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滨藜在含盐量0．6%以上的条件下生长，是耐盐碱基因开发的理想材料。若将滨藜的耐盐碱基因转移到水稻等农作物体内，将会大大提高水稻等农作物的种植面积。回答下列问题：
（1）从滨藜中获得耐盐碱基因需要用_____________酶处理，然后与含四环素抗性基因的Ti质粒连接构建___________，并导入农杆菌。在含有四环素的固体培养基中培养，目的是_________________________________________________________。
（2）用农杆菌感染时，应优先选用水稻_________（填“受伤的”或“完好的”）叶片与含重组质粒的农杆菌共同培养，选用这种叶片的理由是__________________________________。
（3）导入耐盐碱基因的植株细胞经过________形成愈伤组织，然后__________形成胚状体，继续发育形成转基因水稻幼苗。
（4）将生长至4叶期的转基因幼苗转入高浓度的NaCl溶液（含盐量0．6%以上）中培养，进行耐盐实验，用非转基因幼苗作为对照。培养30天后观察两者的存活率差异。若_________，则说明转基因植株获得了耐盐特性。
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将刺槐的耐盐碱基因转移到主要的农作物水稻体内，可以增大水稻的种植面积，科学利用盐碱地。
（1）刺槐基因组文库含有该生物种群的 基因；用刺槐发育的某个时期的mRNA 产生的多种互补DNA（ cDNA）片段，与载体连接后储存于一个受体菌群，建立cDNA文库。与基因组文库相比cDNA文库的基因中无 和 。
（2）培育耐盐碱的转基因水稻可以从刺槐的基因组文库中____ 出耐盐碱基因插入到 上，通过农杆菌的转化作用，使耐盐碱基因进入水稻细胞并将其插入水稻细胞中的染色体上。
（3）将转基因水稻细胞通过 技术得到转基因植株，要确认该耐盐碱基因是否在水稻植株中正确表达，应检测此水稻植株中该基因的 ，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的 是否得到提高。
（4）让二倍体转基因耐盐碱水稻自交，子代中耐盐碱与不耐盐碱植株的数量比为3：1，推测该耐盐碱基因整合到了 （同源染色体的一条上、同源染色体的两条上）。
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将刺槐的耐盐碱基因转移到主要的农作物水稻体内，可以增大水稻的种植面积，科学利用盐碱地。
（1）刺槐基因组文库含有该生物种群的 基因；用刺槐发育的某个时期的mRNA 产生的多种互补DNA（ cDNA）片段，与载体连接后储存于一个受体菌群，建立cDNA文库。与基因组文库相比cDNA文库的基因中无 和 。
（2）培育耐盐碱的转基因水稻可以从刺槐的基因组文库中____ 出耐盐碱基因插入到 上，通过农杆菌的转化作用，使耐盐碱基因进入水稻细胞并将其插入水稻细胞中的染色体上。
（3）将转基因水稻细胞通过 技术得到转基因植株，要确认该耐盐碱基因是否在水稻植株中正确表达，应检测此水稻植株中该基因的 ，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的 是否得到提高。
（4）让二倍体转基因耐盐碱水稻自交，子代中耐盐碱与不耐盐碱植株的数量比为3：1，推测该耐盐碱基因整合到了 （同源染色体的一条上、同源染色体的两条上）。
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豇豆对多种害虫具有抗虫能力，根本原因是豇豆体内具有胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI基因)。科学家将其转移到水稻体内后，却发现效果不理想，主要原因是CpTI蛋白质的积累量不足。经过在体外对CpTI基因进行了修饰后，CpTI蛋白质在水稻中的积累量就得到了提高。其修饰和表达过程如下图所示：
请根据以上材料，回答下列问题：
(1)一种植物出现的优良抗逆性状，在自然状态下很难转移到其他种类的植物体内，主要是因为存在 。
(2)“信号肽”序列及“内质网滞留信号”序列的基本组成单位是 ，此基因工程的核心是 。
(3)如果想在短时间内得到大量的CpTI基因可以采用 技术。
(4)如果种植上述转基因水稻，它所携带的目的基因可以通过花粉传递给近缘物种，造成“基因污染”。把目的基因导入 中，根据母系遗传的特点，就可以避免“基因污染”。
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阅读下列材料回答问题。
材料一：过去，一个糖尿病病人胰岛素用量要从40至50头猪体内提取，现将人工合成的胰岛素基因转移到大肠杆菌体内，并随大肠杆菌的繁殖快速扩增，然后在大肠杆菌体内合成大量的胰岛素，大大降低了医治糖尿病的成本。
材料二：单克隆抗体在医疗方面发挥着越来越重要的作用。最初获得单克隆抗体的过程是：老鼠的骨髓瘤细胞＋已受免疫的淋巴细胞→选择培养基培养选取杂交瘤细胞并使之扩大增殖→将杂交瘤细胞接种在培养瓶或注射到动物体内→分离纯化单克隆抗体。
材料三：器官移植是重要的医疗手段之一，但许多病人却因为得不到适合自己的供体器官错过了最佳医疗期。胚胎干细胞(可保存在干细胞库里)经诱导可形成多种器官。
材料四：植物除了通过种子繁殖，还可以通过以下方式繁殖：植株的组织细胞→诱导形成愈伤组织→分化出不定芽→生根成苗→幼苗移栽。这种繁殖实质上就是植物克隆。
（1）材料一中包含了____________的克隆。
（2）材料二中运用了____________技术，若是植物细胞需用____________酶除去细胞壁，这一技术在一定程度上解决了育种中____________的障碍。
（3）材料三中用自身的胚胎干细胞诱导形成器官，不仅能缓解供体器官的短缺，还具有另一优点是________________________________________________。
（4）材料四中运用了植物细胞工程最基本的技术之一是____________。材料四还证明了分化的植物组织细胞仍具有____________。
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为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题：
（1）获取真核生物的基因通常采用人工合成法，通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含 的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A和B位置除了接上以上两个结构外还需分别加入____ 限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化以及定向连接。
（2）过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系的主要成分中应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和引物I和引物Ⅱ，若在该反应体系中，目的基因扩增了4代，则共用了引物I____个。
（3）请画出PstI限制性核酸内切酶切割DNA形成黏性末端的过程。
（4）图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是____ 。
（5）在步骤⑤ ⑥过程中都需用____处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是用____ 法。
（6）假设该抗盐碱基因D，通过基因工程导入水稻后连接到水稻的一条染色体上，则该水稻进行减数分裂的细胞在联会时有____ 个D基因。
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基因工程
为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系，为解决我国的粮食问题做出了重要贡献。
几种限制酶识别序列及切割位点表
限制酶
AluⅠ
EcoRⅠ
PstⅠ
SmaⅠ
切割位点
1.图中过程①是基因工程的______步骤，除了图示方法外，还可以用______方法达成同一目的。
2.过程②采用PCR技术是为了实现基因的扩增，该过程需要用到的原料主要是______。
3.如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在图中两侧的A和B位置接上______限制酶识别序列。如果从连接效率更高的角度，最好选择____________________
A．EcoRⅠ和EcoRⅠ
B．PstⅠ和SmaⅠ
C．EcoRⅠ和PstⅠ
D．EcoRⅠ和SmaⅠ4.从基因工程的分类上，图示的基因工程属于______基因工程。
5.耐盐碱基因成功导入了水稻细胞中，是否一定意味着该基因工程取得了成功？______，如果是请分析原因，如果否请提出一个从个体水平检测该基因工程是否成功的方案。______。
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为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题：
（1）获取真核生物的基因通常采用人工合成法，通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含 的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A和B位置除了接上以上两个结构外还需分别加入____ 限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化以及定向连接。
（2）过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系的主要成分中应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和引物I和引物Ⅱ，若在该反应体系中，目的基因扩增了4代，则共用了引物I____个。
（3）请画出PstI限制性核酸内切酶切割DNA形成黏性末端的过程。
（4）图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是____ 。
（5）在步骤⑤ ⑥过程中都需用____处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是用____ 法。
（6）假设该抗盐碱基因D，通过基因工程导入水稻后连接到水稻的一条染色体上，则该水稻进行减数分裂的细胞在联会时有____ 个D基因。
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粮食问题一直困扰着人类。为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题：
图1 转基因操作流程图
表2 几种限制酶识别序列及切割位点表
（1）如果要将耐盐碱基因和质粒重组，必须对基因进行修饰和改造：在基因两侧的A和B位置分别加入____________限制酶识别序列，这样才有利于目的基因和质粒定向连接。
（2）过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系需加入引物Ⅰ和引物Ⅱ等物质，若共用了引物Ⅱ31个，则目的基因扩增了_______代。
（3）若用EcoRⅠ和PstⅠ两种限制酶同时切割载体质粒，则能形成_______种不同长度的DNA片段，共有________个游离的磷酸基团。
（4)图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是____________________。
（5）在步骤⑤⑥过程中都需用________________处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是用___________法。
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(9分)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题：
图1 转基因操作流程图
表2 几种限制酶识别序列及切割位点表
(1) 获取真核生物的基因通常采用人工合成法，通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含____________的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A和B位置除了接上以上两个结构外还需分别加入____________限制酶识别序列，这样设计的优点有利于质粒和目的基因定向连接。
(2) 过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系需加入引物Ⅰ和引物Ⅱ等物质，若目的基因扩增4代，则共用了引物Ⅰ________个。
(3) 请画出Pst Ⅰ切割DNA形成黏性末端的过程：__________________________。
(4) 图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是____________________。
(5) 在步骤⑤⑥过程中都需用__________________________处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是用____________法。
(6) 假设该抗盐碱基因D，通过基因工程导入水稻后连接到水稻的一条染色体上，则该水稻进行减数分裂的细胞在联会时有________个D基因。
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