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有机磷农药曾因残留时间短、易挥发、易因温度升高而降解等特点而广泛使用，但长期大量的使用会对环境造成很大的危害。科研工作者分离具有降解有机磷农药的微生物并对其降解效果进行研究。
一、实验材料
①土样：采集常年使用有机磷农药的麦田地、油菜地、菜园地、苎麻地的土壤。
②原料：有机磷农药敌敌畏乳油（分子式C4H7C2O4P）。
③培养基的主要成分：NaCl5．0g，NaNO310．0g，琼脂20．0g，水100mL，pH7．0~7．5
二、实验步骤
a．制备土壤溶液：各称5g不同土壤分别倒入带有玻璃珠的50mL无菌水中震荡制成10-1浓度土壤溶液
b．倒平板：将经过高压蒸汽灭菌的培养基冷却到60℃时加入不同浓度的敌敌畏乳油进行倒平板操作
c．接种：分别取不同土样、不同浓度的土壤溶液接种到培养基平板上。
d．培养和统计：结果如下表：
表：各样品在不同浓度农药中的培养结果
| 5P | 6P | 7P | 8P | 9P | 10P | 11P |
| 麦田 | 90 | 5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 菜园 | 98 | 23 | 8 | 6 | 2 | 0 | 0 |
| 油菜地 | 108 | 97 | 88 | 75 | 67 | 4 | 0 |
| 苎麻地 | 104 | 73 | 43 | 2 | 0 | 0 | 0 |
注：表中记录的是菌落数；P=g农药/1000mL培养基。
请回答下列问题：
（1）步骤a容器中玻璃珠的作用是________________。
（2）步骤b中制得的培养基从功能上说是一种_________________培养基，敌敌畏乳油可为微生物提供_______________。
（3）加入敌敌畏乳油是在培养基冷却到6℃而不是在高压蒸汽灭菌前的原因是___________。
（4）下图甲为某组实验的结果，推测该组接种时可能的操作失误是___________________；对该菌种进一步纯化，在制作乙平板的过程中，接种环共需灼烧___________次。
（5）根据上表的统计结果，四种不同的取样环境中，应选用______________样品中的微生物作为进一步筛选高效分解有机磷农药的菌株。
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有机磷农药使用不当有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，危害人类健康。某生物兴趣小组同学提出：土壤中可能存在高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题：
（1）在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是__________。若培养基需要调节pH，则应在灭菌之____(填“前”或“后”）调节。
（2）为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在被有机磷农药污染土壤中取样，并在培养基上添加适量的______________进行选择培养。分离纤维素分解菌，宜从富含纤维素的土壤中取样。纤维素分解菌之所以能够利用纤维素维素，是因为其细胞内含有纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少含有三种组分，即 __________________ 。前两种酶使纤维素分解成 ___________ ， 第三种酶将它分解成葡萄糖。
（3）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是____________________________________。
（4）若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用___________________直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目，当样品的___________足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的______________。用这种方法测定菌体密度时，实际活菌数量要比测得的数量多，是因为__________________________________。
（5）将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1L含20mg有机磷农药的相同培养液中培养（培养液中其他营养物质充裕、条件适宜），观察从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为32小时、45小时、16小时，则应选择微生物__________（填“甲”、“乙”或“丙”）作为菌种进行后续培养。
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传统食品发酵、环境污染治理等过程中都会有多种微生物的参与，在进行微生物培养过程中，为培养的微生物提供合适的营养和环境条件以及确保无处不在的其他微生物无法混入是操作过程中两个需要重点注意的问题。
（1）酸奶制作时常用的菌种是___________，培养该菌种时在培养基中除了加入所需的4种基本营养成分外还需要添加___________。
（2）进行倒平板操作时，倒平板的温度一般在50℃左右适宜，温度过高会烫手，温度过低__________。平板划线法不适合进行计数，只适用于微生物的提纯，并且在已划线的平板中__________区域的菌种最纯。
（3）不同的微生物培养的温度和时间往往不同，在培养箱中培养时细菌培养温度__________（填“高于”“低于”或“等于”）霉菌培养温度，培养时间_________（填“长于”或“短于”）霉菌培养时间。
（4）尿素分解菌经X射线照射后不能正常生长，添加某种维生素后才能正常生长，原因最可能是_________________________________________。
（5）若长期使用杀虫剂S（一种有机磷农药）可造成其在土壤中严重残留，而木霉能有效将其降解，若欲从该土壤中分离出木霉，该实验过程中“选择培养”这一步___________（填“可以”或“不可以”）省略。
（6）为了保持菌种的纯净，需要对菌种进行保藏，长期保存菌种可以采用__________的方法，放在__________℃冷冻箱中保存。
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有机磷农药是用于防治植物害虫的含磷有机化合物，广泛应用于农业生产中。有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，不少种类对人、畜的毒性极强。欲分离高效降解有机磷农药的微生物，做法错误的是（ ）
A.在被有机磷污染的土壤中取样，并在有机磷农药的培养基上培养
B.在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，以检测培养基灭菌是否合格
C.若要测定培养液中的菌体数，可选用血细胞计数板直接计数
D.制备固体培养基时加入的凝固剂是琼脂，若要调节pH，则应在灭菌之后调节
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毒死蜱（C9H11C13NO3PS）是一种有机磷杀虫剂，长期使用将导致土壤中农药残留严重．某研究小组从长期施药的韭菜温室土壤（偏酸性）里分离出能降解毒死蜱的，并对其降解特性进行初步研究．请回答：
（1）用于分离木霉菌种的培养基属于___培养基．配制此培养基时，应加入___作为唯一碳源．
（2）制备培养基的操作顺序是_____________________（用下列字母和箭头排序）
a.倒平板 b.计算 c.熔化 d.称量 e.灭菌
（3）接种前，将培养基在适宜温度下放置适当的时间，观察培养基______，以确定培养基是否被污染．
（4）为了统计木霉活菌的数目，应采用的方法是________，首先需将水样进行适当稀释，例如取水样 1 mL加入无菌水________mL 制备稀释倍数为 10 2 的稀释液，并照此依次制备更高倍数的稀释液。整个过程中，都要在________操作。 统计出0.2mL的稀释液在稀释倍数为105的平板上的平均菌落数为40个，则每mL样液中的菌落数为___个．用此法测定木霉数量，实际活菌数量要比统计的菌落数量___。
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毒死蜱（C9H11C13NO3PS）是一种有机磷杀虫剂，长期使用将导致土壤中农药残留严重。某研究小组从长期施药的韭黄温室土壤（偏酸性）里分离出能降解毒死蜱的木霉，并对其降解特性进行初步研究。请回答：
（1）按照培养基的功能划分，用于分离木霉菌种的培养基属于__________________培养基。配制此培养基时，应加入_________________作为唯一碳源。接种前，将培养基在适宜温度下放置适当的时间，观察培养基__________________，以确定培养基是否被污染。
（2）纯化木霉时，统计出0.2 mL的稀释液在稀释倍数为105的平板上的平均菌落数为40个，则每mL样液中的菌落数为__________个。用此法测定木霉数量，实际活菌数量要比统计的菌落数量__________，原因________________________________________________。
（3）探究pH对木霉降解毒死蜱活性的影响
①研究小组向不同pH的培养基中分别加入100 mg/L 毒死蜱，5天后检测毒死蜱的残留量（如图）。由图可推知：在偏酸性的土壤中，__________________________。
②研究小组向不同pH的培养基中分别加入100 mg/L 毒死蜱，再分别接种1 mL木霉悬液，混合均匀，5天后检测毒死蜱的残留量（如图）。在此韭黄温室土壤中，若要提高木霉对毒死蜱的降解活性，可对土壤作何处理？__________________________。
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有机磷农药是用于防治植物害虫的含磷有机化合物，广泛应用于农业生产中，有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，不少种类对人、畜的毒性很强。某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物，下列做法正确的是（ ）
A.在被有机磷农药污染的土壤中取样，并在添加有机磷农药的培养基上培养以获取相应的微生物
B.在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，以检测培养基平板灭菌是否合格
C.若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计
D.制备固体培养基时加入的常用凝固剂是琼脂；若培养基需要调节pH，则应在灭菌之后调节。
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有机磷农药是世界上生产和使用最多的农药品种，施用有机磷农药是控制农作物害虫和病虫媒昆虫的重要手段。有机磷农药残留日益成为主要的化学污染物之一，某科研小组从农药厂附近的土壤分离筛选出一株能高效降解有机磷农药的菌株JS018。请回答下列问题:
（1）在筛选过程中，应将土壤样品液接种于以______为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于______培养基。
（2）在培养菌株JS018的过程中，除考虑营养条件外，还要考虑________、________和渗透压等条件。
（3）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为28、256、312、198和191。该过程采取的接种方法是______，每克土壤样品中的细菌数量为______个。用此方法测得的细菌数可能比实际数目______。
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为修复长期使用农药导致有机物污染的农田，向土壤中投放由多种微生物组成的复合菌剂。下列相关叙述错误的是（ ）
A.加入菌剂可增加土壤中的物种多样性，提高土壤生态系统的自我调节能力
B.该菌剂减少了残留农药进入农作物，一定程度上阻碍了土壤中的物质循环
C.土壤有毒物质的减少有利于增加农田动物的种类，降低害虫的优势度
D.复合菌剂中的农药降解菌对农药的分解有助于生态保护
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（16分）有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示，请回答下列问题：
（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、氮源、________四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是__________。
（2）与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加植物激素，它们一般需要事先单独配置成______保存备用，MS培养基通常还要添加蔗糖，其作用是_______________________________。
（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________。
（4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是________，该实验设计是否合理？为什么？______________。