重组人纤溶酶原激活剂（rhPA)是临床血栓疾病治疗的主要生物药品。家兔具有多胎、妊娠期短、...

重组人纤溶酶原激活剂（rhPA)是临床血栓疾病治疗的主要生物药品。家兔具有多胎、妊娠期短、繁殖快、全年多发情，产仔率高等优点，可以作为乳腺生物反应器批量生产药物。下图是利用转基因兔生产重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的过程，请据图回答。

（1）构建rhPA基因表达载体需要用限制酶_________切割质粒和目的基因，为获得乳腺特异性表达载体需用_____________酶切割重组质粒使之线性化。

（2）对母兔注射_________使其超速排卵，并与正常公兔配种。将乳腺特异性表达载体导人家兔受精卵中最有效的导入技术是____________。

（3）将受精卵置于37℃的_______________气体环境中培养一段时间后移植到代孕兔的输卵管中，代孕兔需经___________处理。

（4）子代兔需要经过筛选过程才能获得生产人组织纤溶酶原激活剂的生物反应器，原因有____________、____________。

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哺乳动物妊娠时间长，每胎产仔少，繁殖速度慢。目前加快优良种畜繁殖速度的最好方法是

A．动物细胞培养　　  　B．胚胎移植　　C．动物细胞融合   　D．核移植

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哺乳动物妊娠时间长，每胎产仔少，繁殖速度比较慢。为加快优良种畜的繁殖速度，目前最好采用的方法是

A、动物细胞培养　　  　B、胚胎移植　　C、动物细胞融合   　D、核移植

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垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP)是从下丘脑中分离出的一种神经多肽，新型基因重组的PACAP衍生多肽MPL-2具有治疗Ⅱ型糖尿病的功能。下图为含MPL-2基因的重组质粒构建示意图。请分析回答下列问题：

（1）MPL-2基因的扩增采用了重叠延伸PCR技术，该技术采用的引物与DNA母链能_______，需要_______酶的催化。

（2）质粒中启动子是__________酶识别和结合的部位，能驱动基因的_______过程。

（3）构建的基因表达载体除图中显示的组成部分外，还应包含____________等部分。SapⅠ和NdeⅠ属于基因工程工具酶中的________________酶，作用于两个核苷酸之间的___________。

（4）质粒和MPL-2基因都采用SapⅠ和NdeⅠ进行双酶切割，目的是______________。

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重组人血白蛋白和干扰素α-2b（rHSA，IFNα-2b）是血液制品俗称“生命制品”的一种替代品，是临床非常珍贵的药物，目前利用基因工程，以酵母菌为工程菌生产，具有纯度高，生产效率高等特点。其实验流程如甲图，乙图是pHIL-D2质粒（载体）的图谱，据图回答：

（1）RT-PCR是利用人血白细胞中的mRNA逆转录获取人IFNα-2b 的cDNA，以此cDNA为模板，扩增人IFNα-2b基因，那么RT-PCR要用到的酶是__________________。在获得rHSA/IFNα-2b重组基因时，要用到限制酶，大多数限制酶的识别序列由____个核苷酸组成。

（2）甲图中，用酵母菌做表达工程菌而不用大肠杆菌做工程菌，推测可能的原因是_______________________________________________________________________。

（3）本实验的表达载体如乙图，除了目的基因外，还必须有启动子和终止子，启动子的本质是__________________，其功能是____________________________________。

（4）乙图中Ampinicillin表示氨苄青霉素抗性基因，其作用是______________________。

（5）基因工程最后一步是目的基因的检测与鉴定，请说出分子水平检测的物质有________________________________________________________________________。

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红细胞生成素（EPO）是体内促进红细胞生成的种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（ rhEPO），其简要生产流程如下图。请回答：

（1）图中①技术利用的是__________原理，利用该技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便__________。图中②所指的物质是__________。

（2）培养重组CHO细胞时，要在培养液中添加一定量的__________，以防培养过程的污染；还需定期更换培养液，目的是__________。

（3）检测 rhEPO的体外活性需用抗 rhEPO的单克隆抗体。分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞，可由 rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成。细胞融合实验完成后，融合体系除杂交瘤细胞外，可能还含有未融合的细胞和其他种类的融合细胞，体系中出现多种细胞类型的原因__________。是未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是__________。

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红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细

胞生成素(rhEPO）期间要生产流程如右图

（1）EPO在人体细胞内合成的场所是____________。

（2）图中①所指的是____________技术，用该技术扩增与生物体内扩增所需酶的差异是______________________。

（3）图中的②与人体红细胞中提取的②是否相同？　　　　　　　　　 （填是或否）原因是____________。

（4）将含人EPO基因的表达载体导入受体细胞的方法是___________。用DNA分子杂交技术检测表达载体导入是否成功，基于的原理是_　　　 ___。

（5）用凝胶色谱法初步分离纯化rhEPO，主要基于各种蛋白质_____________的差异。

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（15分）

红细胞生成素（EPO）是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO），其简要生产流程如右图。请回答：

（1）图中①所指的是________技术。

（2）图中②所指的物质是________，③所指的物质是________。

（3）培养重组CHO 细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞产物积累对细胞自身造成危害，应定期更换________。

（4）检测 rhEPO的体外活性需用抗rhEPO的单克隆抗体。分泌该单克隆抗体的________细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成

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（16分）红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素(rhEPO）期间要生产流程如右图

（1）图中①所指的是________技术。

（2）图中②所指的物质是________，③所指的物质是________。

（3）培养重组CHO 细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞严物积累对细胞自身造成危害，应定期更换________。

（4）检测 rhEPO外活性需用抗rhEPO单克隆抗体。分泌单克隆抗体的________细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成。

（5）动物体内能产生特异性抗体的细胞称为____ 。在抗体，溶菌酶、淋巴因子和编码抗体的基因这四种物质中不属于免疫活性物质是_____。在吞噬细胞、淋巴细胞和红细胞这三类细胞中不属于免疫细胞的____。

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促红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人促红细胞生成素(rhEPO），生产流程如图，请回答下列问题：

（1）图中①所指的技术中，需要在进行过程中补充的物质是_______。图中②所指的物质是____，检测细胞能否表达出③的方法是_______技术。

（2）受体细胞选择仓鼠卵巢细胞系，主要是基于这种细胞的________特性。培养重组CHO 细胞时，除适宜的温度及无菌条件外，还需要保证的环境因素是________________，为防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害，应____。

（3）科学家经过努力现已研制出了可以口服的EPO，为培育出乳汁中含有此类EPO的转基因牛，需选择__________作为受体细胞，在操作中可能涉及的胚胎工程技术主要有______________（要求填两项）。

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