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中国是食醋酿造大国，有几千年的酿醋历史。但目前中国常用的醋酸杆菌菌株AS1.41产酸能力、酒精耐受性均有待提高。拟从醋醅中筛选高产酸、高耐酒精的醋酸菌， 过程如图1所示。
（1）试验中所用培养基均含有水、葡萄糖、酵母浸膏和酒精，其中葡萄糖可为醋酸菌的生长提供_________。配制分离培养基时，除营养物质外，还需要添加2%的碳酸钙和_____，以便观察醋酸与碳酸钙反应后菌落周围形成的透明圈。
（2）分离醋酸菌时，需将富集的醋酸菌培养液进行梯度稀释，采用_____法接种到分离平板上。30℃培养72h后，挑取透明圈_____的单菌落进行划线分离。分离出的单菌落接种到斜面培养基（含3%酒精）上并于4℃保藏。
（3）取保藏的三个菌株分别接种于发酵培养液（含5%酒精）中，30℃培养5d后测产酸量， 筛选出高产酸的醋酸杆菌J2菌株。将J2与AS1.41分别接种到含不同浓度酒精的培养液中，30℃培养24h后测定活菌数量，结果如图2。由图 2 可知，酒精可_____醋酸菌的生长。与 AS1.41 相比，J2 菌株对酒精的耐受性___________。
（4）获得 J2 菌株后，还可以采取_____的育种措施，进一步提高其酒精耐受性。
（5）筛选出 J2 菌株后，其高产酸特性的遗传是否稳定还需检测，请写出基本过程。_____
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菌种是影响果醋品质的关键因素之一，当前果醋生产使用的菌种通常是恶臭醋酸杆菌浑浊变种和沪酿1.01醋酸杆菌。不仅产酸能力、耐酒精能力都有待提高，而且发酵果醋形成的风味也不佳。某人进行了菌种的选育。使用的分离培养基配方如下：l％酵母膏，1％葡萄糖，1.5％碳酸钙，2％琼脂，pH=5.5。高压蒸汽灭菌，待其冷却为70℃后加入4％的无水乙醇和干热灭菌好的碳酸钙。
(1)果醋的生产中往往是先进行酒精发酵，原因是______________________________，果醋发酵时间大概需要__________天。
(2)分离培养基中加入无水乙醇的目的是______________________________。加入的酵母膏可以提供____________________等营养成分。按照物理性质分，属于__________培养基。
(3)得到的菌种进一步使用碱基类似物如2-氨基嘌呤、硫酸二乙酯等进行__________育种，希望选育出__________菌株。
(4)请推测醋酸杆菌发酵最适温度在__________℃。
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长期使用一种抗生素，治病效果会下降，这是因为
A. 病菌逐渐提高了对药的耐受能力
B. 抗生素诱发病菌突变产生抗药性菌株
C. 抗生素选择并保留抗药性菌株
D. 抗生素失效
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苹果醋是以苹果为原料，经酒精发酵，醋酸发酵酿制而成的一种营养丰富，风味优良的酸性饮品，请回答：
（1）将乙醇转化为醋酸的代谢反应是醋酸杆菌在___________、__________________环境条件下进行的。
（2）乙醇脱氢酶在醋酸发酵过程中对产酸的速率和产酸量起重要作用，可根据各种蛋白质分子的带电性质、____________、形状和大小不同进行电泳，将乙醇脱氢酶与其他蛋白质分子分离。
（3）为选育耐较高酒精和醋酸浓度的醋酸杆菌，需先将少量优质果醋样液转移到含较高酒精和醋酸浓度的增殖培养液中进行培养，然后对培养液进行稀释并接种到含有CaCO3不透明的固体培养基上，培养并筛选出符合要求的菌株，从功能上分析，上述增殖培养液是一种____________培养基，以筛选出能耐受______________________的醋酸杆菌。
（4）若要测定培养液中活菌数量，常用________________________进行接种并对菌落进行计数；除此之外，测定微生物数量的常用方法还有________________________。
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现代人吃什么都讲究纯天然，所以目前市场上果汁饮料、果酒、果醋越来越受到人们的青睐。请回答：
（1）在果汁加工过程中可添加_________酶提高出汁率和澄清度。
（2）苹果醋是最受欢迎的饮料之一，其生产过程中利用了__________的发酵作用，该过程需将温度控制在_______________
（3）喝剩的葡萄酒放置一段时间后变酸的原因是________________
（4）在果酒酿造过程中，如果果汁灭菌不严格，含有醋酸菌，在酒精发酵旺盛时，醋酸菌能否_________（填能或不能）将果汁中的糖发酵为醋酸。
（5）若要提高果醋的产量，发酵过程中关键要提供__________________等条件。
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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答：
(1)为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该将器皿__________________。下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙指示的结构依次是_____________________________________。
(2)在制作牛肉膏蛋白胨培养基时，要求将称好的牛肉膏连同________一同放入烧杯，加入少量的水，加热。
(3)用高压灭菌锅灭菌后的培养基，需要冷却到____℃左右时，才能用来倒平板。你可以用________________________方法来估计培养基的温度。
(4)取从自然界中采集的葡萄，然后在超净台上将葡萄置于0.1%__________水溶液中进行表面消毒5 min，再用________将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后进行纯化培养。下图甲是经上述纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序依次是__________(用编号表示)。研究者在经过甲接种后得到了一个经培养后菌落分布如图乙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是__________________________________________。
(5)下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配制的培养基配方，请指出其中的明显不足之处________。
| K2HPO4 | FeSO4 | MgSO4·7H2O | NaNO3 |
| 0.1 g | 0.001 g | 0.05 g | 0.3 g |
| KCl | 蔗糖 | 木糖 | 琼脂 | 蒸馏水 |
| 0.05 g | 3.0 g | 3.0 g | 2.0 g | 100 mL |
(6)在将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，并将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏________能力的酿酒酵母作为受体菌。
(7)将经上述流程培养获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试。随着发酵的进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能____________________，即说明所需菌株培育成功。
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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差．科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母．请分析回答下列问题：
（1）制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是 _________ ．
（2）取从自然界中采集的葡萄，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后按图甲所示过程进行酵母菌的纯化培养．图乙是经过图甲过程A 纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序依次是 _________ （用编号表示）．研究者在图甲过程C 的操作培养过程中，得到了一个经
培养后菌落分布如图丙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是 _________ ．
（3）将培养基上的酵母菌菌株转接到仅以 _________ 为碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵．
（4）从以上筛选得到的活酵母菌中提取DNA，利用PCR 技术大量扩增获得目的基因．若将1个目的基因分子复制10 次，则需要在缓冲液中至少加入 _________ 个引物．将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，然后将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏 _________ 能力的酿酒酵母作为受体菌．
（5）将经上述流程培育获得的转基因酿酒酵母接种在含 _________ 的培养基中进行酒精发酵能力测试．随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能 _________ ，即说明所需菌株培育成功．
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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差．科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母．请分析回答下列问题：
（1）制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是 _________ ．
（2）取从自然界中采集的葡萄，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后按图甲所示过程进行酵母菌的纯化培养．图乙是经过图甲过程A 纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序依次是 _________ （用编号表示）．研究者在图甲过程C 的操作培养过程中，得到了一个经培养后菌落分布如图丙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是 _________ ．
（3）将培养基上的酵母菌菌株转接到仅以 _________ 为碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵．
（4）从以上筛选得到的活酵母菌中提取DNA，利用PCR 技术大量扩增获得目的基因．若将1个目的基因分子复制10 次，则需要在缓冲液中至少加入 _________ 个引物．将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，然后将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏 _________ 能力的酿酒酵母作为受体菌．
（5）将经上述流程培育获得的转基因酿酒酵母接种在含 _________ 的培养基中进行酒精发酵能力测试．随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能 _________ ，即说明所需菌株培育成功．
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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答下列问题:
(1) 制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是 。
(2) 取从自然界中采集的葡萄，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后按图甲所示过程进行酵母菌的纯化培养。
图乙是经过图甲过程A 纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序依次是 (用编号表示)。研究者在图甲过程C 的操作培养过程中，得到了一个经培养后菌落分布如图丙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是 。
(3)将培养基上的酵母菌菌株转接到 的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA，经大量扩增获得目的基因。
(4)将目的基因连接到质粒上，该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏 能力的酿酒酵母作为受体菌。
(5)将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以 和 为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能 ，即所需菌株培育成功。
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常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答下列问题:
(1)制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是
_________________ ___________。
(2)取从自然界中采集的葡萄，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后按图甲所示过程进行酵母菌的纯化培养。
图乙是经过图甲过程A 纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序依次是________(用编号表示)。研究者在图甲过程C 的操作培养过程中，得到了一个经培养后菌落分布如图丙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是_____________________________。
(3)将培养基上的酵母菌菌株转接到仅以____ ____ 为碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。
(4)从以上筛选得到的活酵母菌中提取DNA ，利用PCR 技术大量扩增获得目的基因。若将1个目的基因分子复制10次，则需要在缓冲液中至少加入_____个引物。将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，然后将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏_______ _ 能力的酿酒酵母作为受体菌。
(5)将经上述流程培育获得的转基因酿酒酵母接种在含__________的培养基中进行酒精发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能_______ ______，即说明所需菌株培育成功。
培养后菌落分布如图丙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是