基因工程中，GUS基因编码的酶可将无色底物生成蓝色产物，GFP基因会产生绿色荧光蛋白，这两...

基因工程中，GUS基因编码的酶可将无色底物生成蓝色产物，GFP基因会产生绿色荧光蛋白，这两种基因都可作为标记基因来研究发育生物学的问题。利用双CRISPR/Cas9系统和Cre/loxP重组酶系统技术可更好地实现该研究。请据图作答：

（1）生长在太平洋西北部的一种海蜇能发出绿色荧光，原因是________________________。

（2）图1为双CRISPR/Cas9系统作用示意图。该系统能够特异性识别DNA序列并切割特定位点，行使这些功能的分子结构分别 是___________、___________。

（3）图中向导RNA与DNA结合的原理是___________。将删除区切割后，转入基因与原DNA片段可通过形成_______拼接起来，形成新的DNA序列。

（4）双CRISPR/Cas9系统可直接在靶细胞内起作用，与传统的基因工程相比，该操作无需___________（填写工具）。与质粒载体导入外源基因比，双CRISPR/Cas9系统编辑的基因可以不含___________。　　

（5）图2为Cre/loxP重组酶系统作用示意图。利用双CRISPR/Cas9系统可精准地将loxP序列、GUS基因及GFP基因连接，接上35S启动子之后可在组织中检测出蓝色区而无绿色荧光区，这是由于_________而无法表达。Cre基因是重组酶基因，经38℃热处理后可被激活表达，在此前提下组织中可检测出绿色荧光区。

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下列一般不作为基因工程中的标记基因的是（）

A．四环索抗性基因　　 　　　　 　　 　 B．绿色荧光蛋白基因

C．产物具有颜色反应的基因　 　　 　 D．贮藏蛋白的基因

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下列一般不作为基因工程中的标记基因的是（　 ）

A．四环素抗性基因　　　　　　　　　　　　 B．绿色荧光蛋白基因

C．产物具有颜色反应的基因　　　　　　 D．贮藏蛋白的基因

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2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（　 ）

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

③蓝色荧光蛋白基因的合成

④表达出蓝色荧光蛋白

A．②①③④ 　　 B．①②③④　　　　 C．②③①④ 　　　　 D．④②①③

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2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（　　 ）

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

③蓝色荧光蛋白基因的合成

④表达出蓝色荧光蛋白

A．②①③④ 　　 B．①②③④　 　　 C．②③①④ 　　　 D．④②①③

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下列一般不作为基因工程中的标记基因的是

A．四环素抗性基因

B．绿色荧光蛋白基因

C．产物具有颜色反应的基因

D．抗虫基因

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基因工程相关。2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来________，理由是：。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是________。

（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是，可以避免 。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：（用数字表示）。①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。

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日本下村修、美国沙尔非和钱永健因在发现绿色荧光蛋白（GFP）等研究方面作出突出贡献，获得诺贝尔化学奖。他们将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的GFP在紫外光的照射下会发出绿色荧光。绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是（　　）

A. 追踪目的基因是否导入受体细胞 B. 追踪目的基因在细胞内的复制过程

C. 追踪目的基因插入到染色体上的位置 D. 追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布

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(11分)．日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：

(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。获取绿色荧光蛋白基因常用的三种方法是____________­­__________________________。

图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：____________________________________。

(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。

(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。

(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)

④表达出蓝色荧光蛋白

(5)在培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和________等。

(6)以上培育过程中应用到的生物技术有__________________等。(至少答出三项)

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（8分）日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图．据图回答：

（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶I的识别序列和切点是—G’GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的过程：________________________                                   _________。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_______________                              ___。

（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_______________________。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（用数字表示）：_______   ________。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。

（5）在培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和___等。

（6）以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________等（至少答出2项）。

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