研究表明，每个人的DNA都不完全相同，因此，DNA也可以像指纹一样用来识别身份，这种方法就...

研究表明，每个人的DNA都不完全相同，因此，DNA也可以像指纹一样用来识别身份，这种方法就是DNA指纹技术。应用DNA指纹技术，首先需要用合适的酶将待检测的样品DNA切成片段，然后用电泳的方法将这些片段按大小分开，再经过一系列步骤，最后形成DNA指纹图。下列相关说法错误的是（　　 ）

A.DNA指纹技术可用于刑侦、亲子鉴定等领域

B.可用人的精液、头发等样品进行DNA指纹鉴定

C.不同人的DNA不同主要是因为DNA中的碱基排列顺序不同

D.应用DNA指纹技术时需要限制酶、DNA连接酶等工具酶将待测DNA切成片段

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动物细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。现在己经广泛应用于多种学科的研究：新发展起来的杂交瘤技术，为制备单克隆抗体开辟了新途径。研究表明DNA合成有两条途径：“S途径”和“D途径”，淋巴细胞(浆细胞)有“S途径”和“D途径”；骨髓瘤细胞只有“D途径”；HAT培养液中氨基喋呤可以阻断DNA合成的“D途径”。下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。回答下列问题：

⑴___________技术是单克隆抗体技术的基础。

⑵单克隆细胞是指__________________________________________________。

⑶单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是____________。

⑷杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_____________特点，又具备淋巴细胞的__________特点。

⑸图示过程，有两次的筛选。第一次是用HAT培养液筛选出杂交瘤细胞，那么淋巴细胞(浆细胞)在HAT培养液中不生长的原因是_________，骨髓瘤细胞在HAT培养液中不生长的原因是_______。

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微卫星DNA是广泛分布于真核生物基因组中的简单重复序列。由于重复单位的重复次数在个体间呈高度特异性并且数量丰富，因此，微卫星DNA可以作为分子标记，并有着广泛应用。

（1）为了分离捕获到某种生物的微卫星DNA分子标记，可以用生物素标记的特定简单重复序列作为探针，与该生物的__________（填“基因组”或“cDNA”）文库进行杂交，然后再经多个步骤筛选获取微卫星DNA。

（2）扩增分离到的微卫星DNA序列的技术方法为__________，其原理是__________。其反应体系中含缓冲液、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物、____________________及__________酶等。

（3）对微卫星DNA进行体外扩增的基本反应步骤为____________________。

（4）从图中4种引物中选择正确的引物，并在_____内用箭头表示子链延伸的方向。

（5）根据“微卫星DNA”的特点判断，这种分子标记可应用于_____（填字母）。

A．人类亲子鉴定B．种群遗传多样性研究

C．诱导基因突变D．冠状病毒遗传物质测序

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PCR技术是利用DNA复制的原理，将某一DNA分子片段在实验条件下，合成许多相同片段的一种方法。利用这种技术能快速而特异性的扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段，“人类基因组计划”的研究中常用这种技术。请结合相关知识，回答有关此技术的一些问题：

（1）PCR技术能将某一DNA分子扩增成许多相同的DNA片段，原因是：①DNA分子的_______________结构为复制提供了精确的模板；②DNA复制时遵循的_______________原则，保证了复制准确无误地进行。

（2）在实验条件下，DNA分子进行扩增，除了需要扩增的DNA片段外，还需要_________、____________和_____________等条件。

（3）某一DNA分子片段含有80对碱基，其中腺嘌呤有35个，若让该DNA分子扩增三次（即复制三次）至少需要鸟嘌呤脱氧核苷酸的数目是______________个。

（4）用32P标记的一个DNA分子的两条链，让该DNA分子在含31P的培养液中连续扩增三次，所得DNA分子中含31P的脱氧核苷酸链与含32P脱氧核苷酸链数之比是__________。

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Ⅰ．下表是几种限制酶识别序例及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用的限制酶是____________。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_______。要检测目的基因是否在受体细胞中表达，应采用_______方法。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为_______，对于该部位，这两种酶_______（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得_______种大小不同的DNA片段。

Ⅱ．微卫星DNA是广泛分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由于重复单位的重复次数在个体间呈高度特异性并且数量丰富，因此，微卫星DNA可以作为分子标记，并有着广泛应用。

（5）为了分离捕获到某种生物的微卫星DNA分子标记，可以用生物素标记的特定简单重复序列作为探针，与该生物的_______（填“基因组”或“cDNA”）文库进行杂交，然后再经多个步骤筛选获取微卫星DNA，对微卫星DNA进行体外扩增的基本反应步骤为__________________。

（6）扩增分离到的微卫星DNA序列的技术为PCR技术，其原理是______________。

（7）根据“微卫星DNA”的特点判断，这种分子标记可应用于___________（填字母）。

A．人类亲子鉴定　　　　　　　　　　 B．种群遗传多样性研究

C．诱导基因突变　　　　　　　　　　 D．冠状病毒遗传物质测序

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抗体的结构如图所示，它由两条H链和两条L链组成。同一物种C区氨基酸序列恒定，不同抗体结合抗原的V区氨基酸序列有差异。

（1）在生物体内，抗体是由______细胞分泌的，与其合成与分泌直接相关的细胞器有_______。

（2）传统方法获取抗体时，需要将相应的抗原反复注射到动物体内，从动物的血清中分离。显然，这种方法产生的抗体量和纯度等都很低特异性差，单克隆抗体的出现，克服了传统抗体的不足，单克隆抗体是指_____________。

（3）天然的抗体左右两个V区结构完全相同，只能结合相同的抗原。通过一定技术手段可以得到双功能抗体（又叫双特异性抗体），它的两个V区能结合不同的抗原。制备双功能抗体的基本方法如下：将能分泌抗体1的杂交瘤细胞（A细胞）与能分泌抗体2的淋巴细胞（B细胞）进行融合，形成可分泌两种亲代抗体和杂种抗体的杂种—杂交瘤细胞（A—B）。细胞融合时需要用____________、聚乙二醇或电激等诱导，融合后总共应该有___________种细胞（最多考虑两两融合）。

（4）双功能抗体在癌症治疗中可作为“生物导弹”：用其中一个V区识别癌细胞表面______，用另一个V区将T细胞等杀伤细胞定向带到癌细胞所在的位置，这样造成肿瘤局部免疫细胞聚焦的效果。

（5）细胞融合方法得到的双功能抗体，只是将两个不同抗体的V区集中到了一个抗体上，并未改变V区的结构。通过________技术，可以对双功能抗体的V区进行设计改造，使其更适合人类的需要。这种改造，最终还必须通过对DNA分子的改造来完成，因而该技术也称为_________________。

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在重组DNA技术中，将外源基因送入受体细胞的载体可以是（　　 ）

A.大肠杆菌的质粒 B.切割DNA分子的酶

C.DNA片段的黏性末端 D.用来识别特定基因的DNA探针

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美国科学家莫里斯发明了PCR技术，它是一种DNA“复印机”，可以在数小时内，将一个DNA复制出一千亿个，解决了检测样本扩增的难题。在人类基因组计划实施中，PCR技术使每个核苷酸的识别成本降低至5～10美元，他因发明PCR技术而荣获了诺贝尔奖。

（1）在DNA复制时，需要大量的________作为原料，在DNA聚合酶的催化作用下，以解旋后的单链为_____进行生物合成。

（2）在DNA分子解旋时，必须加热，普通的酶容易______，科学家从温泉中找到了耐95℃高温的_______，解决了酶重复使用的难题，使链式反应成为可能。每次循环可以分为变性、_________和延伸三步。

（3）耐高温酶的发现应用说明了地球生物_______的重要，大自然的________库是人类的宝贵财富。

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玉米是世界上的第三大粮食作物，广泛种植于世界各地。研究表明，转基因抗虫玉米中的细菌BT基因能表达一种毒蛋白，这种毒蛋白能有效杀死玉米螟（一种农业害虫）。请回答下列问题：

（1）BT基因在基因工程中称为_________。在基因表达载体中，除了要有BT基因外，还必须有启动子、终止子和______。若将BT基因插入到Ti质粒的_________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使其导入玉米细胞并将其插入到玉米细胞中的染色体上。

（2）PCR是利用__________ 的原理，在利用PCR技术扩增BT基因时，需要提供模板、原料、引物、______等条件，将模板DNA加热至90〜95℃ 的目的是__________。

（3）BT基因与载体结合过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。若某限制酶的识别序列和切点是，请画出目的基因被限制酶切割后所形成的黏性末端_______。DNA连接酶对所连接的两端碱基序列__________(填“有”或“没有”）专一性要求，定性地检测BT基因的“表达”产物可采用____________________的方法。

（4）为了防止抗虫玉米通过花粉传播带来的生态学问题，科研小组考虑将抗虫基因导入到玉米根尖细胞的__________中以防止基因污染，同时在大规模种植的抗虫玉米田中设置一个或多个避难所种植普通玉米，目的是_______________。

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应用生物工程技术可以获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

（1）①过程用到的“分子缝合针”，其对所“缝合”的DNA末端的碱基序列________（填“有”或“无”’）特异性的识别作用。③过程采用的技术除胚胎移植外还包括________。

（2）③过程培养到囊胚时，可以对其胚胎进行________分割，以期培育出多头相同的转基因牛犊。在胚胎移植前，可对囊胚的________细胞进行分行，以确定其性别。

（3）有人发现prG能激发细胞不断分裂，可以通过基因工程将该调控基因导入特定的受体细胞来制备单克隆抗体，受体细胞II最可能是________细胞，Ⅲ代表的细胞具有________的特点。

（4）在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是________。

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