程中为提高成功率，常用________溶液处理大肠杆菌。

（3）为筛选含有物质A的细菌，需进行细菌培养，先在培养基（一）中只加入氨苄青霉素，一段时间后，培养基上长出的细菌菌落具有________特性。然后，用灭菌绒布从培养基（一）中蘸取菌种，再按到只含四环素的培养基（二）中培养。根据培养基（一）和（二）上的细菌生长情况，可以判断图中菌落________（填数字）即为筛选出的含有物质A的细菌，原因是。

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单克隆抗体技术在疾病诊断和治疗以及生命科学研究中具有广泛的应用。下列关于单克隆抗体的叙述，错误的是

A．可以利用基因工程技术生产

B．与抗癌药物结合可制成“生物导弹”

C．体外培养B淋巴细胞可大量分泌单克隆抗体

D．可以在生物体内生产，也可以在体外生产

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下图是科学家利用供体生物DNA中的无限增殖调控基因，制备单克隆抗体的过程。下列相关叙述错误的是

A．经限制酶处理后的目的基因与载体的黏性末端相同

B．Ⅰ是经特定抗原免疫过的B淋巴细胞

C．此种制备单克隆抗体的方法涉及转基因及动物细胞融合技术

D．经检测和筛选后的Ⅱ，既能无限增殖又可分泌单克隆抗体

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下图是科学家利用供体生物DNA中的无限增殖调控基因，制备单克隆抗体的过程。下列相关叙述错误的是（　　 ）

A．经限制酶处理后的目的基因与载体的黏性末端相同

B．Ⅰ是经特定抗原免疫过的B淋巴细胞

C．此种制备单克隆抗体的方法涉及转基因及动物细胞融合技术

D．经检测和筛选后的Ⅱ，既能无限增殖又可分泌单克隆抗体

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关于单克隆抗体的制备，下列叙述错误的是

A. 单克隆抗体的制备至少需要两次筛选，且筛选的目的不同

B. 生产单克隆抗体是动物细胞工程常用的技术手段之一

C. 单克隆抗体可以利用基因工程技术生产

D. 单克隆抗体的优点是既能无限增殖，又能大量制备

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下列对“克隆”广义概念认识的叙述，不正确的是

A. 克隆就是通过有性生殖的方式产生后代

B. 由单个细菌长成一个菌落，属于细胞水平克隆

C. 胰岛素基因利用PCR技术大量扩增，属于分子水平克隆

D. 利用植物体的细胞进行植物组织培养获得新植株，属于个体水平克隆

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科学家从某无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因（prG)，该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了新思路。某国家重点实验室准备探索利用基因工程生产单克隆抗体，请回答下列问题：

（1）实验室已获得无限增殖调控基因（prG)。在体外，可采用__________技术大量扩增该目的基因。该技术的基本反应过程：目的基因DNA受热___________后解链为单链，____________与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶的作用下进行____________，如此重复循环多次。该技术的前提是要有___________，以便根据这一序列合成引物。

（2）该基因工程操作的核心是_________。本研究中，受体细胞为__________，欲将目的基因转入受体细胞，常采用___________方法。若实验成功，则受体细胞既能____________，又能____________。

（3）制备单克隆抗体通常选用细胞融合技术，使_______细胞与___________细胞融合，融合成功的细胞经过筛选就是所需要的_____________细胞。

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回答有关生物工程的问题。（8分）

小鼠是实验室常用的实验动物，如：利用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体、利用小鼠进行DNA重组研究中导致了“基因敲除”技术的出现。

用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体。

（1）．将小鼠等分为两组，甲组定期间隔注射适量的含X病毒的溶液，其目的是____________________；乙组注射________________（作对照）。

（2）．为了保存有价值的杂交瘤细胞系，通常用超低温将其冻存，请分析其原因____________

___________________。

用小鼠进行DNA重组研究中形成的“基因敲除”技术，能“敲除”DNA分子上的特定基因。该技术的主要过程如下：

第一步：分离小鼠胚胎干细胞，这些细胞中含有需要改造的基因，称“靶基因”。

第二步：获取与“靶基因”同源的DNA片断，利用特定技术在该DNA片段上插入neo^R基因（新霉素抗性基因）成为突变DNA（如下图），使该片段上的靶基因失活。

第三步：将插入neo^R基因（新霉素抗性基因）的靶基因转移入胚胎干细胞，再通过同源互换，用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个，完成对胚胎干细胞的基因改造。

第四步：将第三步处理后的胚胎干细胞，转移到特定培养基中筛选培养。

其基本原理如下图所示：

（3）．第二步中neo^R基因插入靶基因使用的工具酶是________。neo^R基因不仅能使靶基因失活，还可作为________；“靶基因失活”的根本原因是________。

（4）．从研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，到将该细胞培育成“基因敲除”小鼠，运用到的生物技术有________、等。

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