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(12分)下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8 Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度。请据图回答：
（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是 、 。
（2）如果是两两重组，可能有 种长度的重组结果。
（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用 酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和 kb，或者 kb和 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。
（4）将筛选含有目的基因的重组质粒导入大肠杆菌的载体可以是 （多选）。
A.质粒 B.动物病毒 C.噬菌体 D.植物病毒
（5）为了筛选出成功导入重组质粒的大肠杆菌，首先将大肠杆菌在培养基上培养，得到如图示1的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含 的培养基上培养，得到如图2的结果（空圈表示与图1对照无菌落的位置），挑选目的菌的位置为 。
（6）PvuⅠ能识别的序列和切点是–G↓GATCC–请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图。
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下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。复制原点是质粒能正常复制的必需组成。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lcZ为蓝色显色基因，lacZ正常表达菌落呈蓝色。EcoRⅠ、PvuⅠ为相应的限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点的距离，单位为kb(1kb=1000个碱基对)。回答下列问题：
（1）用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒________(填“质粒A”“质粒B”或者“质粒C”)，选择的限制酶是___________。
（2）转录的起始部位称为____________，是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶______________________的部位。
（3）如果选择的质粒与目的基因重组成功，并且在受体细胞中能正常表达，则所形成的重组质粒用EcoRⅠ完全酶切，并进行电泳观察，可出现的片段长度有_____________或____________。
（4）导入大肠杆菌后，为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，在普通琼脂培养基中还需加入_________，形成的菌落颜色为_____________。
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（8分）下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8 Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度。请据图回答：
（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是 、 。
（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到 酶。如果是两两重组，可能有 种长度的重组结果，。
（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用 酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和 kb，或者 kb和 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。
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（7分）下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8 Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度。请据图回答：
（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是 、 。
（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到 酶和DNA连接酶。
（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用 酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和 kb，或者 kb和 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。
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如图所示为A、B、C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。图中EcoR Ⅰ、Pvu Ⅰ为两种限制酶，质粒上限制酶括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。回答下列问题。
(1) 图中三种质粒中不能作为目的基因运载体的是________，理由是________、________。
(2) 在基因工程的操作过程中，需要检查目的基因是否重组到质粒中，应使用________酶切重组质粒，完全酶切后，进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.1kb和5.6 kb，或者________kb和________kb的片段，则可判断该重组质粒已与目的基因重组成功。
(3) 为研究目的基因D的功能，研究人员用下图所示的引物组合分别扩增D基因的D1片段、D3片段(DNA复制子链的延伸方向5′→3′)。
注：引物Ⅱ、Ⅲ上的x，y片段分别与N基因两端互补配对
用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增后，得到的绝大部分DNA片段是下图中的________。
a
b 
c
d
②将大量N基因片段与扩增得到的D1片段、D3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是________(填“D1－N”或“D1－D3一N”或“D3－N”或“D1－N—D3”)。
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如图所示为A、B、C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图。图1中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。图中EcoRⅠ、PvuⅠ为两种限制酶，质粒上限制酶括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。回答下列问题：
（1）图中三种质粒中不能作为目的基因运载体的是______，理由是______、______。
（2）在基因工程的操作过程中，需要检查目的基因是否重组到质粒中，应使用______酶切重组质粒，完全酶切后，进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.1kb和5.6kb，或者______kb和______kb的片段，则可判断该重组质粒已与目的基因重组成功。
（3）为研究目的基因D的功能，研究人员用图2所示的引物组合分别扩增D基因的D1片段、D3片段（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。
注：引物Ⅱ、Ⅲ上的x、y片段分别与N基因两端互补配对
①用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增后，得到的绝大部分DNA片段是图3中的______。
②将大量N基因片段与扩增得到的D1片段、D3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是______（填“D1-N”或“D1-D3-N”或“D3-N”或“D1-N-D3”）。
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如图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图．图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度．请据图回答：
（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是____________________，__________________。
（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到_____________________________酶．如果是两两重组，可能有_________________种长度的重组结果。
（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用_____________酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和____________kb，或者___________kb和__________kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。
（4）基因治疗包括___________________和_________________。
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下图为三种质粒和一个含目的基因的 DNA 片段，其中 Ap 为氨苄青霉素抗性基因，Tc 为四环素抗性基因，lacZ 为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。已知1 kb＝1000个碱基对的长度。请回答下列问题：
（1）片段 D 为目的基因中的某一片段，则限制酶和 DNA 连接酶的作用部位依次是_______________ 、______________（填图中数字标号））
（2）图中能作为目的基因运载体最理想的质粒是__________（填A/B/C））据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是______________、_________。
（3）如果将目的基因和质粒 A 构建重组质粒,然后再用 EcoRⅠ酶切这个重组质粒，进行电泳观察，可出现长度分别为 1.1 kb 和_________________kb 的两个片段，或者长度分别为___________kb 、_________kb的两个片段。
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下图为三种质粒和一个含目的基因的 DNA 片段，其中 Ap 为氨苄青霉素抗性基因，Tc 为四环素抗性基因，lacZ 为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。已知1 kb＝1000个碱基对的长度。请回答下列问题：
（1）片段 D 为目的基因中的某一片段，则限制酶和 DNA 连接酶的作用部位依次是_______________ 、______________（填图中数字标号））
（2）图中能作为目的基因运载体最理想的质粒是__________（填A/B/C））据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是______________、_________。
（3）如果将目的基因和质粒 A 构建重组质粒,然后再用 EcoRⅠ酶切这个重组质粒，进行电泳观察，可出现长度分别为 1.1 kb 和_________________kb 的两个片段，或者长度分别为___________kb 、_________kb的两个片段。
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如图为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段，其中ApR为氨苄青霉素抗性基因，TcR为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ(0.7 kb)、Pvu Ⅰ(0.8 kb)等为限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点的距离。已知1 kb＝1 000个碱基对，请回答下列问题：
(1)片段D为目的基因中的某一片段，则下列酶能形成或断裂图中②所示化学键的有_________(多选填字母)。
a、限制性核酸内切酶 b、DNA连接酶 c、Taq酶 d、解旋酶 e、DNA水解酶
(2)若想获得大量的目的基因，可采用________法进行扩增，含目的基因的DNA片段共经过______次循环后刚好能形成等长的目的基因片段，复制n次需要提供特异性引物对______对。
(3)图中作为目的基因运载体最理想的质粒是________(填“A”“B”或“C”)，请据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是________________________________
(4)用EcoR Ⅰ全酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒，并进行电泳观察，可出现长度分别为1.1 kb和______kb的两个片段，或者长度分别为_________的两个片段(重组质粒上目的基因的插入位点与EcoR I的识别位点之间的碱基对忽略不计)。
(5)将分别用限制酶Pvu Ⅰ切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作，则受体细胞的类型（对抗生素表现出抗性R或敏感性S，蓝白代表菌落颜色）包含________(多选填字母)。
A．ApR、蓝色 B．ApR、白色 C．ApS、蓝色 D．ApS、白色
b 
c
d