科研人员利用农杆菌转化法将抗除草剂基因导入甘蓝，过程如图1所示，①-④为操作步骤，载体上B...

科研人员利用农杆菌转化法将抗除草剂基因导入甘蓝，过程如图1所示，①-④为操作步骤，载体上BamHⅠ、BglⅡ、EcoRI酶切位点唯一，识别序列和切割位点见表1。

（1）步骤①为__________，其目的是__________ 。

（2）若目的基因用BamH I和Bgl Ⅱ剪切，质粒用BamH I剪切，剪切后的目的基因和 质粒能连接在一起，原因是__________。酶切后的目的基因存在正向与反向两种连接方式，可用_____酶对两种重组质粒进行剪切，通过凝胶电泳分析产物大小进行区分，如图2所示，图中_____(样品1/样品2)为所需基因表达载体。

（3）步骤②用__________处理农杆菌后获得感受态细胞，以便将重组质粒导入。步骤③将农杆菌与甘蓝愈伤组织共培养后，在步骤④的培养基中添加__________以便筛选岀含目的基因的甘蓝植株。若要检测甘蓝是否具有抗除草剂的性状，需要在个体水平通过________进行检测。

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棉花种植过程中常因棉铃虫啃食叶片而减产。苏云金芽孢杆菌能产生具有杀虫能力的Bt 毒蛋白。科研人员将Bt 毒蛋白基因作为目的基因导入普通棉株细胞内， 培育出了能抗棉铃虫的转基因抗虫棉。下图为制备抗虫棉的基本流程，①～⑤表示相关的操作。请回答下列问题：

（1）步骤①中，利用 PCR技术扩增 Bt毒蛋白基因时，需要根据 Bt 毒蛋白基因两端的部分核苷酸序列设计___________。

（2）步骤②构建基因表达载体时需要用到 ECoR I 和 BamH I 两种_________酶对目的基因和质粒进行切割，酶切后形成的目的基因两端的黏性末端_____（填“相同”或“不相同”），以防止自身环化。切割后的产物还需要用____酶进行连接。

（3）步骤③中需先用____处理农杆菌以便将基因表达载体导入其中。

（4）步骤④中，可通过____技术检测愈伤组织细胞中是否含有 Bt毒蛋白，若未检测出 Bt 毒蛋白，则可能的原因是________。

（5）分别用普通棉花植株和转基因棉花植株的叶片饲喂棉铃虫，若出现_____结果，说明抗虫棉对棉铃虫表现出一定的抗性。

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土壤盐渍化影响水稻生长发育。科研人员将水稻耐盐基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育出了几株耐盐碱水稻新品种。其操作流程及相关限制酶识别序列和切割位点如下图，图中I～Ⅲ为限制酶的酶切位点，bar为抗除草剂基因，Kanr为卡那霉素抗性基因。请回答下列问题：

（1）催化过程①的酶是______________。过程②构建表达载体的作用是______________。过程③需要用______________处理根瘤农杆菌，使其成为感受态细胞。过程⑤中，首先诱导水稻愈伤组织经过______________过程形成胚状体或丛芽，进而发育成植株。

（2）过程①所用引物如下，为了便于耐盐基因 OsMYB56与质粒连接，则过程②使用的限制酶是 BamHⅠ和______________。

5′ CGCGGATCCATGAGAAAGGGCCCGTGG3′

5′ CGAGCTCCTATCCCCAGAGAGGTAGCGA3′

（3）质粒上的花椰菜病毒启动子含有______________识别和结合的核苷酸序列。

（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要利用分子杂交法检测耐盐基因OsMYB56是否导入成功，又要用______________方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。

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基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在实际操作过程中，不涉及碱基互补配对的步骤是

A．DNA合成仪人工合成基因                  B．基因表达载体的构建

C．农杆菌转化法导入受体细胞                D．目的基因的检测与鉴定

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科学家利用基因工程技术将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。在培养转基因番茄的过程中，下列操作不合理的是（　　 ）

A.可用PCR技术或逆转录法获得抗冻蛋白基因

B.利用选择性培养基对构建的基因表达载体直接筛选

C.利用农杆菌转化法将基因表达载体导入番茄体细胞

D.在低温条件下筛选已导入抗冻蛋白基因的番茄植株

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科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C导入番木瓜，培育出转基因抗病番木瓜，Ti质粒如图所示。下列叙述，正确的是（　　 ）

A.农杆菌的拟核DNA与番木瓜基因发生重组

B.构建重组质粒需要限制酶和DNA聚合酶

C.含重组Ti质粒的农杆菌具有四环素抗性

D.转基因抗病番木瓜不具有卡那霉素抗性

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运用转基因技术，将奶牛细胞中编码凝乳酶的基因转移到大肠杆菌细胞中，达到大规模生产凝乳酶的目的。如图表示用作运载体的质粒和目的基因所在DNA片段。下列操作与实验目的不符的是（　　 ）

A.用限制酶BamHⅠ、PstⅠ和DNA连接酶构建基因的表达载体

B.用含氨苄青霉素的培养基筛选出的即为导入目的基因的细菌

C.可用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞

D.用Ca2+处理大肠杆菌使其易于转化

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如图表示利用农杆菌转化法获得某种转基因植物的部分操作步骤。以下说法错误的是(　 )

A. 利用含有四环素的培养基可将含分子Ⅱ的细菌筛选出来

B. Ⅲ是农杆菌,通过步骤③将目的基因导入植株

C. ⑥可与多个核糖体结合,并可以同时翻译出多种蛋白质

D. ①过程的完成需要限制酶和DNA连接酶的参与

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如图表示利用农杆菌转化法获得某种转基因植物的部分操作步骤。以下说法错误的是

A．利用含有四环素的培养基可将含Ⅱ的细菌筛选出来

B．Ⅲ是农杆菌，通过步骤③将目的基因导入植株

C．⑥可与多个核糖体结合，并可以同时翻译出多种蛋白质

D．①过程的完成需要限制酶和DNA连接酶的参与

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如图表示的是利用农杆菌转化法获得某种转基因植物的部分操作步骤。以下说法错误的是

A. ⑥可与多个核糖体结合，同时翻译出多种蛋白质

B. Ⅲ是农杆菌，通过步骤③将目的基因导入植株

C. 利用含有四环素的培养基可将含分子Ⅱ的细菌筛选出来

D. ①过程的完成需要限制酶和DNA连接酶参与

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