用噬菌体抗体库技术获得人的单克隆抗体，方法是将人抗体基因插入噬菌体载体，然后让该噬菌体感染...

用噬菌体抗体库技术获得人的单克隆抗体，方法是将人抗体基因插入噬菌体载体，然后让该噬菌体感染大肠杆菌，抗体可能和病毒蛋白以融合蛋白的形式附着在噬菌体表面，也可能通过大肠杆菌分泌出去。回答下列问题：

（1）获取人抗体基因时，可从人的___（填“B”“T” 或“体”）细胞中获取总RNA，逆转录成_________再通过__________扩增出抗体基因。在PCR反应体系中，加入dNTP （dCTP、dATP、dGTP和dTTP）的作用是_______________________________。

（2）在噬菌体抗体库的构建过程中，理论上可以不利用Ca2+处理大肠杆菌，依据是___________________。

（3）从噬菌体抗体库中筛选特异性抗体的方法是____________________。

（4）在抗体基因与噬菌体基因之间设计了一个终止密码子（UAG）的对应序列，部分终止密码子突变型的菌株在表达时，终止密码子（UAG）会被通读为谷氨酸（GAG），那么抗体基因的表达产物是__________（填“融合蛋白”或“分泌型抗体”）。

（5）与利用杂交瘤技术生产的单克隆抗体相比，用该技术省去了___________（步骤），使制备更简单易行。

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噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随噬菌体外壳蛋白基因的表达而表达，同时，外源蛋白或多肽随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。利用该技术可以获得单克隆抗体（最新技术）。请回答下列问题：

（1）传统单克隆抗体的获得需先对小鼠进行_________处理，整个过程中需要进行两次筛选，目的分别是_________、_________。

（2）噬菌体展示技术获得的抗体还可用于定量检测抗原，如双抗体夹心法，具体原理如下图所示：

分析上图可知，固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于不同抗体可与同一抗原表面的_________结合。该检测方法中，酶标抗体的作用是__________，可通过测定产物量来推测抗原量。

（3）单克隆抗体最广泛的用途是___________。

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噬菌体抗体库技术是指将人的全部抗体基因插入噬菌体的基因组中，然后让该噬菌体感染大肠杆菌，最终使抗体以复合蛋白的形式表达于噬菌体的表面，形成含有全套抗体谱的噬菌体抗体库。请问答下列问题：

（1）人体内的抗体在合成后，以_____________的方式分泌到内环境中。

（2）若要获取人的抗体基因，可以从细胞中提取相应的RNA，通过逆转录过程获取_____________片段，再合成目的基因。目的基因可以通过PCR技术扩增，PCR技术的全称是_____________。

（3）构建重DNA分子的目的是__________________________。在噬菌体抗体库的构建过程中，

_____________（填“需要”或“不需要”）利用CaCl2处理大肠杆菌以制备感受态细胞，理由是_____________。

（4）检测大肠杆菌转录出的相应RNA时，应先从细胞中提取其RNA，再以_____________为探针，与RNA杂交，该技术的原理是_____________。

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疫苗是终结病毒肆虐的有利武器，新冠病毒COVID-19主要通过其表面刺突蛋白与人体细胞膜上的ACE2蛋白结合实现感染。分析以下三种针对新冠病毒的疫苗和 抗体研发方法，回答相关问题。

（1）腺病毒载体重组疫苗是将刺突蛋白基因重组到改造后无害的腺病毒内，导入人体，在 体内产生刺突蛋白，刺激人体产生抗体。改造后的腺病毒载体应具备的条件是________（答岀两点）。与基因工程疫苗相比，腺病毒载体重组疫苗的优点体现在__________ 。

（2）疫情早期，由于缺乏特异性治疗感染的有效手段，血浆疗法成为治疗部分重症、危重 型患者的一丝希望。但康复患者的血浆抗体存在__________的缺点，使单克隆抗体药物 成为重要的研发方向。研究人员从小鼠的__________中提取免疫的B淋巴细胞，通过生物诱导剂__________使其与骨髓瘤细胞融合，融合成功的杂交瘤细胞还需要进行克隆化培养和__________，经多次筛选，才可以获得能分泌所需抗体的细胞。

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真核生物基因中通常有内含子而原核生物中没有，真核细胞中有切除内含子对应的RNA序列的机制而原核细胞没有。已知在人体中基因A（有内含子）可以表达出某种特定蛋白（简称蛋白A）。下列有关叙述错误的是（　　 ）

A.在人的基因组文库中获得的基因A，若以大肠杆菌作为受体细胞不能得到蛋白A

B.若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是蛋白A的抗体

C.若用家蚕作为表达基因A的受体，可以选择噬菌体作为基因A的载体

D.若检测转基因生物染色体的DNA上是否插入基因A，应采用DNA分子杂交技术

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为临床检测肿瘤坏死因子（TNF-α )，利用“噬菌体展示技术”获得TNF-α抗体，需要获得TNF-α抗体的基因片段，插入到噬菌体基因组中，经过筛选得到能正确表达TNF-α抗体的噬菌体，进行大量扩增。下列相关叙述不正确的是 （　　 ）

A.将TNF-α抗体的基因片段与噬菌体DNA重组需用限制酶和DNA连接酶

B.在细菌体内，噬菌体以自身氨基酸为原料合成TNF-α抗体

C.TNF-α抗体随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面

D.噬菌体通过侵染细菌繁殖，增殖速度快，更容易快速获得抗体

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下列关于基因工程技术应用的叙述中，错误的是（　　 ）

A.基因工程技术可定向改良农作物的某些品质

B.利用细菌代谢旺盛的特点生产基因工程药物

C.运用基因工程技术让牛合成并分泌人类抗体

D.噬菌体作为载体可以将重组 DNA 导入动物细胞获得转基因动物

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人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。下图为A型流感病毒PB1蛋白单克隆抗体的制备部分过程，请回答：

（1）若要在体外获得大量的PB1基因，常采用_________技术进行扩增。

（2）限制酶BamH I的识别序列和切点是－G↓GATCC－，在构建PB1基因表达载体过程中，所用的载体质粒上有该酶的一个切点。一个质粒分子经Bam H I切割前后，分别含有_______、_________个游离的磷酸基团。质粒被限制酶Bam H I切割后所形成的黏性末端是_______。

（3）过程④所用的促融方法是_________，获得的X是_________。

（4）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_________。

（5）对该传染病疑似患者确诊时，可以用图中的_________进行特异性结合检测。

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人类在预防与诊疗传染性疾病的过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，疫苗生产和抗体制备的部分流程如下图：

（1）过程①代表的是____________。

（2）过程③构建A基因重组载体时，必须使用限制性核酸内切酶和____________两种工具酶。由过程③构建A基因重组载体，其组成除了目的基因外，还必须有启动子、标记基因、_________以及复制原点等。

（3）过程④要检测A基因是否插入受体细胞的DAN上，常用的方法是________________法；要检测A基因在受体细胞内是否翻译出蛋白质，需用________________法。

（4）与血清抗体相比，单克隆抗体突出的优点是______、________、并能大量制备。

（5）单克隆抗体的制备过程中，运用了动物细胞工程中的_____________和____________两大技术。

（6）单克隆抗体的制备过程中，两次筛选的目的不同，第一次筛选的目的是筛选出______________，第二次筛选的目的是筛选出______。筛选时所用的培养基是特定的_______________培养基。

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图1表示抗体的基本结构，VL是轻链可变区，VH是重链可变区。不同抗体可变区不同。杂交瘤技术的出现使抗体的制备进入了单克隆时代，而20世纪90年代发明的噬菌体抗体库技术为单抗的制备开辟了全新领域。图2表示人源性噬菌体抗体生产过程流程图。

请回答下列问题：

（1）运用杂交瘤技术制备单克隆抗体，用特定的选择培养基筛选获得杂交瘤细胞后，再经过_________和__________，目的是筛选获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。与常规的血清抗体相比，单克隆抗体最大的优越性是___________________。

（2）在免疫过程中，需要向健康人体注射特定抗原（如乙肝疫苗），并且每隔一周重复注射一次，重复注射的目的是______________________________________。

（3）过程①使用了RT-PCR技术，与常规PCR技术相比较，RT一PCR增加了_____过程。

（4）从人源性噬菌体抗体生产过程分析，含抗体基因片段最终需要整合到_________中。

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