尿素是一种重要的农业氮肥，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用回答下列问题...

请回答微生物的培养和应用的有关问题

尿素是一种重要的农业氮肥，但是，尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某研究人员尝试从土壤中对分解尿素的微生物进行分离与计数。

1.分解尿素的微生物中含有的酶是______________；为筛选出能分解尿素的微生物，配制培养基时应以______________作为唯一氮源，因此该培养基属于______________培养基。

2.该培养基在接种前应该用______________法灭菌。

3.对初步筛选得到的分解尿素的微生物进行纯化并计数，常用来统计样品中活菌数目的方法是____________________________。在接种前，随机取若干菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是__________________________________________。

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回答下列（一）、（二）小题

（一）尿素是一种农业上常用的高浓度氮肥，但尿素只有经土壤中某些细菌的分解后才能被植物吸收利用。某同学欲分离出土壤中能分解尿素的细菌，培养基配方如下：

（1）“无菌操作”是微生物培养的基本要求，该实验的培养基在配置时，应先对不含尿素的基本培养基进行_____________法灭菌，待冷却至60°C时，再加入经_____________的尿素溶液。

（2）土壤中能分解尿素的细菌通过____________分解尿素，该种菌对生态平衡所起的作用是___________．

（3）该同学_____________（“能”或“不能”）分离出该种菌。理由是____________。

（二）人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因羊的羊乳中获得（人染色体组成44+XX/YY,羊染色体组成40+XX/YY），流程如下：

（1）在上述基因工程中，获得htPA基因的方法最可能是_______________。基因工程的核心是_______________。

（2）图中①为体外受精，卵（母）细胞一般数量较多，是对供体母羊进行__________激素处理后采集到并培养使之成熟的，而B是经筛选过的、染色体组成为______________且达到_________状态的精子。③过程应将早期胚胎植入到代孕母羊的_________部位。

（3）下列关于胚胎工程的叙述中，错误的是（　 ）

A．体细胞核移植不属于胚胎工程研究的内容

B．图中①过程与体内受精的实质是相同的

C．图中的转基因羊也属于“试管动物”

D．胚胎工程打破了物种间远缘杂交不亲和的障碍

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尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：

(1)上图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步________到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有________________(写一种)。

(2)如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行________，灼烧的接种环冷    却后才能接种的原因是____________________________________________________________________。

(3)下面是两种培养基的配方：

表1：A培养基配方

表2：B培养基配方

①配制培养基的操作步骤________(用字母顺序回答)。

a．倒平板　     b．计算　       c．溶化　       d．称量　       e．灭菌

②通常培养基采用________________法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是____________________________。

③如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述________(A、B)配方的培养基，在该培养基中加入________指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。

④据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是________。

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尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：

（1）如图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有________（写一种）。

（2）如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作时，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行________。

（3）下面是两种培养基配方：

表1：A培养基配方

表2：B培养基配方

①配制培养基的操作步骤________（用字母顺序回答）。

a．倒平板

b．计算

c．溶化　

d．称量　

e．灭菌

②通常培养基采用____________法灭菌。

③如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述A配方的培养基，在该培养基中加入________指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。

（4）如果进一步从尿素分解菌中提取出DNA，利用PCR技术扩增，则每次循环复制可分为________三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成________。

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尿素是一种重要的农业氮肥，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图筛选出能高效降解尿素的细菌，设计了“土壤中分解尿素细菌的筛选与计数实验”，过程如下图所示：

（1）在接种前，进行①〜⑤系列操作的意图是___________。据题意，每次为使菌液稀释10倍，应加入的无菌水量是___________mL。

（2）为达到实验目的，本实验所配制的培养基成分不应包括__________________（填入下列序号），原因是______________________。

①水 ②无机盐（不含氮）③NH4NO3　 ④尿素　 ⑤葡萄糖　 ⑥牛肉膏　 ⑦蛋白胨 ⑧琼脂糖

（3）在微生物培养过程中，灭菌与消毒的主要区别是灭菌能够杀死物体内外________。常用________法对玻璃器皿进行灭菌。分离和鉴定尿素分解菌时，需在培养基中加入_________指示剂，尿素分解菌的菌落周围会出现红色。

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施加到土壤中尿素只有被尿素分解菌分解成氨之后，才能被植物吸收。下表所示配方的培养基可筛选尿素分解菌，它可以在该培养基上生长、形成菌落。请回答下列问题：

（1）该培养基从功能上看属于___________培养基。如果从土壤中获取的样本含尿素分解菌的数量较少，则需要对样本中的细菌进行扩大培养，不能用表格中的培养基，因为________________。

（2）如果对该细菌进行计数，则将得到的细菌用法接种。若实验中每个平板中的菌落数都超过了300，应对样本菌液进行_______________处理。

（3）甲、乙两位同学用（2）中方法测定土壤样品中尿素分解菌的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学在该浓度下涂布了1个平板，统计的菌落数为49；乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为43、54、287，然后取其平均值128作为统计结果。这两位同学的实验结果都是无效的，理由是：

①甲同学：______________________。

②乙同学：__________________。

（4）另一接种细菌的方法是．第二区域划线的起点是_____________。

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）巴氏芽孢杆菌是一类具有较高脲酶活性，能够分解尿素，并广泛分布在土壤、堆肥以及污水中的兼性厌氧性细菌，它在强碱性培养液中生长良好。这种细菌能够将氮肥中的尿素分解成氨态氮被植物吸收，对土壤的肥力有着重要的作用。请回答下列问题：

(1)一般巴氏芽泡杆菌从被称作“微生物天然培养基”的　　　　　 中分离出来的,可采用　　　　　　　　　　　　 的固体选择培养基，置于　　　　　　　　　　　　 中培养。

(2)培养瓶培养一段时间后,菌体会沉入下层,为了测定菌液中的活菌数一般采用　　　　　 法接种。吸取培养瓶中菌液时要先　　　　　　 ，如果没有进行这样的处理，直接吸取进行测量，会造成结果　　　　　　 ，原因是　　　　　　　　　　　　 。（至少写出两点）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

(3)实验结果表明,巴氏芽孢杆菌培养时单位体积培养液中菌体数随时间先增加后减少。培养后期巴氏芽孢杆菌数量急剧下降的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。（至少写出两点）

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尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，某同学试图从土壤中筛选出能高效降解尿素的细菌(目的菌)，表中所示是该同学配制的培养基成分：

(1)该培养基中的主要营养物质包括　　　　　　 。从物理性质上看，该培养基属于　 培养基。

(2)在微生物的培养中，一般要对配制的培养基采用高压蒸汽灭菌，其中“高压”是为了　　　　　　　　　　　 。

(3)若培养从土壤中分离出来的目的菌，该培养基成分如何调整？　　　　　　 　 　　　 ，依据是　　　　　　　　　　　　　　 。

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尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能很好地被植物利用。同学们设计了以下实验来探究土壤中微生物对尿素的分解作用，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分及操作过程如下所示。（10分）

回答问题：

（1）制备培养基的一般步骤：计算→称量→溶化→定容→调整PH→　　　　　　 →倒平板

（2）培养基的类型很多，但培养基中一般都含有　　　　　　　　 、氮源、水和无机盐，上述培养基中“目的菌”生长所需的碳源和氮源分别是　　　　　　　　 和　　　　　　　 ，从用途划分这种培养基属于　　　　　　

培养基，而从物理性质的角度划分属于　　　　　　　 培养基。

（3）分离纯化微生物最常使用的接种方法是__　　　　　　 __和___　　　　　　　 ___两种。

（4）为充分说明上表所示培养基具有选择作用，应配制牛肉膏蛋白胨培养基作为实验对照，如果该培养基上的菌落数明显　　　　　　　　 （选填“多于”或“少于” ）表中培养基中的菌落数目，说明表中培养基已筛选出一些目的菌。

（5）对分离的菌种进行鉴定时，需要在上述培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶 将尿素分解为氨，pH增高，使指示剂变　　　　　　　　　 。

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尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示，请分析回答问题：

（1）此培养基能否用于植物组织培养？_______，理由是__________。

（2）培养基中加入尿素的目的是_______，这种培养基属于_______培养基。

（3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_________和_________，实验需要振荡培养，原因是__________。

（4）转为固体培养时，常采用_________法接种，获得单菌落后继续筛选。
（5）下列材料或用具中：

①培养细菌用的培养基与培养皿；

②玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管；

③实验操作者的双手。

需要灭菌的是_________；需要消毒的是____________(填序号)。

（6）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有____________(填序号)

①由于土样不同　 ②由于培养基被污染　 ③由于操作失误　 ④没有设置对照

（7）在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_________，细菌体内的___________将尿素分解为氨， pH增高，使指示剂变红色。

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