人乳铁蛋白（hLF）对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性...

人乳铁蛋白（hLF）对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如下图，图中Ase I　 Nhe I、Sal I、BamH I代表相关限制酶切点，neo′为新霉素抗性基因，BLG基因为β-乳球蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答：

（1）过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR，是因为_________。在RT-PCR过程中，加入的引物需在5'端添加____________两种限制酶的识别序列，以便于hLF基因插入pEB中。

（2）过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是______________。过程③中，使用人工膜制成的脂质体将重组质粒导入受体细胞，依据的主要原理是_____________。

（3）将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，能够存活的细胞应该是导入____________的细胞，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中___________，以筛选出转染成功的细胞。

（4）要获得转基因山羊，还需要将成功表达hLF的乳腺上皮细胞的细胞核移植到山羊__________细胞中，再借助_____________技术孕育出羊羔。

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奶牛养殖业中乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽（抗细菌）和人干扰素（抗病毒）的双转基因奶牛新品种。下图1为基因表达载体，图2为培育流程。

（1）构建基因表达载体时要用到的工具酶是________。图1中新靑霉素抗性基因的作用是:_________。

（2）研究者利用含有乳铁蛋白肽基因和人干扰素基因的DNA片段分别制成探针，与乳腺细胞、口腔上皮细胞、蹄部细胞等提取的RNA进行杂交:结果如下表：

说明:牛乳铁蛋白肽基因只能在转基因奶牛的______________细胞中表达，人干扰素基因则可在转基因奶牛的___________细胞中表达，这与构建表达载体时___________的选择有关。

（3）图2中④是处于_______________（时期）的卵母细胞，而③一般选传代10代以内的细胞，理由是___________。

（4）不需要对重组胚胎性别进行鉴定，理由是：___________________________________________。

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奶牛养殖业中乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽（抗细菌）和人干扰素（抗病毒）的双转基因奶牛新品种。下图1为基因表达载体，图2为培育流程。

（1）构建基因表达载体时要用到的工具酶是_______________________。图1中新青霉素抗性基因的作用是_______________________。

（2）研究者利用含有乳铁蛋白肽基因和人干扰素基因的DNA片段分别制成探针，与乳腺细胞、口腔上皮细胞、蹄部细胞等提取的RNA进行杂交:结果如下表：

说明:牛乳铁蛋白肽基因只能在转基因奶牛的______________细胞中表达，人干扰素基因则可在转基因奶牛的___________细胞中表达，这与构建表达载体时___________的选择有关。

（3）图2中④是处于_______________（时期）的卵母细胞，而③一般选传代10代以内的细胞，理由是：___________________________________________________________________________。

（4）不需要对重组胚胎性别进行鉴定，理由是：____________________________________________。

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乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的危害奶牛养殖业的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽（抗细菌）和人干扰素（抗病毒）基因的双转基因奶牛品种。下图1为基因表达载体，图2为培育流程。请据图回答问题：

（1）构建基因表达载体时需要用到的工具酶是___________。

（2）基因表达过程包括___________，图1中一般能同时表达的基因是___________。新霉素抗性基因的作用是___________。

（3）图2中研究者可利用___________技术筛选出干扰素基因成功表达的胚胎进行移植。

（4）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图3可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取__________作为引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。若上图所示基因复制2次，则共需要这两种引物各___________个；PCR程序中“适温延伸”中的适温是___________酶的最适温度。

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乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的危害奶牛养殖业的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽(抗细菌)和人干扰素(抗病毒)基因的双转基因奶牛新品种。下图1为基因表达载体，图2为培育流程。

(1)培育双转基因奶牛涉及的生物技术有_______________________________________________(至少2项)。

(2)牛乳铁蛋白肽基因能在转基因奶牛的乳腺细胞中表达，人干扰素基因则可在全身细胞表达，这与构建表达载体时________的选择有关。据图可知，干扰素基因与____________基因可同时转录，基因工程过程中主要的工具酶有________________。

(3)将基因导入牛胎儿成纤维细胞前，需用________将其处理成单个细胞。成纤维细胞无法直接发育成个体，需要去核卵母细胞的细胞质诱导，以实现细胞核的________。

(4)研究者利用________________技术筛选出____________(填“牛乳铁蛋白肽”或“干扰素”)基因成功表达的胚胎进行移植。

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奶牛养殖业中乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽（抗细菌）和人干扰素（抗病毒）的双转基因奶牛新品种。如图为基因表达载体，如图为培育流程。回答下列问题：

（1）构建基因表达载体时要用到的工具酶是______。作为基因表达载体，除了目的基因外，还必须具有______（答出两点即可）。如图中新青霉素抗性基因的作用是______。

（2）如图中④是处于______（时期）的卵母细胞，而③一般选传代10代以内的细胞，理由是______，对于⑦在移植胚胎前要进行______处理。重组胚胎性别不需要进行鉴定的理由是______。

（3）研究者利用含有乳铁蛋白肽基因和人干扰素基因的DNA片段分别制成探针进行目的基因的检测与鉴定，首先与产下牛犊的乳腺细胞、口腔上皮细胞、蹄部细胞等提取的RNA进行杂交：结果如表：

根据以上结果可以得出结论为：______（答出两点）。

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乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的危害奶牛养殖业的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽(抗细菌）和人干扰素(抗病毒）的双转基因奶牛新品种。下图1为基因表达载体，图2为培育流程。

（1）培育双转基因奶牛涉及的生物技术有___________(至少2项）。

（2）牛乳铁蛋白肽基因能在转基因奶牛的乳腺细胞表达，人干扰素基因则可在全身细胞表达，这与构建表达载体时_____________的选择有关。据图可知，干扰素基因与___________基因可同时转录，但在翻译时，核糖体可识别mRNA上IRES序列的对应部分，启动另一种肽链的合成，因此用含有新霉素的培养基可筛选出__________。

（3）将基因导入牛胎儿成纤维细胞前，需用______________将其处理成单个细胞。成纤维细胞无法直接发育成个体，需要去核卵母细胞的细胞质诱导，以实现细胞核的_______________。

（4）研究者利用___________技术筛选出___________(填“牛乳铁蛋白基因”或“干扰素基因”)成功表达的胚胎进行移植。

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乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的危害奶牛养殖业的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽(抗细菌）和人干扰素(抗病毒）的双转基因奶牛新品种。下图1为基因表达载体，图2为培育流程。

（1）培育双转基因奶牛涉及的生物技术有___________(至少2项）。

（2）牛乳铁蛋白肽基因能在转基因奶牛的乳腺细胞表达，人干扰素基因则可在全身细胞表达，这与构建表达载体时_____________的选择有关。据图可知，干扰素基因与___________基因可同时转录，但在翻译时，核糖体可识别mRNA上IRES序列的对应部分，启动另一种肽链的合成，因此用含有新霉素的培养基可筛选出__________。

（3）将基因导入牛胎儿成纤维细胞前，需用______________将其处理成单个细胞。成纤维细胞无法直接发育成个体，需要去核卵母细胞的细胞质诱导，以实现细胞核的_______________。

（4）研究者利用___________技术筛选出___________(填“牛乳铁蛋白基因”或“干扰素基因”)成功表达的胚胎进行移植。

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乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的危害奶牛养殖业的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽(抗细菌）和人干扰素(抗病毒）的双转基因奶牛新品种。下图1为基因表达载体，图2为培育流程。

（1）培育双转基因奶牛涉及的生物技术有___________(至少2项）。

（2）牛乳铁蛋白肽基因能在转基因奶牛的乳腺细胞表达，人干扰素基因则可在全身细胞表达，这与构建表达载体时_____________的选择有关。据图可知，干扰素基因与___________基因可同时转录，但在翻译时，核糖体可识别mRNA上IRES序列的对应部分，启动另一种肽链的合成，因此用含有新霉素的培养基可筛选出__________。

（3）将基因导入牛胎儿成纤维细胞前，需用______________将其处理成单个细胞。成纤维细胞无法直接发育成个体，需要去核卵母细胞的细胞质诱导，以实现细胞核的_______________。

（4）研究者利用___________技术筛选出___________(填“牛乳铁蛋白基因”或“干扰素基因”)成功表达的胚胎进行移植。

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运用现代生物技术改良奶牛或肉牛可提高经济产值，请回答下列问题：

（1）科学家构建了含人乳铁蛋白（hLF）的基因表达载体，通过___________将其导入受体细胞而获得了转基因牛；构建上述基因表达载体时用同一种限制酶切割目的基因和运载体的理由是___________________________。

（2）科研人员从奶牛体内分离出乳腺细胞并进行细胞培养，培养液中加入血清、血浆的作用是__________________。而后取出乳腺细胞的细胞核并将其导入到_______________中以获取重组细胞。若获得的克隆牛与供体牛性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因最可能是_____________________________。

（3）获取试管牛需要进行体外受精，受精前需对精子进行获能处理，操作中可用激素对供体母牛进行_________________处理以增加排卵量。

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